蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及免疫功能的影

龍俊海， 陳 靈

（1.駐馬店技師學(xué)院，河南駐馬店 463000；2.河南省駐馬店農(nóng)業(yè)學(xué)校，河南駐馬店 463000）

目前，在養(yǎng)殖過(guò)程中通過(guò)添加外源性蛋白酶類(lèi)來(lái)提高飼糧蛋白質(zhì)的消化率，降低其生產(chǎn)成本成為研究的熱點(diǎn)，蛋白酶具有補(bǔ)充內(nèi)源酶不足、提高飼料利用率、降低飼料成本、促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)等多種作用，同時(shí)還可以降低糞便中含氮物質(zhì)的排放量，減少環(huán)境污染等（楊飛來(lái)，2019）。因此，蛋白酶被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中。相關(guān)研究表明，在飼料中添加蛋白酶，可以降低豆粕的使用量，具有很強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值（侯振平，2017）。豆粕富含多種蛋白質(zhì)，其氨基酸組分均衡，是動(dòng)物主要的植物蛋白飼料來(lái)源之一，但豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白、不良寡糖等多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，會(huì)對(duì)幼齡動(dòng)物造成影響，降低飼料利用率（王國(guó)強(qiáng)，2016）。利用益生菌等微生物和蛋白酶進(jìn)行混合發(fā)酵豆粕，可有效地消除或降低豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高豆粕的利用率（郭萌萌，2019；胡瑞，2013）。本試驗(yàn)將復(fù)合益生菌、蛋白酶進(jìn)行混合發(fā)酵豆粕，以不同的比例替代飼料中普通豆粕，分析其對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能和免疫機(jī)能影響，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 蛋白酶制劑主要包括蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶等，為粉狀固體，購(gòu)自山東濟(jì)南諾能生物工程有限公司；乳酸桿菌、雙歧桿菌、黑曲霉菌菌種由本單位實(shí)驗(yàn)室保存；豆粕購(gòu)自中糧集團(tuán)；禽流感H9抗原、新城疫抗原均購(gòu)自中國(guó)藥品食品監(jiān)察所。禽用免疫球蛋白IgG、IgA ELISA Kit試劑盒均購(gòu)自Elabscience公司。

1.2 混合發(fā)酵豆粕和普通豆粕主要營(yíng)養(yǎng)成分的分析 由表1可知，蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕的水分低于普通豆粕，粗蛋白質(zhì)、蘇氨酸、蛋氨酸、賴(lài)氨酸、必需氨基酸、非必需氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分均高于普通豆粕。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與基礎(chǔ)日糧配比 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇體重相近的3周齡黃羽肉雞200只（本市規(guī)模化黃羽肉雞示范基地提供），隨機(jī)分成4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只，1組飼喂基礎(chǔ)日糧為空白對(duì)照組，試驗(yàn)2、3、4組分別用蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中20%、25%、30%普通豆粕，預(yù)試驗(yàn)7 d，試驗(yàn)期為21 d。每個(gè)重復(fù)組單獨(dú)平面飼養(yǎng)，自由采食和飲水。按常規(guī)的飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)與管理，按照免疫程序?qū)υ囼?yàn)肉雞進(jìn)行相關(guān)疫苗免疫接種。試驗(yàn)肉雞基礎(chǔ)日糧參照美國(guó)NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2，采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧。

表1 營(yíng)養(yǎng)成分的分析%

表2 日糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 生長(zhǎng)性能的測(cè)定 在試驗(yàn)期間，每個(gè)試驗(yàn)組中每只試驗(yàn)肉雞空腹稱(chēng)重，記錄每個(gè)試驗(yàn)組試驗(yàn)肉雞的采食料量和耗料量，計(jì)算各組的平均日采食量、平均日增重和料重比等生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

1.5 免疫指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)抽取10只試驗(yàn)肉雞，翅中靜脈采血，分離血清，用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定試驗(yàn)肉雞新城疫、禽流感抗體效價(jià)水平。用ELISA方法測(cè)定血清中免疫球蛋白IgG、IgA含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行差異顯著性分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表3可知，試驗(yàn)2、3、4組的平均日增重均高于1組，其中試驗(yàn)2組的平均日增重高于1組，差異性不顯著（P>0.05），試驗(yàn)3、4組的平均日增重較 1組比分別提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 試驗(yàn) 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗(yàn) 2、3、4 組平均采食量均高于1組，差異性不顯著（P>0.05）；試驗(yàn)2、3、4組的料重比均低于1組，試驗(yàn)2組低于1組，差異性不顯著（P>0.05），試驗(yàn)3、4組的料重比較1組比分別降低 14.3%、13.6% （P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）。

表3 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的檢測(cè)結(jié)果

2.2 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對(duì)肉雞免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗(yàn)2、3、4組AI、ND抗體效價(jià)水平均高于1組，其中2組高于1組，差異性不顯著（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 3、4組血清中AI、ND抗體效價(jià)水平較1組相比分別提高15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗(yàn)2、3、4組血清中IgG含量均高于1組，其中2組高于 1組，差異性不顯著（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 3、4組血清中IgG含量較1組相比分別提高15.8%、14.9% （P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 IgA 含量均高于1組，差異性不顯著（P>0.05）。

表4 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對(duì)肉雞免疫指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

豆粕中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子可以嚴(yán)重影響其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，利用益生菌和蛋白酶混合發(fā)酵可將豆粕中大分子物質(zhì)降解為易被動(dòng)物消化和吸收的小分子多肽類(lèi)物質(zhì)和蛋白質(zhì)，另外益生菌中含氨基酸、維生素、有機(jī)酸及未知生長(zhǎng)因子等，可以提高飼料的適口性，調(diào)節(jié)胃腸道微生物區(qū)系，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能，減少腹瀉等消化道疾病（楊海霞，2016；俞清霞，2011；唐翔宇，2008）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組的平均日增重較 1組比分別提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 試驗(yàn) 2、3、4組平均采食量均高于1組（P>0.05），試驗(yàn) 3、4組的料重比較1組比分別降低14.3%、13.6% （P＜0.05）。說(shuō)明不同水平的蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中普通豆粕，可以提高肉雞的平均日增重和平均采食量，降低料肉比，因此提高肉雞的生長(zhǎng)性能。與楊海霞（2016）報(bào)道的復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕可以提高仔豬生長(zhǎng)性能結(jié)果一致。

在肉雞的養(yǎng)殖過(guò)程中，禽流感、新城疫等病毒性疾病是危害養(yǎng)雞業(yè)主要傳染性疾病之一，尤其禽流感、新城疫可以感染不同日齡的雞，其死亡率高達(dá)75%以上，該病主要通過(guò)疫苗免疫進(jìn)行預(yù)防，其禽流感、新城疫抗體水平的變化反映了機(jī)體免疫機(jī)能之一 （仇薪鑫，2019；蔡艷，2018）。免疫球蛋白IgG、IgA是介導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體體液免疫主要抗體，在體液免疫過(guò)程中起重要的作用（張召興，2017）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組血清中AI、ND抗體效價(jià)水平較1組相比分別提高 15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），試驗(yàn)3、4組血清中IgG含量較1組相比分別提高 15.8%、14.9%（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組血清中IgA含量均高于1組（P>0.05）。說(shuō)明不同水平的蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中普通豆粕，可以提高肉雞的免疫機(jī)能。可能由于豆粕通過(guò)益生菌和蛋白酶混合發(fā)酵后，益生菌中所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及物質(zhì)因子可刺激肉雞的免疫系統(tǒng)，促使機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞活化，促使機(jī)體產(chǎn)生抗體，提高肉雞機(jī)體的免疫水平。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代飼料中的25%普通豆粕，可以提高肉雞生長(zhǎng)性能和免疫機(jī)能。