鴨花肝病的診斷及防治措施研究

于欽秀

（山東省安丘市新安畜牧獸醫(yī)站山東濰坊 262111）

我國是全球最大的水禽養(yǎng)殖國，水禽飼養(yǎng)規(guī)模占全球90%左右，以鴨和鵝為主，基本上采用現(xiàn)代集約化養(yǎng)殖方式為主。在這種模式下，鴨群一旦發(fā)病，尤其是高致病性傳染類疾病，往往容易在整個鴨群中迅速傳播，給養(yǎng)鴨場帶來極大的損失。鴨花肝病毒即是由呼腸孤病毒引起的一種發(fā)病率高、死亡率高、傳播速度快的病毒病。本病最早在福建莆田、福清等地發(fā)生，隨后開始全國蔓延，感染對象也從番鴨和半番鴨擴展到櫻桃谷、力佳、花邊等肉鴨[1]。應激條件下，環(huán)境衛(wèi)生差的鴨場此病發(fā)病率高。現(xiàn)對本病防治措施探討如下。

1 病原

鴨花肝病是由鴨花肝病毒感染所引起。鴨花肝病毒為呼腸孤病毒，病原屬于皰疹病毒科，沒有囊膜，不會凝集紅細胞，尤其是不凝集鴨的紅細胞。能夠在病毒培養(yǎng)中在鴨胚中出現(xiàn)明顯的病變。不同地區(qū)的病原存在一定差異。鴨花肝病毒一般存在于肝臟，其他臟器中還存在一部分，腸道中還存在病原。青霉素、鏈霉素等抗生素對此病毒起作用，處理接種病料時可加入青鏈霉素抑制其他雜菌，以利于病毒的分離提取，以便于用來檢測使用。

2 流行病學

該病主要對番鴨、半番鴨和麻鴨都有易感性，哺乳動物和人都不感染，季節(jié)性感染，一年四季都可以發(fā)生，主要以炎熱潮濕的雨季比較多發(fā)。對于7～51 日齡的雛鴨和中鴨都易感染，病愈鴨一般都會成為僵鴨。發(fā)生此病時通常都會發(fā)生并發(fā)和繼發(fā)的疾病，尤其是細菌病：鴨疫里氏桿菌病、大腸桿菌病等。該疾病的特點為發(fā)病速度快、病程短促、傳播速度快、高死亡率和高發(fā)病率。主要以預防和免疫為主，做好飼養(yǎng)管理。發(fā)病率與死亡率主要看鴨的抵抗力和病毒毒力的強弱來決定。感染嚴重者有可能導致全群死亡。

3 臨床癥狀

該病的潛伏期一般為5～9d，病程短的一般為2～3d。該病發(fā)病急，傳播迅速，病程短。初期表現(xiàn)為肢體癥狀，包括精神萎靡、縮頸、行動遲緩不合群，經(jīng)常臥倒或者蹲下，眼部腫脹，難以睜開，以及厭食等癥狀。隨之出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，運動不協(xié)調、翅膀下垂、全身性抽搐，呼吸困難。死前角弓反張，兩腳亂踢，喙端和爪尖出現(xiàn)淤血呈暗紫色。病鴨腹瀉，排黃白、黃綠稀糞。

4 病理變化

肝臟腫大，質脆，用手碰易破碎，顏色發(fā)黃或者發(fā)暗。肝臟表面有大小不一針尖樣的出血點。膽囊腫大并且呈長的卵圓形，膽囊充滿膽汁，膽汁呈褐色、黃色、淡茶色或淡綠色。脾臟腫大，有出血點。其他臟器也有部分腫大，伴有出血點。

5 診斷

5.1 臨床診斷

通過流行病學、臨床癥狀、病理變化的綜合判斷來進行初步的診斷；突然發(fā)病，傳播速度快和病程短為該病的流行病學特征，以及通過肝臟腫大等來判斷。

5.2 通過實驗室診斷

1）鴨花肝病毒的培養(yǎng)：酒精燈灼燒手術刀與鑷子取病死鴨的肝臟，進行處理和研磨，研磨成乳劑，處理過后加生理鹽水，水的比例為1：4 的混合溶液，進行離心，取其上清液，加入除菌的溶液、雙抗（青霉素、鏈霉素），在溫度為4℃中放置12h。

2）鴨胚接種：選取10～11 日齡的鴨胚或者9～11 日齡雞胚，最好是SPF 鴨胚或非免疫鴨胚，抽取0.2mL，針頭全進，進行尿囊腔接種，放在37℃恒溫箱中培養(yǎng)，24h 之后鴨胚死亡，收集24h 后死亡的鴨胚取其尿囊腔液。

3）血凝、血凝抑制試驗

血凝試驗：

試驗材料：鴨花肝病毒鴨胚接種尿囊腔液、0.5%鴨的紅細胞、生理鹽水、96 孔微量反應盤、微量移液器、槍頭。

試驗步驟：在96 孔微量反應盤上進行，從左到右分別加入50μL 生理鹽水；左側第一孔加入50μL 的病毒液，充分混勻后，吸取50μL 到第二個孔，倍比稀釋到11 孔，吸取50μL 棄掉，第12 孔為對照；在12 個孔中分別加入0.5%紅細胞，在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結果。

血凝抑制試驗：

試驗材料：4 單位病毒、0.5%鴨紅細胞、鴨免疫血清、96 孔微量反應盤、微量移液器、槍頭。

試驗步驟：在96 孔微量反應盤上進行，從左到右分別加入50μL 生理鹽水；3～12 孔加入4 單位病毒，1～10 孔加入鴨免疫血清，第3 孔充分混合后倍比稀釋到10 孔，吸取50μL 棄掉，11、12孔為對照。在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結果。

4）全血平板試驗

試驗材料：鴨花肝病毒全血凝集反應抗原、鴨花肝病毒陽性血清、生理鹽水、潔凈玻璃板、蠟筆、7#或9#注射針頭，酒精棉球（75%）、移液器、手電筒、牙簽。

試驗步驟：在潔凈的玻璃板上用蠟筆將其分為三格，將抗原瓶用振蕩器充分混勻，在三格內(nèi)分別加入一滴MS 全血凝集反應抗原；用注射針頭刺破鴨的翅靜脈，用移液器吸取一滴血加入第一個格；用移液器吸取一滴MS 陽性血清加入第二格中作陽性對照，吸取生理鹽水一滴加入第三格作陰性對照；以上的格子用牙簽攪拌混勻，散開的直徑為2cm 最好；靜置一段時間后，用手電筒反照玻璃板，觀察實驗結果。

5）血清保護試驗：用1～5 日齡易感雛鴨進行皮下注射鴨花肝病毒陽性血清1～3mL/只，1～3d 后，肌肉注射0.2～0.5mL/只病毒分離物（尿囊液）或病料上清液，接種鴨花肝病毒陽性血清的雛鴨保護率達80%～100%，對照組雛鴨的死亡率高達50%以上。

6）瓊脂擴散試驗：在無菌操作下，用梅花打孔器在瓊脂平板上打孔，將孔內(nèi)的瓊脂用注射器針頭挑出，不傷邊緣，迫使瓊脂層脫離凝底，用酒精燈火焰輕烤封底以防止側漏。用微量移液器吸取鴨花肝病毒瓊脂擴散抗原加入中間孔，外圍孔加入陽性血清和被檢血清，每孔加滿不溢出。加樣的平板倒置于濕盒中，放入37℃保溫箱反應18～24h。觀察結果，外圍孔與中間孔之間出現(xiàn)清晰白色中界則為陽性，證明被檢血清含有鴨花肝病毒。

6 防治措施

6.1 預防

1）采取嚴格的生物安全措施。加強鴨場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生清潔。為了防止鴨花肝病毒的擴散，肉鴨場要全進全出，種鴨場則應堅持早發(fā)現(xiàn)、早淘汰的原則處理病鴨，原則上可以進行立刻隔離或者直接作無害化處理。注意對鴨舍的環(huán)境定期消毒，容易殘存糞污、羽毛的角落，應認真清掃。健全鴨場的防疫制度，要求飼養(yǎng)管理人員嚴格執(zhí)行，每次清群后可以采用氫氧化鈉消毒地面和墻壁，然后再用甲醛熏蒸消毒24h 以上，盡可能殺滅病毒。做好滅鼠滅蟲，消除其傳播病毒隱患。鴨場工作人員進出場以及外來運輸車輛都要經(jīng)過嚴格消毒，所使用的器具也要做消毒處理，防止病毒帶入。

2）搞好免疫接種，提高機體特異性免疫水平。目前預防本病最有效的辦法是接種番鴨呼腸孤病毒病活疫苗（CA 株）。

種鴨免疫：臨產(chǎn)母鴨免疫兩次，間隔時間為兩周，在衛(wèi)生條件差和常發(fā)病的鴨場，在10～14 日齡時再用弱毒苗進行免疫。

雛鴨免疫：沒有經(jīng)過免疫的種鴨群，后代需要在1 日齡時皮下注射番鴨呼腸孤病毒病活疫苗（CA 株），3～7d 就會產(chǎn)生抗體，或者皮下注射1mL 高免血清或者卵黃抗體。

3）參考傳染病防治辦法，一定要認真做好相應的防疫檢疫工作。

4）各個地方畜牧獸醫(yī)管理部門應該做好疾病的調查統(tǒng)計工作，并與其他地區(qū)同步協(xié)調相關工作，盡量從源頭上清楚該病。

6.2 發(fā)病后處理

發(fā)現(xiàn)有鴨發(fā)病，馬上作隔離處理，病死鴨作無害化處理，將病鴨和受威脅鴨分開隔離到鴨舍外一個密閉區(qū)域，加強對鴨舍內(nèi)外、飲水工具和飼料器具消毒，出入人員也要加強消毒，防止疫情擴散。皮下注射高免血清或者卵黃抗體1～2ml。