威海地區(qū)新生兒耳聾基因檢測(cè)的結(jié)果分析①

孫詩雨,張春曉,藍(lán)信強(qiáng)

(青島大學(xué)附屬威海市立第二醫(yī)院(威海市婦幼保健院)醫(yī)學(xué)遺傳科，山東 威海 264200)

遺傳性耳聾是一種典型且高發(fā)的遺傳性疾病，我國(guó)新生兒發(fā)病率約為0.1%～0.3%[1]。據(jù)WHO2012年估計(jì),全球約有3.2億聽力殘疾患者,占世界總?cè)丝诘?%。我國(guó)是世界上聽力障礙人數(shù)最多的國(guó)家,據(jù)2006年我國(guó)第二次殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示,聽力殘疾人口高達(dá)2780萬,約占總殘疾人群的27%,是僅次于肢體殘疾的第二大殘疾群體。然而，聽力損失并不一定出生時(shí)就會(huì)出現(xiàn)，因此，新生兒聽力篩查會(huì)對(duì)遲發(fā)性耳聾和藥物性耳聾發(fā)生漏檢現(xiàn)象。隨著基因篩查技術(shù)的不斷發(fā)展，新生兒聽力篩查與基因篩查的逐步推廣[2]，從分子水平上，對(duì)新生兒進(jìn)行精準(zhǔn)耳聾基因分子診斷，已成為新生兒聽力診治的重要手段。本研究中，通過對(duì)威海地區(qū)2017-06～2020-02出生的1720名新生兒進(jìn)行聽力與耳聾基因聯(lián)合篩查，進(jìn)一步研究威海地區(qū)耳聾易感基因的攜帶情況，為降低耳聾患者的出生率具有重要意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

2017-06～2020-02威海市婦幼保健院出生的1720例新生兒，男嬰912例，女嬰808例，均為漢族，受檢新生兒均由監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書。

1.2 方法

采集新生兒足跟血于采血卡，2～8℃晾干后及時(shí)送檢。利用飛行時(shí)間質(zhì)譜儀檢測(cè)4個(gè)易感基因的20個(gè)位點(diǎn)，包括GJB2基因c. 235delC、c. 299-300delAT、c. 167delT、 c. 35delG和c. 176del16位點(diǎn)，GJB3基因c. 538C>T和c. 547G>A位點(diǎn)，SLC26A4基因c. 281C>T、c. 589G>A、c. 1174A>T、c. 1226G>A、c. 1229C>T、IVS15+5G>A、c. 1975G>C、c. 2027T>A位點(diǎn)2例、c. 2162C>T、 c. 2168A>G和c. IVS7-2A>G位點(diǎn)，以及線粒體12S rRNA基因m. 1555A>G和m. 1494C>T位點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 耳聾基因篩查結(jié)果

1720名新生兒耳聾基因篩查中，野生型1640例，檢出率95.34%。GJB2基因雜合突變32例，其中c. 235delC位點(diǎn)21例(1.22%)，c. 299-300delAT位點(diǎn)11例(0.64%)。SLC26A4基因雜合突變37例，其中主要突變?yōu)閏. IVS7-2A>G位點(diǎn)20例(1.16%)和c. 2168A>G位點(diǎn)6例(0.35%)，c. 589G>A位點(diǎn)2例、IVS15+5G>A位點(diǎn)1例、c. 1226G>A位點(diǎn)1例、c. 1229C>T位點(diǎn)2例、c. 2027T>A位點(diǎn)3例、c. 1975G>C位點(diǎn)3例和c. 1174A>T位點(diǎn)1例。GJB3基因雜合突變7例，其中c. 538C>T位點(diǎn)6例(0.35%)，c. 547G>A位點(diǎn)1例(0.06%)。此外，線粒體12S rRNA m. 1555A>G基因攜帶者2例(0.12%),見表1。

表1 1720例新生兒耳聾基因檢測(cè)

2.2 聽力與耳聾基因聯(lián)合篩查結(jié)果

1720例新生兒出生2～3d進(jìn)行聽力篩查，聽力篩查與基因篩查均通過1531例，聽力篩查未通過但基因篩查通過189例，聽力篩查通過但基因篩查雜合突變68例，聽力篩查未通過且基因篩查雜合突變12例。新生兒聽力篩查未通過，將進(jìn)行后續(xù)復(fù)篩和確診檢測(cè)。

3 討論

我國(guó)是世界上聽力障礙人數(shù)最多的國(guó)家，這種疾病的主要致病因素是遺傳性因素[1]。隨著基因診斷技術(shù)在臨床中的廣泛應(yīng)用，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)100種基因，超過200個(gè)突變位點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致耳聾疾病的發(fā)生(http://heretidaryhearingloss.org/)。然而一些基因突變不會(huì)在新生兒出生伴隨著聽力缺失，例如Pendred綜合征、線粒體12S rRNA m. 1555A>G和m. 1494C>T、前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大等[2]。本研究中，通過對(duì)新生兒進(jìn)行聽力篩查與耳聾基因篩查聯(lián)合檢測(cè)，進(jìn)一步提高了新生兒耳聾疾病的檢出率。耳聾基因篩查對(duì)聽力篩查未通過的新生兒耳聾疾病的早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)具有重要意義。

在全國(guó)范圍內(nèi)，非綜合征型耳聾患者中GJB2基因突變是主要的基因致病因素，尤其是GJB2 c. 235delC突變位點(diǎn)是中國(guó)耳聾患者中主要的突變位點(diǎn)，其突變率13.64%～21.50%[3]。GJB2基因位于常染色體13q12.11區(qū)域，含有兩個(gè)外顯子，然而只有第二外顯子為GJB2基因的蛋白編碼區(qū)，編碼允許離子和小分子代謝物通過的縫隙連接蛋白(Connexin26蛋白)[4]。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)GJB2基因是新生兒攜帶的主要易感基因，1720名新生兒中32例GJB2基因雜合突變，攜帶率1.86%(32/1720)，其中c. 235delC位點(diǎn)21例(1.22%)，c. 299-300delAT位點(diǎn)11例(0.64%)。此外，在1720名新生兒耳聾基因檢測(cè)中，我們未檢測(cè)出c. 167delT、 c. 35delG和c. 176del16位點(diǎn)，這說明新生兒攜帶耳聾的常見基因的位點(diǎn)在不同地區(qū)遺傳性存在差異。

SLC26A4基因位于常染色體7q31，基因全長(zhǎng)4.93kb，包含21個(gè)外顯子，該基因編碼一種陰離子跨膜蛋白Pendred蛋白，該蛋白在內(nèi)淋巴穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)具有重要作用[5]。SLC26A4基因突變會(huì)破壞耳蝸的離子穩(wěn)態(tài)，從而引起大前庭水管耳聾綜合征疾病[3,4]。本研究中，1720名新生兒中SLC26A4基因雜合突變39例。其中c. IVS7-2A>G位點(diǎn)20例(1.16%)，c. 2168A>G位點(diǎn)6例(0.35%)，c. 2027T>A和c. 1975G>C位點(diǎn)各3例，c. 589G>A和c. 1229C>T位點(diǎn)各2例，IVS15+5G>A、c. 1226G>A和c. 1174A>T位點(diǎn)各1例。在Tsukamoto等[6]團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，亞洲一些地區(qū)SLC26A4基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)為c. 2168A>G。然而，在威海地區(qū)SLC26A4基因的主要突變位點(diǎn)為c. IVS7-2A>G，其突變頻率遠(yuǎn)高于c. 2168A>G位點(diǎn)。此外，SLC26A4基因的其他位點(diǎn)c. 589G>A、c. 1174A>T、c. 1226G>A、c. 1229C>T、IVS15+5G>A、c. 1975G>C和c. 2027T>A雖然突變頻率較低，但在威海地區(qū)均有分布。然而，在威海地區(qū)1720名新生兒的基因檢測(cè)中未發(fā)現(xiàn)c. 281C>T和c. 2162C>T位點(diǎn)。SLC26A4基因是一種感應(yīng)神經(jīng)性語前聾或語后聾的隱性遺傳基因[7]，可引起漸行性聽力下降，因此對(duì)于SLC26A4基因純合突變的新生兒要注意及時(shí)觀察，以防新生兒伴隨年齡的增長(zhǎng)而逐漸聽力損失。

GJB3基因位于常染色體1p33-p35，包含兩個(gè)外顯子和一個(gè)由813堿基對(duì)組成的開放閱讀框，GJB3基因表達(dá)主要位于表皮上分化層中的顆粒層，其次表達(dá)在末梢神經(jīng)和耳蝸中[8]。本研究中，7例新生兒存在GJB3基因突變，其中c. 538C>T位點(diǎn)6例，c. 547G>A位點(diǎn)1例。GJB3基因是我國(guó)克隆的第一個(gè)致聾基因突變，有研究表明GJB3基因熱點(diǎn)突變c. 538C>T是顯性遺傳，也有研究表明，GJB3基因突變主要表型是語后進(jìn)行性高頻聽力感應(yīng)神經(jīng)性耳聾。因此，對(duì)于GJB3基因突變但聽力篩查通過的新生兒需要注意臨床指導(dǎo)和觀察，從而降低耳聾的發(fā)生。

首次發(fā)現(xiàn)第一個(gè)線粒體12S rRNA m. 1555A>G突變與非綜合征型耳聾相關(guān)，并確定了線粒體12S rRNA基因的遺傳方式為X-連鎖的母系遺傳是從三個(gè)中國(guó)家系和一個(gè)阿拉伯-以色列家庭中發(fā)現(xiàn)的，其基因突變與氨基糖苷類藥物引起的藥物性致聾有關(guān)[9]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，約4.4%的耳聾患者攜帶線粒體基因突變，其主要突變?yōu)閙.1555A>G。本研究中，2例新生兒耳聾基因12S rRNA突變位點(diǎn)為m.1555A>G。此外，研究人員在2例中國(guó)非綜合征型耳聾患者中發(fā)現(xiàn)12S rRNA基因m. 1494C>T突變，同樣是具有母系遺傳性，并且與氨基糖苷類藥物誘導(dǎo)相關(guān)[10]，然而在本研究中，未發(fā)現(xiàn)m. 1494C>T突變，進(jìn)一步說明了不同地區(qū)耳聾基因分布存在差異。對(duì)于12S rRNA m.1555A>G突變的2名新生兒來說，應(yīng)該注意其安全用藥，以防由于藥物的使用導(dǎo)致耳聾疾病的發(fā)生。

綜上所述，威海地區(qū)1720名新生兒耳聾基因篩查得到主要攜帶基因?yàn)镚JB2 c. 235delC(21例)和SLC26A4 c. IVS7-2A>G(20例)。此外，后天高頻感音神經(jīng)性耳聾GJB3基因攜帶者7例，其中c. 538C>T位點(diǎn)突變6例，還有2例藥物敏感性耳聾12S rRNA m.1555A>G突變。耳聾基因篩查與新生兒聽力篩查聯(lián)合使用具有重要的意義，尤其是耳聾基因篩查可以檢測(cè)出藥物敏感性耳聾基因攜帶者和遲發(fā)性耳聾基因攜帶者，對(duì)這兩種基因攜帶者具有警示作用。對(duì)于藥物敏感性耳聾基因攜帶的新生兒需要提供安全用藥指導(dǎo)，對(duì)于遲發(fā)性耳聾基因攜帶者要注意耳部保健和提早干預(yù)。耳聾基因篩查是從分子角度對(duì)新生兒進(jìn)行聽力檢測(cè)，為耳聾基因攜帶者提供指導(dǎo)，有助于減少后代耳聾疾病的發(fā)生，對(duì)家庭和社會(huì)具有重要意義。