內分泌治療激素受體陽性乳腺癌的效果及其與ESR1基因位點的關系

顧兵 吳旦平 張晶晶

[摘要] 目的 研究內分泌治療激素受體陽性乳腺癌的效果及其與雌激素受體1基因（ESR1）單核苷酸多態性位點（rs2077647和rs3798759）的關系。 方法 選擇2014年1月—2018年12月于江蘇省常熟市第五人民醫院收治的86例激素受體陽性乳腺癌患者為研究對象，均接受內分泌治療，并接受ESR1單核苷酸多態性位點（rs2077647和rs3798759）檢測。分析內分泌治療后短期療效，并觀察其與ESR1單核苷酸多態性位點的關系。 結果 86例患者內分泌治療后完全緩解、部分緩解、疾病穩定共45例，均歸入ETR組;疾病進展41例，歸入ETNR組。ETR組rs2077647位點基因型為CC型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點基因型為TT型者占比顯著低于ETNR組（P < 0.05），且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ETR組rs2077647位點等位基因為C者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點等位基因為G者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ESR1基因多態性是患者內分泌治療效果的獨立影響因素（P < 0.05）。 結論 內分泌治療激素受體陽性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態性位點（rs2077647和rs3798759）密切相關。

[關鍵詞] 內分泌治療;激素受體;乳腺癌;雌激素受體1基因

[中圖分類號] R737.9 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）09（b）-0026-04

[Abstract] Objective To study the effect of endocrine therapy on hormone receptor positive breast cancer and its relationship with ESR1 gene locus （rs2077647 and rs3798759）. Methods Eighty-six patients with hormone receptor positive breast cancer admitted to the Fifth People′s Hospital of Changshu City in Jiangsu Province from January 2014 to December 2018 were selected as study objects. All patients were treated with endocrine therapy and ESR1 single nucleotide polymorphisms （rs2077647 and rs3798759） were detected. The short-term efficacy of endocrine therapy was analyzed and its relationship with ESR1 single nucleotide polymorphisms was observed. Results Forty five patients of 86 patients with complete remission， partial remission and stable disease after endocrine therapy were included in ETR group， 41 patients with disease progression were classified into ETNR group. The proportion of genotype CC at rs2077647 in ETR group was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）， the proportion of TT genotype of rs3798759 was significantly lower than that of ETNR group （P < 0.05）， and the proportion of TG genotype was significantly higher than that of ETNR group （P < 0.05）. The proportion of allele C at rs2077647 in ETR group was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）， and the proportion of allele G at rs3798759 was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）. ESR1 gene polymorphism was an independent factor affecting the effect of endocrine therapy （P < 0.05）. Conclusion The effect of endocrine therapy on hormone receptor-positive breast cancer is closely related to ESR1 single nucleotide polymorphisms （rs2077647 and rs3798759）.

[Key words] Endocrine therapy; Hormone receptor; Breast cancer; Estrogen receptor 1 gene

據報道，近年來乳腺癌發病率呈逐年增長趨勢，約75%的患者孕激素受體或雌激素受體呈陽性，而經后續強化輔助內分泌治療可降低患者復發風險，延長無病生存期與總生存期[1-3]。尤其針對雌激素受體陽性早期乳腺癌患者，行內分泌治療后可降低50%左右的復發風險[4]。絕大部分雌激素受體陽性乳腺癌患者雖可從內分泌治療中獲益，但治療過程中會出現內分泌治療耐藥，影響臨床療效[5]。而雌激素受體1基因（ESR1）異常是誘發內分泌治療耐藥常見原因之一[6]。但目前臨床多側重于研究ESR1基因突變與乳腺癌內分泌治療耐藥的相關性，鮮有報道分析內分泌治療激素受體陽性乳腺癌的效果及其與ESR1單核苷酸多態性位點的關系[7]。因此，本文展開相關研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月—2018年12月于江蘇省常熟市第五人民醫院收治的86例激素受體陽性乳腺癌患者為研究對象，年齡18～52歲，平均（42.33±8.16）歲。納入標準：入院后確診[8]，未發現遠處轉移;激素受體陽性，孕激素受體或雌激素受體呈陽性;腋窩淋巴結陰性（前哨或腋清）;年齡≥18歲，均為絕經前初治患者;臨床資料完整。排除標準：嚴重心、腎等重要臟器功能不全;男性乳腺癌，或轉移性、家族性乳腺癌;其他惡性腫瘤;精神障礙、心理障礙病史;對本研究藥物過敏者。

1.2 方法

1.2.1 內分泌治療

口服他莫昔芬（蘇州第壹制藥，生產批號：100930，規格：10 mg/片），10 mg/次，2次/d，持續治療12周。

1.2.2 ESR1單核苷酸多態性位點檢測方法

1.2.2.1 主要儀器與試劑 ?主要儀器包括UNOⅡ48型聚合酶鏈反應（PCR）擴增儀（德國Biometra公司）、7000型熒光定量PCR儀（美國ABI公司）、Je1 Doc 2001型凝膠成像系統（美國Biorad公司）。微量DNA提取試劑盒由杭州新景生物試劑開發有限公司提供（貨號：3102050），Tag DNA聚合酶由上海嶸崴達實業有限公司提供（貨號：羅氏4738225001），PCR試劑盒由北京百奧萊博科技有限公司提供（貨號：YT381-CLI）。

1.2.2.2 檢測方法 ?取全血100 μL，提取DNA后行PCR擴增體系及循環體系設計。反應條件：95℃ 5 min;93℃55 s，58℃ 40 s，72℃ 45 s，持續35個循環;72℃ 10 min。PCR反應體系：總體積25 μL，含Tris-HCl（pH 8.3）10 mmol/L、MgCl2 1.5 mmol/L、KCl 1.5 mmol/L、dNTP 200 mmol/L、上下游引物各15 pmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U和基因組DNA 20～40 ng。行PCR-限制性片段長度多態性基因分型，酶切反應體系20 μL，PCR產物8～17 μL，BSA 0.2 μL，10×Buffer 2.0 μL，限制性內切酶0.7 μL，滅菌雙蒸水按照PCR產物量補足體系;37℃恒溫箱孵育5 h，瓊脂糖凝膠分離，110 V電壓電泳40～50 min，行反應產物檢測，后將凝膠電泳圖像輸入凝膠電泳成像系統，鑒定基因型結果。ESR1單核苷酸多態性位點包括rs2077647（基因型TT、CT、CC）和rs3798759（基因型TT、TG、GG），均存在2個等位基因，前者為等位基因T、C，后者為等位基因T、G。

1.3 觀察指標

分析內分泌治療效果并分為內分泌治療有效（ETR）組和內分泌治療無效（ETNR）組，觀察其療效與ESR1基因位點的關系。療效判定參考WTO實體瘤療效評價標準[9]，包括完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）、疾病進展（PD），其中CR、PR、SD均歸入ETR組，其余納入ETNR組。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件處理數據，計數資料以百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或校正χ2檢驗;等級資料組間比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗;計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;多因素logistic回歸分析法分析激素受體陽性乳腺癌患者短期內分泌治療效果的獨立影響因素。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床療效分析

86例患者內分泌治療后CR 2例，占2.33%;PR 26例，占30.23%;SD 17例，占19.77%，均歸入ETR組。PD 41例，占47.67%，歸入ETNR組。

2.2 兩組患者基線資料比較

兩組腫瘤大小、TNM分期及淋巴結轉移比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.3 兩組患者ESR1單核苷酸多態性位點檢測結果比較

ETR組rs2077647位點基因型為CC型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點基因型為TT型者占比顯著低于ETNR組（P < 0.05），且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ETR組rs2077647位點等位基因為C者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點等位基因為G者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。見表2～3。

2.4 影響激素受體陽性乳腺癌患者內分泌治療效果的多因素logistic回歸分析

以內分泌治療后短期療效為因變量，將上述有差異的單因素作為自變量，對各變量進行賦值（腫瘤大小<3.5 cm = 0，≥3.5 cm = 1;TNM分期Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3;有淋巴結轉移=1，無淋巴結轉移=0;ESR1各等位基因不含該等位基因者=0，含該等位基因者=1），納入多因素logistic回歸統計分析。腫瘤大小、TNM分期、淋巴結轉移、ESR1基因多態性均為影響患者內分泌治療效果的獨立影響因素（P < 0.05）。見表4。

3 討論

目前，他莫昔芬被認為是治療絕經前激素受體陽性乳腺癌的標準一線內分泌治療方案，主要經自分泌或旁分泌機制干擾腫瘤細胞分泌生長因子及血管生成因子，于乳腺組織中形成雌激素拮抗效應，并與雌激素受體競爭性結合雌激素，經中斷與生長停滯及細胞凋亡相關的雌激素，最終實現抗腫瘤目的[10-12]。陳嵐等[13]發現，他莫昔芬治療雌激素受體陽性乳腺癌有效率為32.56%，控制率達51.16%，與本結論（52.33%）相似，證實他莫昔芬治療該病療效確切。近年來，已有大量單核苷酸多態性被證實可作為藥物反應標記用于臨床藥物治療指導，但鮮有報道分析內分泌治療激素受體陽性乳腺癌的效果及其與ESR1單核苷酸多態性位點的關系[14-15]。

本研究發現，ETR組rs2077647位點基因型為CC型者占比明顯高于ETNR組，rs3798759位點基因型為TT型者占比明顯低于ETNR組，且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組;而ETR組rs2077647位點等位基因為C者占比明顯高于ETNR組，rs3798759位點等位基因為G者占比明顯高于ETNR組，證實內分泌治療激素受體陽性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態性位點密切相關。研究發現，乳腺癌他莫昔芬治療反應與雌激素受體基因點突變、變異、多態性有關[16-18]。Ghali等[19]也認為，rs2077647位點與rs3798759的等位基因及基因型與激素受體陽性乳腺癌內分泌治療效果相關。rs2077647位點處于外顯子l上，本身為同義突變，而rs3798759位點處于3′UTR，兩個單核苷酸多態性位點作為遺傳標記，按連鎖不平衡分析原理，臨近區域內可能出現影響內分泌治療效果的陽性區域，存在內分泌治療效果相關基因，具體機制尚待今后深入調查。但有報道發現，rs2077647位點與下游rs2234693位點構成的單倍型與乳腺癌內分泌治療效果無相關性，故認為可向其上游選擇遺傳標記展開深入分析，但本文未分析此點，有待今后進一步探討[20]。此外，本研究中發現，ESR1基因多態性亦為影響患者內分泌治療效果的獨立影響因素，進一步證實內分泌治療激素受體陽性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態性位點有關。

綜上，ESR1單核苷酸多態性位點（rs2077647和rs3798759）與激素受體陽性乳腺癌激素受體陽性乳腺癌療效有關，但本文選取病例數偏少，結果可能存在偏倚，故今后需深入研究。

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（收稿日期：2020-02-25）