乳腺癌超聲SWE技術分析及其與ER、PR、Ki-67表達和分子分型的相關性

王燕 方開峰 俞秋雨

[摘要] 目的 探討乳腺癌超聲剪切波彈性成像（SWE）技術分析結果及其與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67抗原表達和分子分型的相關性。 方法 選取2017年6月—2019年10月安徽省宿州市皖北煤電集團總醫院收治的100例經病理證實的乳腺癌患者作為研究對象。在對患者進行治療前先行常規檢查與SWE檢查，以獲取患者病灶SWE技術分析結果。術后對所有患者的腫塊組織分級、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67抗原表達水平和分子分型進行觀察記錄，分析研究術前SWE技術分析結果與術后患者ER、PR、Ki-67抗原表達水平和分子分型的相關性。 結果 腫塊大小、Ki-67抗原表達、組織分級與彈性最大值平方根[Sqrt（Emax）]、彈性最大值平方根[Sqrt（Emean）]和彈性比對數[Log（Eratio）]比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。而ER表達、PR表達、人表皮生長因子受體-2（HER-2）表達及分子分型與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。腫塊大小、Ki-67抗原高表達與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）存在相關性（P < 0.05），但與Log（Eratio）無相關性（P > 0.05）;腫瘤組織分級情況與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）、Log（Eratio）無相關性（P > 0.05）。 結論 SWE彈性參數能在一定程度上反映患者乳腺癌的生物學特征，且腫塊越大，SWE彈性值越高，Ki-67抗原表達程度越高。

[關鍵詞] 乳腺癌;超聲多普勒;剪切波彈性成像;雌激素受體;孕激素受體;Ki-67;分子分型

[中圖分類號] R737.9 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）09（b）-0021-05

[Abstract] Objective To explore the analysis results of breast cancer ultrasound shear wave elastography （SWE） technical analysis and its correlation with estrogen receptor （ER）， progesterone receptor （PR）， Ki-67 antigen expression and molecular typing. Methods From June 2017 and October 2019， 100 patients with pathologically confirmed breast cancer who admitted in Wanbei Coal and Electricity Group General Hospital of Anhui Province were selected as research objects. Before the treatment， routine examination and SWE examination were performed in order to obtain the results of SWE technical analysis of the patients′ lesions. Postoperatively， the tumor tissue grade， ER， PR， Ki-67 antigen expression level and molecular typing of all patients were observed and recorded， and the correlation between the results of SWE technical analysis before operation and the expression levels of ER， PR， Ki-67 antigen and molecular typing in postoperative patients were analyzed. Results The differences of tumor size， Ki-67 antigen expression， tissue grade and elastic maximum square root [Sqrt（Emax）]， elastic maximum square root [Sqrt（Emean）] and elastic ratio number [Log（Eratio）] were statistically significant （P < 0.05）. However， there were no significant differences between ER expression level， PR expression level， Human epidermal growth factor receptor-2 （HER-2） expression level， molecular typing and Sqrt（Emax）， Sqrt（Emean）， Log（Eratio）（P > 0.05）. The tumor size and Ki-67 antigen expression were correlated with Sqrt（Emax） and Sqrt（Emean） （P < 0.05）， but not with Log（Eratio） （P > 0.05）. There were no correlation between tumor tissue grade and Sqrt（Emax）， Sqrt（Emean） and Log（Eratio） （P > 0.05）. Conclusion SWE elasticity parameter can reflect the biological characteristics of breast cancer to a certain extent. The larger the mass， the higher the SWE elasticity value， and the higher the expression of Ki-67.

[Key words] Breast cancer; Ultrasound Doppler; Shear wave elastography; Estrogen receptor; Progesterone receptor; Ki-67; Molecular typing

乳腺癌是目前臨床上發病率較高的惡性腫瘤，隨著我國臨床醫學和腫瘤治療研究地不斷發展，乳腺癌患者的治療情況和生存情況均得到顯著改善，關于乳腺癌的研究重點也開始從治療方法和藥物療效向免疫組化和預后指標方面轉變[1-2]。以往研究顯示[3-4]，乳腺癌腫塊大小及組織分級是患者治療及預后的重點預測指標，但關于腫瘤組織的生物學指標情況依然需要對患者進行穿刺活檢或術后病理分析，此類有創檢查可重復性較低，且其提供的信息有限。剪切波彈性成像（SWE）是近年來超聲影像診斷中新興的技術，其能夠依靠超聲剪切波獲得被檢查部位病灶硬度的實時數據，具有操作簡便性和可重復性，在乳腺癌患者的診斷和病情預后評估上均有相當的應用價值[5]。從現有研究來看[6-7]，許多學者集中于觀察超聲SWE與腫瘤分期、腫瘤組織大小之間的關系，但患者預后不僅與腫瘤分期、大小有關，還與各類免疫組化指標、分子分型有關。本研究擬對乳腺癌超聲SWE的彈性參數結果與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67抗原和不同分子分型的相關性展開前瞻性研究，現將研究結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月—2019年10月安徽省宿州市皖北煤電集團總醫院（以下簡稱“我院”）收治的100例（103個病灶腫塊）經病理證實的乳腺癌患者為研究對象。納入標準：①入院初步檢查時存在乳腺實性腫塊者;②經乳房影像報告和數據系統檢測診斷為4級及以上[8]，可能存在惡性病變者;③擬接受穿刺活檢及手術切除治療者。排除標準：①經病理證實為非乳腺癌腫塊或患者病理結果不完整者;②擬接受放射治療或化學治療者;③妊娠期或哺乳期婦女;④病歷資料缺失或術后失訪者;⑤入院檢查前曾接受乳腺癌相關治療者。本研究經我院醫學倫理委員會批準，患者本人及家屬均對研究內容知情同意且簽署相關文書。患者均為女性;年齡27～89歲，平均（49.88±11.56）歲;病程4～13個月，平均（5.51±1.43）個月。

1.2 方法

所有患者均于入院后手術治療前接受常規超聲影像檢查及SWE檢查。采用西門子S3000、S2000型彩色超聲診斷儀及9L4探頭作為檢查儀器，設置線陣探頭頻率為4～9 MHz，檢測工作均由1名具有豐富乳腺癌超聲檢查經驗的醫師獨立完成。具體檢查方法為：①首先對患者乳腺病灶處行常規超聲檢查。患者取仰臥位，對其病側乳房（或雙側乳房）病灶徑線進行3次記錄，以3次記錄中的最大值為最終病灶大小。②將儀器轉換為彈性成像模式進行SWE檢查。囑患者屏氣，利用探頭在不加壓的情況下平掃病灶，同一切面需進行2次以上掃描，每次掃描需持續5 s以上，以獲得穩定清晰的橫縱切面實時彈性圖像，掃描完成后獨立建檔存儲以備后期閱片。檢查時若發現病灶處未對皮膚或肌層造成侵犯，利用SWE方形取樣框時應避開皮膚或肌層等無關區域。利用Q-Box定量測量工具對圓形感興趣區（直徑=2 mm）進行檢測和測量，取多個切面的平均值以獲得最終的彈性最大值（Emax），彈性平均值（Emean）和彈性比（Eratio）。所有患者均接受術前穿刺活檢或術后臨床病理學檢查，病理學檢查結果由院內臨床病理科負責分析完成且由病理科醫師獨立作出判斷和結論。

1.3 觀察指標及檢測方法

1.3.1 免疫組化 ?通過免疫組化法檢測患者ER、PR、人表皮生長因子受體-2（HER-2）及Ki-67抗原的表達情況。利用Envision二步檢測法進行免疫組化指標檢測，組織切片脫蠟后入水，放入EDTA二鈉修復液后進行高壓鍋抗原修復，磷酸緩沖液沖洗后加入一抗，低溫環境下過夜;隔天磷酸緩沖液沖洗后加入二抗，37℃環境下保持1 h，再次沖洗后加入顯色液，觀察信號表達情況后終止染色，及時進行脫水透明并封片。

檢測試劑和抗體：兔抗人單克隆抗體（上海研生生化試劑有限公司，貨號：E-AB-22013）、Western blot二抗試劑盒（上海研生生化試劑有限公司，貨號：E-AB-1056）、Envision一抗通用免疫組化檢測試劑（廣州泛思生物科技有限公司，貨號：GK500705）;同時采用Keyence公司生產的高速數碼顯微系統完成切片觀察和圖像觀察工作。

判讀標準：當腫瘤細胞核染色≥10%時，認為ER、PR陽性表達;染色陽性細胞比例<14%時，認為Ki-67抗原呈低表達，染色陽性細胞比例≥14%時，認為Ki-67抗原呈高表達。根據細胞膜分子的染色強度進行判斷，當染色比例強度≥10%判斷HER-2的表達情況，表達0、1+者為HER-2陰性;表達2+者繼續行原位雜交檢驗，當基因出現擴增認為HER-2陽性，基因未出現擴增認為HER-2陰性;表達3+者為HER-2陽性。

1.3.2 腫塊分子分型及組織分級判讀標準 ?①根據《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范》[8]中的分子分型標準對腫塊分子分型進行判斷。當患者腫塊組織ER或PR陽性表達，且PR為高表達（≥20%），HER-2陰性表達，Ki-67抗原低表達，認定分型為Luminal A型;當患者腫塊組織ER或PR陽性表達，HER-2陰性表達，Ki-67抗原高表達或PR低表達，或HER-2陽性表達，Ki-67抗原水平任意時，認定分型為Luminal B型;當患者腫塊組織ER或PR陰性表達，HER-2陽性表達時，認定分型為HER-2過度表達型;當患者腫塊組織ER、PR、HER-2均為陰性表達時，認定分型為Basal-like型。②根據WHO的乳腺癌組織學分類[9]對患者的腫瘤組織情況進行分級，按照腺管形成類型、細胞異型性和核分裂情況評定等級（Ⅰ～Ⅲ級）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗;多因素分析采用多元線性回歸分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SWE參數與各指標間的單因素分析

腫塊大小、Ki-67抗原表達、組織分級與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。而ER表達、PR表達、HER-2表達及分子分型與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 SWE參數與各指標間的多因素分析

腫塊大小、Ki-67抗原高表達與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）存在相關性（P < 0.05），但與Log（Eratio）無相關性（P > 0.05）;腫瘤組織分級情況與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）、Log（Eratio）無相關性（P > 0.05）。見表2。

3 討論

乳腺癌的發生機制尚不明確，但癌癥的免疫組化研究與生物基因研究提示，乳腺癌的發生往往會引起生物學指標和免疫組化指標的變動，由癌癥引起的炎性因子水平改變和基因表達異常，還會進一步導致癌細胞的增殖[10-12]。因此，對乳腺癌患者的臨床生化指標檢測開展相關性研究，對于患者的預后評估具有重要意義，能為乳腺癌患者的治療、生存預后情況進行有效指導。

傳統乳腺癌患者的生存預后評價主要通過患者的腫瘤大小、腫瘤組織分級等基礎資料進行評估[13-14]，但此類指標主要反映患者的病情進展情況，而患者的生存預后情況受各類因素影響，簡單通過此類指標進行預后判斷效果較差。SWE是近年來超聲影像學中應用較多的一種彈性成像技術[15-16]，其能通過實時測定腫瘤組織的彈性參數來反映腫瘤組織表面的硬度及癌細胞增殖情況，相較于其他彈性成像技術的測定效果，SWE所涉及的多方面參數Sqrt（Emax），Sqrt（Emean）和Log（Eratio）對受檢區域和組織的彈性狀況均有全面的反映。國內外現有的SWE技術與癌癥生化指標之間的分析多為單中心、單指標回顧性研究[17-19]，且多集中在對Emax指數的變化展開研究，而未對SWE其他參數及患者腫瘤的組織分級和分子分型展開綜合研究。本研究通過對100例乳腺癌患者展開SWE成像數據檢測和分析，為乳腺癌的診治和患者的生存預后評估提供指導和參考。

本研究結果顯示，患者腫瘤的腫塊大小在SWE的各成像數據間均有重要影響，單因素分析可見，腫塊大小與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異有統計學意義（P < 0.05）;多因素分析顯示，腫塊大小與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）存在相關性（P < 0.05）。提示腫塊大小會影響腫瘤組織的硬度，腫塊越大則會加劇組織周圍的結締增生反應，而較多結締組織的生成伴隨血管間質、腫塊和癌細胞的生成，從而在一定程度上增加組織的硬度[20-21]。

本研究結果顯示，ER表達、PR表達、HER-2表達及分子分型與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異無統計學意義（P > 0.05），與梁銘等[22]、劉瑾瑾等[23]的研究結果一致。ER、PR陰性表達的腫瘤組織往往體積較大，血管間質存在水腫傾向，其SWE參數會隨之發生變化，但造成患者腫瘤組織硬化的因素較多，血管微鈣化與局部組織血管密度增加也會增加局部組織的硬度[24]。因此，ER、PR、HER-2表達及腫瘤組織分子分型對SWE的參數變化相關性不存在直接關系，其干擾因素較多，有待在今后開展進一步研究。

本研究結果顯示，Ki-67抗原表達與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）和Log（Eratio）比較，差異有統計學意義（P < 0.05）;多因素分析顯示，Ki-67抗原高表達與Sqrt（Emax）、Sqrt（Emean）存在相關性（P < 0.05）。Ki-67抗原能在很大程度上反映癌細胞表達和增殖的惡性程度，癌細胞的增殖會使腫瘤組織局部不斷向周圍組織、細胞發生侵襲和粘連[25-26]，從而使腫瘤組織的硬度增加，從SWE數據的變化上可以進行有效分辨，與肖祎等[27]的研究結果一致。

綜上所述，SWE彈性參數能夠在一定程度上反映患者乳腺癌的生物學特征，腫塊越大，SWE彈性值越高，患者腫塊越硬，Ki-67抗原表達程度越高;但其與ER、PR及腫瘤組織分子分型等指標之間關系尚不明確，有待未來在研究中進一步觀察。

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（收稿日期：2020-06-22）