不同生長年限木本曼陀羅中莨菪堿和東莨菪堿含量比較研究

劉國宇，崔新愛，李 艷，王 瑋，周軍輝

(1. 陜西省西安植物園，陜西 西安 710061；2. 陜西省植物資源保護(hù)與利用工程技術(shù)研究中心，陜西 西安 710061)

木本曼陀羅(Brugmansiaarborea)為茄科木本曼陀羅屬常綠灌木或小喬木，其花期長、產(chǎn)量高、繁殖栽培容易。木本曼陀羅中含有莨菪堿(hyoscyamine)和東莨菪堿(scopolamine)等莨菪烷類生物堿，在臨床上有廣泛應(yīng)用，主要用于解痙、興奮呼吸、抑制中樞、活躍微循環(huán)和解磷毒等方面[1～2]。目前，對木本曼陀羅的相關(guān)研究報(bào)道較少，主要是集中在植株的繁殖栽培技術(shù)與抗菌研究方面[3～6]，以及對木本曼陀羅不同組織部位中成分含量研究[7]，尚未見對不同生長年限木本曼陀羅中托品烷類生物堿含量測定的研究報(bào)道。筆者研究是利用高效液相色譜(HPLC)法對1年生和3年生紅花、黃花木本曼陀羅中莨菪堿和東莨菪堿含量進(jìn)行測定，比較不同生長年限中2種成分的含量差異，以期能夠指導(dǎo)木本曼陀羅的合理開發(fā)利用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)材料于2017年12月4日采自陜西省西安植物園，分別為1年生和3年生木本曼陀羅的根、莖、葉等，切片后陰干，再置于50 ℃恒溫烘箱繼續(xù)烘干6 h，粉碎，密封保存。東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品(上海同田生物技術(shù)股份有限公司，含量≥98%，批號17121229)；莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司，含量≥98%，批號KA0802CB14)。甲醇、乙腈均為色譜純(Fisher公司)，其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

Shimadzu LC-20A高效液相色譜儀(日本島津)，InertSustain C18(4.6×250 mm，5 μm)色譜柱(日本島津)，BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，XY-100型高速多功能粉碎機(jī)(浙江省永康市松青五金廠)，KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，UPH-Ⅱ-10T型超純水機(jī)(四川優(yōu)普超純科技有限公司)，RV10基本型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國IKA公司)。

1.3 方法

1.3.1 供試品溶液[8]分別精密稱取1年生和3年生紅花、黃花木本曼陀羅不同部位樣品粉末，稱量后置于錐形瓶中，加入濃氨水-乙醚-乙醇(4∶10∶5)溶液45 mL，塞緊后搖勻，室溫放置12 h后超聲提取2次，每次30 min，過濾，收集上清液，用少量提取液洗滌殘?jiān)?次，將上清液與洗滌液合并后于60 ℃水浴蒸干。殘?jiān)?.5 mol·L-1硫酸(1 mL)超聲1min，離心4 min(8 000 r·min-1)，收集上清液，再用1 ml純水超聲洗滌后離心4 min(8 000 r·min-1)，合并上清液，分別用40 mL、20 mL、20 mL氯仿萃取，每次萃取后收集水層，用0. 5 mol·L-1氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8～9，再分別用40 mL、20 mL、20 mL氯仿萃取，收集氯仿層，水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除氯仿，殘?jiān)眉状既芙猓? min，定容至5 mL，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.3.2 色譜條件[9]InertSustain C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.07 mol·L-1磷酸鈉溶液(含0.0175 mol·L-1十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0)(50∶00) 為流動(dòng)相；流速1.0 mL·min-1，檢測波長216 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 莨菪堿和東莨菪堿含量的測定

精密稱取1年生和3年生紅花、黃花木本曼陀羅不同組織部位樣品，按“1.3.1”的方法制備供試品溶液，按“1.3.2”的色譜條件測定莨菪堿和東莨菪堿含量，結(jié)果見表1。

表1 不同生長年限木本曼陀羅各組織部位中莨菪堿和東莨菪堿含量

2.2 莨菪堿和東莨菪堿含量比較分析

由表1可以看出，1年生和3年生紅花木本曼陀羅中莨菪堿含量最高部位均為根部，分別為0.066%和0.117%，3年生植株根部含量高于1年生植株，其他各部位中莨菪堿含量差別不明顯；東莨菪堿含量最高部位分別為當(dāng)年生綠莖(0.071%)和根部(0.075%)，1年生和3年生植株各部位中東莨菪堿含量差別均較小。1年生紅花木本曼陀羅的根中莨菪堿含量稍高于東莨菪堿，3年生紅花木本曼陀羅的木質(zhì)化莖和根中莨菪堿含量稍高于東莨菪堿含量，其他部位中東莨菪堿含量均稍高于莨菪堿含量。

由表1還可以看出，1年生和3年生黃花木本曼陀羅中莨菪堿含量最高部位分別為嫩葉(0.156%)和根(0.039%)，嫩葉中莨菪堿含量為1年生植株明顯高于3年生植株，其他各部位中含量差別均不大；東莨菪堿含量最高部位也分別為嫩葉(0.287%)和根(0.215%)，根中東莨菪堿含量為3年生植株明顯高于1年生植株，其他部位中含量均為1年生植株高于3年生植株。1年生和3年生黃花木本曼陀羅各部位中東莨菪堿含量均高于莨菪堿含量。

3 結(jié)論與討論

通過研究可以看出，3年生紅花木本曼陀羅根中莨菪堿含量明顯高于1年生植株，3年生黃花木本曼陀羅根中東莨菪堿含量明顯高于1年生植株，生長年限長對于木本曼陀羅根部莨菪堿和東莨菪堿積累有積極作用。而對于其他組織部位中2種成分的含量，一年生植株更體現(xiàn)出其優(yōu)勢。筆者實(shí)驗(yàn)也證明了黃花木本曼陀羅是東莨菪堿優(yōu)勢資源植物，與彭廣芳等[10]的研究結(jié)果一致。生長年限更長的木本曼陀羅中莨菪堿和東莨菪堿含量變化，以及不同生長年限植株在不同季節(jié)中2種成分含量變化還有待進(jìn)一步研究。