電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子及其受體表達(dá)的影響

肖豆，謝崢嶸，唐雅妮，潘江，曹越，婁必丹，章薇，陳成

電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子及其受體表達(dá)的影響

肖豆1，謝崢嶸1，唐雅妮1，潘江2，曹越2，婁必丹2，章薇2，陳成2

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007

觀察電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)腦缺血后大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子及其受體表達(dá)的影響，探討電針心包經(jīng)穴對(duì)大鼠腦缺血后神經(jīng)修復(fù)的作用機(jī)制。將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、心包經(jīng)組和肺經(jīng)組，每組18只。頸外動(dòng)脈插入線(xiàn)栓法制作局灶性腦缺血模型。成模后第2日起電針干預(yù)30 min，每日1次，干預(yù)6 d休息1 d，分別于7、14、21 d進(jìn)行取材，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只。ELISA檢測(cè)血清神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子（Nogo-A）含量，RT-qPCR檢測(cè)腦梗死區(qū)Nogo-A及其受體NgR1的mRNA表達(dá)。與同一時(shí)間點(diǎn)正常組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清Nogo-A含量及腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高（＜0.01）；與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，心包經(jīng)組大鼠血清Nogo-A含量第21日及腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)第7、21日明顯降低（＜0.01），肺經(jīng)組大鼠腦梗死區(qū)NgR1 mRNA表達(dá)第7日明顯降低（＜0.05），NgR1 mRNA表達(dá)第14日明顯升高（＜0.01）；與同一時(shí)間點(diǎn)肺經(jīng)組比較，心包經(jīng)組大鼠血清Nogo-A含量第21日明顯降低（＜0.05），腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)明顯降低（＜0.01）。電針心包經(jīng)穴可促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)修復(fù)，其機(jī)制與下調(diào)模型大鼠血清Nogo-A含量、抑制缺血側(cè)腦組織Nogo-A和NgR1的mRNA表達(dá)相關(guān)。

腦缺血；心包經(jīng)穴；肺經(jīng)穴；電針；神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子；神經(jīng)修復(fù)；大鼠

腦梗死是指因大腦血液循環(huán)受阻，缺血、缺氧所致的局限性腦組織缺血性壞死或軟化，進(jìn)而引起相應(yīng)神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損的一種疾病。針灸在腦缺血及相關(guān)疾病的臨床治療中應(yīng)用廣泛。有研究發(fā)現(xiàn)，針灸不僅對(duì)患者神經(jīng)功能、機(jī)體功能恢復(fù)和并發(fā)癥改善有良好的促進(jìn)作用，而且還可對(duì)引起缺血性腦病相關(guān)的多種危險(xiǎn)因素進(jìn)行干預(yù)[1-5]。

本課題組前期研究表明，電針心包經(jīng)穴能有效抑制腦缺血損傷心腦組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腦血管新生，增加大鼠血清、腦組織神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）的表達(dá)，降低血清神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子（Nogo-A）含量[6-8]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，電針心包經(jīng)穴能減輕腦缺血患者偏身疼痛、麻木、感覺(jué)減退等癥狀，有效改善患者腦部供血[9-10]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，以手厥陰心包經(jīng)為整體受試因素，選取不同神經(jīng)節(jié)段分布的4個(gè)腧穴（“天泉”“曲澤”“內(nèi)關(guān)”“大陵”）代表整條經(jīng)絡(luò)，并選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察電針對(duì)腦缺血模型大鼠血清、缺血側(cè)腦組織Nogo-A及其受體NgR1表達(dá)的影響，探討腦缺血后神經(jīng)修復(fù)可能的作用機(jī)制，為心包經(jīng)穴在治療腦缺血后神經(jīng)損傷中的運(yùn)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組

健康成年雄性SD大鼠90只，SPF級(jí)，3～4月齡，體質(zhì)量220～250 g，湖南斯萊克景達(dá)試驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2016-0002。飼養(yǎng)于室溫22 ℃、相對(duì)濕度55%～70%環(huán)境，自由攝食飲水。飼養(yǎng)籠具、墊料、飼料、飲水均按SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物要求進(jìn)行制備和消毒，造模前禁食1 d。將SD大鼠隨機(jī)分成正常組、假手術(shù)組各18只，造模組54只，成模大鼠隨機(jī)分為模型組、心包經(jīng)組、肺經(jīng)組各18只，各組大鼠分別于7、14、21 d取材，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只。

1.2 主要試劑與儀器

Nogo-A ELISA試劑盒（Andygene公司），mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京康為世紀(jì)生物科技有限公司）。0.30 mm×15 mm華佗牌一次性毫針、SDZ-Ⅱ華佗電針治療儀（蘇州醫(yī)療用品廠(chǎng)有限公司），全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)（匯松PW-812），多功能酶標(biāo)分析儀（匯松MB-530），熒光定量RCP儀（美國(guó)Thermo公司，PIKOREAL96），電泳儀（北京六一儀器廠(chǎng)，DYY-6C）。

1.3 造模

參照Longa[11]和Koizumi[12]方法造模。從頸外動(dòng)脈插入線(xiàn)栓建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型。采用Zea Longa 5級(jí)4分制評(píng)分法評(píng)分。意識(shí)喪失、不能行走為4分；行走向偏癱側(cè)傾倒為3分；行走往偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈為2分；梗死對(duì)側(cè)伸直障礙、前爪內(nèi)收為1分；無(wú)神經(jīng)功能缺損為0分。選取評(píng)分為1～3分大鼠納入實(shí)驗(yàn)觀察。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物所有處置均符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部2006年頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》[13]。

1.4 干預(yù)

參照擬人比照法及《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[14]動(dòng)物穴位圖譜定位取穴，并按手三陰經(jīng)脈“從胸走手”循行方向，選取梗死對(duì)側(cè)肢體不同神經(jīng)節(jié)段穴位代表心包經(jīng)及肺經(jīng)，即以“天泉”“曲澤”“大陵”“內(nèi)關(guān)”代表心包經(jīng)，以“天府”“尺澤”“列缺”“太淵”代表肺經(jīng)。造模后第2日進(jìn)行干預(yù)，毫針刺入梗死對(duì)側(cè)上肢穴位，深度3～4 mm，接SDZ-Ⅱ型電針治療儀，心包經(jīng)組“大陵”“內(nèi)關(guān)”相接、“曲澤”“天泉”相接，肺經(jīng)組“太淵”“列缺”相接、“尺澤”“天府”相接，使近心端穴位接電針正極，遠(yuǎn)心端穴位接負(fù)極，選用連續(xù)波，輸出電壓2～4 V，以大鼠局部肢體輕顫為宜，干預(yù)時(shí)間30 min，每日1次，連續(xù)6 d，休息1 d，總計(jì)21 d。大鼠在正常喂養(yǎng)與捆綁處理的基礎(chǔ)上，正常組不做任何處理，假手術(shù)組剝離出血管但不插線(xiàn)，模型組制作MCAO模型，心包經(jīng)組電針心包經(jīng)穴，肺經(jīng)組電針?lè)谓?jīng)穴。

1.5 血清神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子含量檢測(cè)

大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉，取4～5 mL腹主動(dòng)脈血，常溫靜置2 h，3000 r/min離心15 min，用移液槍取上清液，ELISA檢測(cè)血清Nogo-A濃度，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。所有數(shù)值使用Curve Expert軟件進(jìn)行分析并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值與濃度關(guān)系得回歸方程，計(jì)算樣本濃度（稀釋樣本×稀釋倍數(shù)）。

1.6 腦梗死區(qū)神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子及其受體mRNA表達(dá)檢測(cè)

大鼠斷頭取腦，取約0.02 g缺血側(cè)海馬組織，加入Trizol溶液，充分研磨勻漿后提取總RNA，再以組織總mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄cDNA（按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)操作），取出部分cDNA，等比例混勻，稀釋?zhuān)鳛閷?shí)時(shí)熒光定量PCR模板。參照目的基因序列，運(yùn)用Primer5軟件設(shè)計(jì)引物（見(jiàn)表1），按SYBR法完成實(shí)驗(yàn)操作，反應(yīng)條件：95 ℃、10 min，95 ℃、15 s，60 ℃、30 s，共40個(gè)循環(huán)。2-ΔΔCt法分析基因水平。ΔCt＝目的基因Ct－內(nèi)參基因Ct，ΔΔCt＝對(duì)照組ΔCt－樣品組ΔCt。

表1 PCR各基因引物序列

基因名稱(chēng)引物序列（5'～3'）產(chǎn)物長(zhǎng)度/bp Nogo-A上游：TTGCCTTGCTTAGAATTGCCCTGT162 下游：GCCCATTTCTGTCTGAGGTTCCAA NgR1上游：ACAGTAATTCTGCTCTTGGTCAT146 下游：TGTCAGACCATTGAACAAGGC β-actin上游：ACATCCGTAAAGACCTCTATGCC223 下游：TACTCCTGCTTGCTGATCCAC

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 電針對(duì)模型大鼠血清神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子表達(dá)的影響

與同一時(shí)間點(diǎn)正常組、假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清Nogo-A含量各時(shí)間點(diǎn)均明顯增加（＜0.01）；與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，第21日心包經(jīng)組大鼠血清Nogo-A含量明顯減少（＜0.01）；與同一時(shí)間點(diǎn)肺經(jīng)組比較，心包經(jīng)組大鼠血清Nogo-A含量第21日明顯減少（＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血清Nogo-A含量比較（±s，pg/mL）

注：與同一時(shí)間點(diǎn)正常組、假手術(shù)組比較，★★＜0.01；與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，▲▲＜0.01；與同一時(shí)間點(diǎn)肺經(jīng)組比較，●＜0.05

2.2 電針對(duì)模型大鼠腦梗死區(qū)神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子及其受體mRNA表達(dá)的影響

與同一時(shí)間點(diǎn)正常組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)明顯升高（＜0.01）；與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，心包經(jīng)組大鼠腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)第7、21日明顯降低（＜0.01），肺經(jīng)組腦梗死區(qū)NgR1 mRNA表達(dá)第7日明顯降低（＜0.05），NgR1 mRNA表達(dá)第14日明顯升高（＜0.01）；與肺經(jīng)組比較，心包經(jīng)組大鼠腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)明顯降低（＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)比較（±s）

注：與同一時(shí)間點(diǎn)正常組、假手術(shù)組比較，★★＜0.01；與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，▲＜0.05，▲▲＜0.01；與同一時(shí)間點(diǎn)肺經(jīng)組比較，●●＜0.01

3 討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)在腦缺血后患者的康復(fù)中占有至關(guān)重要的地位，而哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活躍生長(zhǎng)、分化及可塑性調(diào)節(jié)均發(fā)生在胚胎及幼兒時(shí)期，成年哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，神經(jīng)細(xì)胞軸突大多難以再生和修復(fù)。目前認(rèn)為神經(jīng)修復(fù)好壞的關(guān)鍵主要取決于多種炎性介質(zhì)及神經(jīng)功能因子之間的相互作用[15]。Nogo-A是髓鞘中抑制軸突再生的因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后抑制軸突出芽和生長(zhǎng)的過(guò)程中扮演著重要角色；NgR是Nogo-A的特異性受體，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在的特有蛋白質(zhì)，其包含3個(gè)亞家族，即NgR1、NgR2、NgR3，其中NgR1與Nogo-A的親和力最高[16-18]。

通過(guò)動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)，Nogo-A抗體或NgR1拮抗劑能一定程度上下調(diào)Nogo-A及NgR1的表達(dá)，抑制缺血的同時(shí)在一定程度上促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)及軸突再生，增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)能力[19-20]。也有研究顯示，Nogo-A和NgR1能抑制腦缺血后頸髓皮質(zhì)脊髓束的結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)，證實(shí)抗Nogo-A治療能明顯增加頸髓皮質(zhì)脊髓束纖維的生長(zhǎng)速度，通過(guò)NgR1拮抗劑治療減輕腦缺血后造成的損傷，改善神經(jīng)功能缺損[21-22]。另有研究發(fā)現(xiàn)，Nogo-A與NgR1通過(guò)特異性結(jié)合形成相應(yīng)復(fù)合體激活RhoA及Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶，導(dǎo)致生長(zhǎng)錐塌陷及神經(jīng)突起回縮，從而抑制軸突再生[23]，表明Nogo-A和NgR1無(wú)論單獨(dú)作用或形成復(fù)合體均有抑制軸突生長(zhǎng)的作用。

目前，針灸在腦缺血后患者的康復(fù)中廣泛運(yùn)用。有研究發(fā)現(xiàn)，針灸通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)生長(zhǎng)因子、抑制因子及多種凋亡相關(guān)蛋白，抑制缺血半暗帶神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)神經(jīng)組織修復(fù)與重塑，從而保護(hù)缺血灶周?chē)窠?jīng)組織[24-25]。吳鋒等[26]研究發(fā)現(xiàn)，電針“曲池”“合谷”在改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能的同時(shí)還能下調(diào)腦梗死區(qū)Nogo-A和NgR的表達(dá)。陳吉祥等[27]研究表明，電針“百會(huì)”“神庭”在抑制梗死側(cè)海馬區(qū)Nogo-A和NgR表達(dá)的同時(shí)可改善腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力。但研究選穴多為督脈和他經(jīng)配穴，對(duì)手厥陰心包經(jīng)與其他經(jīng)脈對(duì)照研究鮮有報(bào)道。

我們將電針心包經(jīng)穴作為一種外源性干預(yù)手段，觀察大鼠腦缺血后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清Nogo-A含量和腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)的變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠血清Nogo-A含量均應(yīng)激性升高，與模型組比較，心包經(jīng)組大鼠第21日血清Nogo-A含量減少，肺經(jīng)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)均未見(jiàn)明顯變化，這可能與樣本量小或/和Nogo-A在血清中表達(dá)不穩(wěn)定有關(guān)。同時(shí)，模型組大鼠缺血側(cè)腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高，電針心包經(jīng)穴能明顯降低模型大鼠缺血側(cè)腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA的表達(dá)，電針?lè)谓?jīng)穴在造模后7 d能有效下調(diào)NgR1 mRNA表達(dá)，但較心包經(jīng)組不明顯，說(shuō)明電針對(duì)模型大鼠缺血側(cè)腦組織NgR1 mRNA的調(diào)節(jié)具有經(jīng)脈特異性，且心包經(jīng)優(yōu)于肺經(jīng)。從中醫(yī)基礎(chǔ)理論來(lái)看，手太陰肺經(jīng)雖不像心經(jīng)、心包經(jīng)一樣與腦聯(lián)系緊密，但“肺”具有“朝百脈，主治節(jié)”的生理功能，同時(shí)“主氣、司呼吸”，能將流經(jīng)肺臟的血液中濁氣與清氣交換，再通過(guò)宣發(fā)肅降作用將富含清氣的血液輸布全身，濡養(yǎng)大腦。依據(jù)這一理論，針刺肺經(jīng)可促進(jìn)腦缺血后的恢復(fù)，可能對(duì)Nogo-A及其受體NgR1有著相關(guān)的抑制作用。而電針?lè)谓?jīng)穴在第14、21日Nogo-A mRNA表達(dá)和第14日NgR1 mRNA表達(dá)均有上調(diào)。目前這一結(jié)果暫無(wú)其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以參照，考慮與樣本量小相關(guān)，具體原因需進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電針手厥陰心包經(jīng)穴能明顯下調(diào)模型大鼠造模第21日血清Nogo-A的表達(dá)及第7、21日缺血側(cè)腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA的表達(dá)。但對(duì)模型大鼠第7、14日血清Nogo-A表達(dá)及第14日缺血腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響。腦為主要病變部位，梗死側(cè)腦組織是Nogo-A最終作用部位。而腦缺血早期，血清中多種神經(jīng)生長(zhǎng)因子及抑制因子相互作用，在神經(jīng)保護(hù)過(guò)程中，血清Nogo-A的表達(dá)可能受到血清中多種神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[28]，導(dǎo)致不能穩(wěn)定表達(dá)，所以造模后第7、14日未見(jiàn)血清Nogo-A表達(dá)的明顯變化。而NgR1只在腦組織中表達(dá)，在其發(fā)揮抑制神經(jīng)生長(zhǎng)作用的過(guò)程中需與膜蛋白神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR和/或腫瘤壞死因子受體家族成員TROY及LINGO-1蛋白相互作用[29]，形成受體復(fù)合體，才能發(fā)揮抑制軸突生長(zhǎng)的作用，這可能也是其表達(dá)不穩(wěn)定的原因之一，需進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠腦缺血第7、14、21日，血清Nogo-A含量和缺血側(cè)腦組織Nogo-A和NgR1 mRNA表達(dá)顯著升高，電針心包經(jīng)穴能促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)修復(fù)，且具有經(jīng)脈特異性，可為運(yùn)用心包經(jīng)穴治療腦缺血后神經(jīng)損傷提供一定的實(shí)驗(yàn)支持。

[1] 趙飛,王寧.針灸對(duì)急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2018,16(7)：184-185.

[2] 魏瑞鵬,張建博,叢文東.針灸治療腦梗死后認(rèn)知功能的療效及NHISS、ADL評(píng)分分析[J].吉林中醫(yī)藥,2019,39(10)：1373-1376.

[3] 張權(quán),潘東,張津瑋,等.調(diào)神復(fù)明針刺法治療腦梗死后復(fù)視的臨床觀察[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2019,17(17)：2712-2714.

[4] 高霄英,丁少杰,魯海,等.“醒腦開(kāi)竅”針刺法對(duì)中風(fēng)患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)影響概述[J].針灸臨床雜志,2019,35(12)：79-83.

[5] 廖慶紅,汪飛,陳詩(shī)莉.溫針灸對(duì)恢復(fù)期腦梗死患者腦血流灌注情況及血清ICA M-1、IGF-1的影響[J].上海針灸雜志,2019,38(1)：45-49.

[6] 陳成,章薇,婁必丹,等.電針心包經(jīng)穴對(duì)急性腦缺血大鼠血清及腦組織神經(jīng)生長(zhǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子的影響[J].針刺研究,2015, 40(2)：94-98.

[7] 潘江,章薇,嚴(yán)潔,等.電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)大腦中動(dòng)脈梗阻大鼠血清、腦組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的影響[J].針刺研究,2012,37(6)：197- 201.

[8] 石文英,嚴(yán)潔,章薇,等.基于心腦相關(guān)理論探討電針心經(jīng)、心包經(jīng)穴對(duì)大腦中動(dòng)脈梗阻大鼠心、腦細(xì)胞凋亡的影響[J].針刺研究,2019,44(2)：107-112.

[9] 何素娟,夏云,呂梓瑜,等.電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)腦梗死恢復(fù)期患者腦血流動(dòng)力學(xué)即刻效應(yīng)的影響[J].新中醫(yī),2016,48(5)：43-45.

[10] 李里,潘江,章薇,等.電針心經(jīng)、心包經(jīng)穴治療丘腦卒中后感覺(jué)異常29例[J].中國(guó)針灸,2016,36(1)：102.

[11] LONGA E Z, WEINSTEIN P R, CARLSON S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]. Stroke JT-Stroke；a Journal of Cerebral Circulation,1989,20(1)：84-91.

[12] KOIZUMI J, YOSHID Y, NAKAZAWA T, et al. Experimental studies of ischemic brina edema, a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirulation can be introduced in the ischemia area[J]. Stroke,1986,8：1.

[13] 中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部.關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)意見(jiàn)[EB/OL].(2006-09-30)[2020-03-22].http://www.most.gov.cn.

[14] 李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2007：255-257.

[15] BERRY M, AHMED Z, LOGAN A. Return of function after CNS axon regeneration：Lessons from injury-responsive intrinsically photosensitive and alpha retinal ganglion cells[J]. Progress in Retinal and Eye Research,2019,2019：71.

[16] DENG B, GAO F, LIU F F, et al. Two monoclonal antibodies recognizing aa 634-668 and aa 1026-1055of NogoA enhance axon extension and branching in cultured neurons[J]. PLoS One,2014, 9：e88554.

[17] 賈波,黃偉,王天兵.Nogo蛋白與周?chē)窠?jīng)再生[J].中華肩肘外科電子雜志,2018,6(4)：241-243.

[18] 何梅,毛敏,趙國(guó)燕,等.Nogo-A對(duì)突觸可塑性的調(diào)節(jié)及相關(guān)神經(jīng)疾病[J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐,2019,25(2)：196-200.

[19] CRAVEIRO L M, WEINMANN O, ROSCHITZKI B, et al. Infusion of anti- Nogo-A antibodies in adult rats increases growth and synapse related proteins in the absence of behavioral alterations[J]. Exp Neurol,2013,250：52-68.

[20] RYU U, HAJIME T, JUN S, et al. Axonal regeneration and functional recovery driven by endogenous Nogo receptor antagonist LOTUS in a rat model of unilateral pyramidotomy[J]. Experimental Neurology,2017,2017：323.

[21] LINDAU N T, BANNINGER B J, GULLO M, et al. Rewiring of the corticospinal tract in the adult rat after unilateral stroke and anti-Nogo-A therapy[J]. Brain,2014,137(3)：739-756.

[22] GOU X, WANG Q, YANG Q, et al. TAT-NEP1-40 as a novel therapeutic candidate for axonal regeneration and functional recovery after stroke[J]. J Drug Target,2011,19(2)：86-95.

[23] IOBBI C, KORTE M, ZAGREBELSKY M. Nogo-66 restricts synaptic strengthening via Lingo1 and the ROCK2-cofilin pathway to control actin dynamics[J]. Cereb Cortex,2017,27(5)：2779-2792.

[24] 孫忠人,呂曉琳,尹洪娜,等.針刺調(diào)節(jié)腦可塑性的機(jī)制研究進(jìn)展[J].針刺研究,2018,43(10)：674-677.

[25] 武曉娜,倪金霞,李苗苗,等.針刺對(duì)缺血性腦卒中神經(jīng)組織凋亡與重塑的影響[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2018,11(5)：787-791.

[26] 吳鋒,李懷斌,趙健,等.電針結(jié)合天麻素對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能、額葉皮質(zhì)勿動(dòng)蛋白A及其受體表達(dá)的影響[J].針刺研究,2016, 41(1)：65-69.

[27] 陳吉祥,林浴坤,吳羽楠,等.電針對(duì)腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及海馬組織Nogo-A/NgR表達(dá)的影響[J].中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2015, 30(3)：219-223.

[28] 馬紋蕊,武娟,灑玉萍,等.電針手厥陰心包經(jīng)穴對(duì)MCAO大鼠血清、腦組織中NGF和Nogo-A的影響[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2019,19(80)：221-223.

[29] 何梅,毛敏,趙國(guó)燕,等.Nogo-A對(duì)突觸可塑性的調(diào)節(jié)及相關(guān)神經(jīng)疾病[J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐,2019,25(2)：196-200.

Effects of Electroacupuncture Stimulation of Acupoints of Pericardium Meridian on Nogo-A and NgR1 Expression in Cerebral Ischemia Rats

XIAO Dou1, XIE Zhengrong1, TANG Yani1, PAN Jiang2, CAO Yue2, LOU Bidan2, ZHANG Wei2, CHEN Cheng2

To observe the effects of electroacupuncture (EA) stimulation of acupoints of pericardium meridian on Nogo-A and NgR1 expression in cerebral ischemia rats; To explore the mechanism of EA at the pericardium meridian on nerve repair after cerebral ischemia in rats.The SD rats were randomly divided into normal control group, sham-operation group, model group, pericardium meridian, and lung meridian group, with 18 rats in each group. The model of focal cerebral ischemia was selected and made by external carotid artery insertion thread embolization method. From the second day after successful modeling, EA intervention was performed for 30 minutes, once a day, intervention for 6 days and rest for 1 day. Serum and brain tissue were obtained on 7th, 14th and 21st day,with 6 rats at each time point. Serum nerve growth inhibitory factor (Nogo-A) was detected by ELISA. RT-qPCR was used to detect the expression of Nogo-A and its receptor NgR1 mRNA in cerebral infarction area.Compared with the normal control group and sham-operation group, the serum Nogo-A content and the expression of Nogo-A and NgR1 mRNA in the cerebral infarction area in the model group significantly increased at each time point (<0.01). Compared with the model group at the same time point, the serum Nogo-A content and the expressions of Nogo-A and NgR1 mRNA in the cerebral infarction area on the 7th and 21st days in the pericardium meridian group were significantly reduced on the 21st day (<0.01), the expression of NgR1 mRNA in the cerebral infarction area of the lung meridian group was significantly reduced on the 7th day (<0.05), and NgR1 mRNA expression increased significantly on the 14th day (<0.01). Compared with the lung meridian group at the same time point, the serum Nogo-A content in the pericardium meridian group was significantly reduced on the 21st day (<0.05), and the Nogo-A and NgR1 mRNA expression in the cerebral infarction area was significantly reduced at each time point (<0.01).EA stimulation of acupoints of pericardium meridian can up-regulate serum Nogo-A, and down-regulate the expressions of cerebral Nogo-A and NgR1 mRNA in cerebral ischemia rats, which is conducive to nerve repair after cerebral ischemia.

cerebral ischemia; acupoints of pericardial meridian; acupoints of lung meridian; electroacupuncture; Nogo-A; nerve repair; rats

R245

A

1005-5304(2020)10-0059-05

10.19879/j.cnki.1005-5304.202004131

國(guó)家自然科學(xué)基金（81704184、81774421、81973956）；湖南省自然科學(xué)基金（2018JJ3401）；湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（19B429、19C1424）

章薇，E-mail：zw69996@gmail.com

（2020-04-06）

（2020-04-26；編輯：華強(qiáng)）