短串聯(lián)重復(fù)序列親子鑒定技術(shù)用于細胞融合的檢測價值研究

王修梅

【摘 要】目的：研究在親子鑒定技術(shù)融合細胞檢測中應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)序列的效果及可行性。方法：選擇2017年3月至2018年3月于我院義務(wù)獻血的外周血液細胞，分別實施細胞株培養(yǎng)、外周血單個核細胞分離、細胞融合、DNA提取、短串聯(lián)重復(fù)序列擴增檢測等步驟，對其結(jié)果予以分析和評價。結(jié)果：已實施融合的細胞生長63株（6.3%）、未應(yīng)用融合劑細胞生長數(shù)為1株（0.50%）。孔數(shù)之中予以擴增處理后DNA提取結(jié)果表明，融合成功3個（7.69%）。人骨髓瘤細胞株DNA含量為（51.94±5.18）ng/ul，外周血單個核細胞DNA含量為（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的細胞DNA含量為（101.17±10.07）ng/ul。融合成功細胞DNA含量較高，說明細胞融合成功。結(jié)論：在實施親子鑒定技術(shù)之中，對其融合細胞實施短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)，其應(yīng)用效果較好，具有可行性。

【關(guān)鍵詞】短串聯(lián)重復(fù)序列;親子鑒定;細胞融合

【中圖分類號】R394【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2020）20--02

細胞融合是指將細胞株進行融合處理，其細胞株來源有所不同，使其成為新的細胞株，從而改變其原有細胞株的特性[1]。對細胞融合后實施檢測十分重要，一般多采用染色體檢測及篩選，其檢驗難度較高，且應(yīng)用時長較長，應(yīng)用效率較低。鑒于此，為了提升親子鑒定效率及準確性，將短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)隔離應(yīng)用于細胞融合之中，進而保障親子鑒定的治療及效率[2]。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年3月至2018年3月于我院義務(wù)獻血的外周血液細胞，另應(yīng)用美國種質(zhì)保藏中心細胞株。所用試劑包括細胞融合試劑、細胞培養(yǎng)液、胎牛血清、人類STR 21G擴增熒光試劑盒、次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘌呤核試劑[3]。

1.2 方法

1.2.1 細胞株培養(yǎng)方式 人骨髓瘤細胞株予以解凍，溫度為37攝氏度，解凍成功后將其接種于細胞培養(yǎng)基之中，充入5%的二氧化氮予以培養(yǎng)，溫度為37攝氏度。每3日更換一次培養(yǎng)液予以傳代，將其中的對數(shù)生長期細胞予以采集，采集過程中技術(shù)后實施細胞融合。

1.2.2 外周血單個核細胞分離方式 對義務(wù)獻血的外周血液予以常規(guī)檢驗，包括艾滋病毒、乙肝病毒、梅毒病毒及丙肝病毒等血液傳播類病毒。對其陰性結(jié)果血液予以檢驗。血樣予行離心處理后，取紅細胞與血漿中的白色細胞（即白膜），劑量為5ml，應(yīng)用磷酸緩沖鹽溶液予以稀釋，劑量為5ml，加入5ml密度梯度液后加入稀釋后血液。將其實施離心處理，時間為30min，離心處理后采集中層細胞。再次應(yīng)用磷酸緩沖鹽溶液予以清洗，共計3次，對其細胞予以計數(shù)后制備完成。

1.2.3 細胞融合方式 將分離細胞放置在試管之中，數(shù)量為106個，重懸其預(yù)冷細胞融合液，劑量為125ul，并防止預(yù)冷滅活仙臺病毒懸液12.5ul，混勻后冰置，時間為5min，直至細胞表面吸附滅活仙臺病毒。將其實施常規(guī)孵育，溫度為37攝氏度，時間為15min，期間每5min將其予以混合處理。孵育后輕輕放置次磺嘌呤和胸腺嘧啶核苷混合液，實施鋪板，每孔放置2000個細胞，再次予以培養(yǎng)。3星期后對其克隆成功情況予以觀察，并將其克隆生長的孔位實施24孔擴大性培養(yǎng)，2星期內(nèi)予以細胞計數(shù)，提取其DNA情況。

1.2.4 DNA提取方式 予行融合細胞計數(shù)后，選取（4.5×105）個細胞實施DNA提取操作，將其重懸于200ul磷酸緩沖鹽溶液之中，并放入200ul裂解液，溫度保持在55攝氏度。時間為10min。提取后將其放置在吸附柱之中，并對其實施常規(guī)離心處理，隨即應(yīng)用洗脫液實施洗滌，劑量為160ul，制備結(jié)束后予以定量檢測[4]。

1.2.5 短串聯(lián)重復(fù)序列擴增檢測方式 按照其檢驗試劑盒說明制備擴增體系，將其試劑放置于DNA模板之中，預(yù)變性溫度為95攝氏度，時間為11mim。隨即分別在94攝氏度、59攝氏度、72攝氏度之中分別放置1min，全過程擴充至28個循環(huán)。制備好后將其放置在60攝氏度環(huán)境之中，時長為1h，待測序檢測期間始終將其放置在4攝氏度環(huán)境之中。

2 結(jié)果

2.1 親子鑒定細胞融合結(jié)果情況

對形成克隆的細胞孔數(shù)予以統(tǒng)計，共計1000株細胞中，細胞生長63株，占比6.3%。未應(yīng)用融合劑的200株細胞，生長數(shù)為1株，占比0.50%。對其中39個孔數(shù)之中予以擴增處理，并提取其中的DNA，其結(jié)果表明，融合成功3個，占比7.69%。

2.2 DNA含量檢驗情況

人骨髓瘤細胞株DNA含量為（51.94±5.18）ng/ul，外周血單個核細胞DNA含量為（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的細胞DNA含量為（101.17±10.07）ng/ul。其結(jié)果顯示，融合成功細胞DNA含量較高，說明細胞融合成功。

3 討論

親子鑒定技術(shù)在孟德爾遺傳定律基礎(chǔ)之上發(fā)展而來，其子代遺傳信息均能體現(xiàn)于親本之上，隨著當前基因擴增技術(shù)的發(fā)展，通過實施短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)予以遺傳標記，促使親緣關(guān)系、個體識別的工作效率有所增長。傳統(tǒng)細胞融合方式一般多需對其實施核型及染色體檢測，但因其檢測效率低下，應(yīng)用范圍受到極大的局限性。鑒于此，本研究合理應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)于細胞融合之中，短串聯(lián)重復(fù)序列廣泛存在于人體基因中，且具備極高的多態(tài)性特征，短串聯(lián)重復(fù)序列由2至6個堿基構(gòu)成，作為核心序列之一，串聯(lián)重復(fù)排列后的多態(tài)性水平較高。對于細胞株特定序列予以標記后，通過短串聯(lián)重復(fù)序列檢測能夠區(qū)分細菌株之間的異同，將此技術(shù)應(yīng)用于親子鑒定之中，能夠確定其親緣關(guān)系。

綜上所述，短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)是當前細胞融合的重要檢測技術(shù)，能夠提升細胞融合檢測的質(zhì)量及效率，從而提升親子鑒定技術(shù)的廣泛應(yīng)用。因此，短串聯(lián)重復(fù)序列技術(shù)具有推廣及應(yīng)用的優(yōu)勢。

參考文獻

楊永林，陸玉婷，蔡杰，等.短串聯(lián)重復(fù)序列親子鑒定技術(shù)用于細胞融合的檢測[J].中國醫(yī)師雜志，2016，18（9）：1332-1335.

陳彪.短串聯(lián)重復(fù)序列親子鑒定技術(shù)用于細胞融合的檢測[J].健康之路，2016（11）.

何保仁，何保仁，申衛(wèi)東，等.廣西地區(qū)1786例親子鑒定STR基因位點突變的觀察與分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2016，45（9）：1190-1191.

朱遠雁，鄒潔，強文，等.39個STR基因座在二聯(lián)體親子鑒定突變案例中的應(yīng)用[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2016，31（3）：261-263.