ERCC1基因多態(tài)性與晚期胃癌患者奧沙利鉑化療療效的相關性研究

張 倩，湯旭山，朱雅婷，周湘龍（.新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院藥學部，新疆 烏魯木齊 8300；.新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院消化內科，新疆 烏魯木齊 8300）

胃癌在世界癌癥發(fā)病率中排名第五，死亡率排名第三，胃癌已成為我國發(fā)病率和死亡率均排名第二的惡性腫瘤[1]。由于早期胃癌的病癥并不明顯，多數(shù)患者在確診時已是晚期，且其發(fā)病率和死亡率隨著年齡的增長而上升，五年生存率僅有不到10%[2]，但大部分的患者在就診時已經是胃癌晚期，失去了手術的機會，所以針對晚期胃癌，化療是最主要的治療手段[3]。目前無論是針對局部晚期胃癌還是轉移性胃癌，化療有效率都較低，個體差異大，所以提高治療有效率成為目前國內外研究的熱點。奧沙利鉑是胃癌治療的一線藥物[4]。奧沙利鉑進入腫瘤細胞后與DNA結合，形成鉑-DNA復合物導致DNA結構改變，引起DNA復制障礙，從而抑制腫瘤細胞的分裂和生長。切除修復交叉互補基因1（excision repair crosscomplementation group 1，ERCC1）是核苷酸切除修復途徑的限速酶，在核酸損傷修復過程和細胞凋亡過程中起著重要作用。近年來有文獻[5-6]指出ERCC1的單核苷酸多態(tài)性突變可以影響DNA修復能力，從而影響奧沙利鉑治療的療效。本研究探討ERCC1基因多態(tài)性與SOX方案化療療效及其與患者臨床病理參數(shù)的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月至2019年12月在我院接受SOX方案治療的進展期胃癌患者進行前瞻性研究，共計60例， 其中男性49例（81.67%），女性11例（18.33%）；年齡21 ～ 70歲，平均年齡（57.17±11.32）歲。TNM分期：Ⅲ期19例，Ⅳ期41例。納入標準：病理組織學診斷明確為局部進展（不能手術）或轉移性胃癌；經CT、MRI、B超檢查證實均有可測量病灶；預計生存期＞ 3個月；接受SOX方案化療2周期以上，并知情同意。排除標準：之前接受過化療或是放療（除非后者是放射治療野之外復發(fā)的輔助治療）；嚴重的心臟疾病、肝、腎等疾病患者，或是臨床上重大的，不可控制的伴發(fā)疾病或是該腫瘤發(fā)病之前存在或與之共存的其它癌癥的患者；在化療過程中出現(xiàn)嚴重不良反應且無法耐受毒副作用的患者。

1.2 化療方案

所有入組患者均接受SOX方案化療。奧沙利鉑（130 mg·m-2，qd，ivgtt，d1）+替吉奧（40 mg·m-2，bid，po，d1 - 14）， 3周一個療程。可評價療效患者需至少接受2個周期化療。

1.3 樣本收集和基因分型

所有患者在化療前抽取靜脈血2 mL置抗凝管中并標注患者編號和樣品編號，提取基因組DNA后低溫- 80 ℃保存。采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應（PCR-RFLP）技術檢測ERCC1 118C/T位點基因型。引物上游序列為5'-TCCAACACAGGGTCCCA-3'，引物下游序列為5'-TCAGGGACTGTCCAGGGTTA-3'。PCR反應體系50 μL，包括TaKaRa LA Taq（0.5 μL）、10×LA Taq BufferⅡ（Mg2+）（5 μL）、引物F（10 μmol·L-1，2 μL）、引物R（10 μmol·L-1，2 μL）、dNTP（1 μL）。反應條件為95 ℃預變性5 min，1個循環(huán)；95 ℃變性30 s、57 ℃退火30 s、72 ℃延伸60 s，35個循環(huán)；72 ℃徹底延伸10 min，1個循環(huán)。ERCC1 118C/T位點基因分型為C/C型、C/T型、T/T型。

1.4 療效評價指標

根據(jù)RECIST標準（1.0版）進行評價療效。分為完全緩解（complete response，CR），部分緩解（partial response，PR），穩(wěn)定（stable disease，SD）和進展（progressive disease，PD）。以CR+PR計算化療總有效率，以SD+PD計算疾病控制率。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，基因分布情況分析采用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗，采用卡方檢驗比較各基因型組有效率及不良反應的分布差異，采用Kaplan-Meier法計算不同基因型的無進展生存時間，并用Log-rank檢驗不同基因型無進展生存時間的差異，以P＜ 0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 ERCC1基因位點多態(tài)性與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關系

60例胃癌患者的臨床特征見表1。其中ERCC1 118C/T基因型三種分布頻率分別為C/C 32例（53.3%），C/T 24例（40.0%），T/T 4例（6.7%），其基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（χ2=0.031，P= 0.985）。對ERCC1不同基因型患者的臨床特征進行比較，結果顯示ERCC1 118C/T不同基因型患者年齡、性別及TNM分期間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見表1。

表1 ERCC1基因型與患者臨床特征的關系Tab 1 Relationship between ERCC1 genotype and the clinical characteristics of patients

2.2 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者化療有效率的相關性分析

60例患者均接受SOX方案化療，ERCC1 118C/T位點含T等位基因的C/T型和T/T型合并進行統(tǒng)計分析。兩周期后進行療效評價，計算化療有效率，以CR+PR為有效組，SD+PD為無效組。分析結果顯示，C/C型患者化療有效率（40.6%）較C/T+T/T型患者有效率稍高（35.7%），但不同基因型患者的化療有效率之間無統(tǒng)計學差異（P＞ 0.05），詳見表2。

表2 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者化療有效率的關系Tab 2 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and the chemotherapy efficiency in gastric cancer patients

2.3 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者無進展生存期的相關性分析

隨訪60例晚期胃癌患者SOX方案化療后患者無進展生存時間，1例失訪。C/C型32例，C/T型27例。治療后C/C型患者的平均PFS為8.49個月，C/T+T/T型平均PFS為10.44個月，含T等位基因的患者PFS較野生型長，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。具體數(shù)據(jù)見表3，Kaplan-Meier生存曲線見圖1。

表3 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者PFS的關系Tab 3 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and PFS in gastric cancer patients

圖1 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者無進展生存時間的關系Fig 1 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and progression-free survival time in gastric cancer patients

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，目前化療為主要的治療方式，以期能夠顯著改善患者的生活質量，同時明顯延長患者生存期。主要采用以鉑類為主的化療方案，其中奧沙利鉑聯(lián)合替吉奧方案是晚期胃癌一線化療方案之一[4,7]。

奧沙利鉑（oxaliplatin，L-OHP）是第三代鉑類，大量的臨床試驗證實奧沙利鉑是治療消化道腫瘤最重要的藥物之一。L-OHP更容易與DNA鏈上的G共價鍵結合，形成DNA蛋白質交聯(lián)及鏈內鏈間交聯(lián)，因而抗腫瘤作用更強[8]。但是抗腫瘤藥物對機體腫瘤細胞損傷后，機體會啟動DNA修復作用，使腫瘤細胞得以存活。Kweekel等[9]研究表明，DNA修復作用是L-OHP耐藥的主要原因。核苷酸切除修復是DNA修復作用的關鍵基因，而ERCC1在該途徑中發(fā)揮關鍵作用。有研究表明ERCC1的單核苷酸多態(tài)性與胃癌患者對化療藥物的敏感性有關[10]。因此，探討ERCC1基因多態(tài)性對以奧沙利鉑為基礎治療的胃癌患者療效的影響具有重要意義。

ERCC1基因定位于人類染色體19q13.2，大小為15 kb，有10個外顯子。在DNA修復中起著關鍵作用。其機制為ERCC1與DNA修復酶缺乏互補基因F形成具有結構特異性核酸內切酶活性異源二聚體，此異源二聚體能夠進行損傷識別和切除5’端；而且ERCC1與異源二聚體組成的核酸內切酶能夠參與同源重組途徑，同源重組途徑可被認為是腫瘤化療的潛在靶點，ERCC1在DNA鏈間交聯(lián)損傷修復途徑中起著不可替代的作用。ERCC1表達使DNA修復作用增強，L-OHP誘導的DNA絡合物的清除增加，因而抗腫瘤能力減弱，從而降低了藥物療效，而抑制ERCC1表達則可以減弱DNA修復作用，從而提高L-OHP的藥物療效。近年來，關于ERCC1基因多態(tài)性與鉑類藥物化療敏感性研究逐漸增多[11-15]，但通過基因型檢測評估化療療效尚未得到統(tǒng)一結論。有研究顯示ERCC1的基因分型C/C型胃癌患者的化療效果顯著高于C/T與T/T型[16]。本研究結果顯示，C/C型患者化療有效率（40.6%）較C/T+T/T型患者有效率稍高（35.7%），但不同基因型患者的化療有效率之間無統(tǒng)計學差異（P＞ 0.05）。有研究[17-18]表明ERCCl基因多態(tài)性與胃癌鉑類化療后的易感性無關，這與本研究結果吻合。也有研究[10]表明ERCC1基因多態(tài)性與生存期相關，T/T基因型中位PFS較C/T和C/C型顯著增加。本研究分析了ERCC1基因多態(tài)性與SOX方案治療的無進展生存時間的相關性，研究顯示治療后C/C型患者的平均PFS為8.49個月，C/T+T/T型平均PFS為10.44個月，含T等位基因的患者PFS較野生型長，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。

本研究的局限性在于造成研究結果的差異可能與樣本量較少有關，本研究只收集到4例T/T型樣本，可能影響結果的準確性，后續(xù)將進一步擴大樣本量進行驗證。影響ERCC1活性的位點較多，本研究檢測位點覆蓋還不足，盡可能多的位點才能夠得到更準確的結論，有待后續(xù)深入研究。