復(fù)方新會(huì)陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量測(cè)定

梁志云 昌水平 張 明 蔣三元

廣東省江門市新會(huì)區(qū)中醫(yī)院，廣東 江門 529100

廣陳皮是茶枝柑Citrusreticulata“Chachi”的干燥成熟果皮，以新會(huì)陳皮為道地藥材，與其他產(chǎn)地的陳皮所含的成分存在差異，按陳皮的檢測(cè)方法其質(zhì)量無(wú)法達(dá)到法定要求，2020年版《中國(guó)藥典》對(duì)廣陳皮進(jìn)行了修訂，要求作橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三種成分的含量測(cè)定[1]。現(xiàn)代藥理研究[2]表明，新會(huì)陳皮的黃酮類成分有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗過(guò)敏等作用，其中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素是促進(jìn)胃腸動(dòng)力的活性物質(zhì)，橙皮苷的抗氧化活性最強(qiáng)，川陳皮素能舒張支氣管起到平喘的治療效果，橘皮素具有很好的祛痰、理氣作用。復(fù)方新會(huì)陳皮含片是以道地藥材新會(huì)陳皮為主藥的制劑，具有順氣化痰，祛風(fēng)健胃的功效，用于風(fēng)寒咳嗽、痰多嘔逆。該含片制劑研制過(guò)程中，雖然做了橙皮苷的含量測(cè)定研究[3]，但并不能真正達(dá)到制劑質(zhì)量控制的要求。因此，本文重新探討了復(fù)方新會(huì)陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三種成分的含量測(cè)定，更好地控制其含片的內(nèi)在質(zhì)量，對(duì)保證制劑在臨床用藥中的良好療效有著重要意義。

1 儀器與試藥

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津)；XY4-180E超聲波清洗機(jī)(上海析宇儀器有限公司)；AUW120D十萬(wàn)分之一電子分析天平(日本島津)。橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：190802)，川陳皮素(批號(hào)：200322)，橘皮素(批號(hào)：190918)，均購(gòu)于成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司。復(fù)方新會(huì)陳皮含片(批號(hào)：20190906，20191010，20191115，由江門市新會(huì)區(qū)中醫(yī)院制備，規(guī)格：每片重0.8 g)；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-SP柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm(0～15 min)、330 nm(15～40 min)；流速：1 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫條件

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品5.78 mg、川陳皮素對(duì)照品7.84 mg、橘皮素對(duì)照品3.36 mg，分別置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。按8∶1∶1比例，依次精密吸取上述三種對(duì)照品溶液置同一個(gè)10 mL量瓶中，搖勻，制成混合對(duì)照品溶液，其濃度分別為橙皮苷289 μg·mL-1、川陳皮素39.2 μg·mL-1、橘皮素16.8 μg·mL-1。

2.3 供試品溶液的制備 取復(fù)方新會(huì)陳皮含片研磨成粉末，精密稱取粉末約0.5 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，超聲處理45 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺少陳皮藥材的陰性對(duì)照樣品，同供試品“2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下操作，制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)考察 在上述色譜條件下，精密吸取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、2.3項(xiàng)下供試品溶液和2.4項(xiàng)下陰性對(duì)照溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果表明，供試品的保留時(shí)間和峰型與混合對(duì)照品一致，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

1.橙皮苷；2.川陳皮素；3.橘皮素

2.6 線性關(guān)系 精密吸取混合對(duì)照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其回歸方程分別為：橙皮苷y=427363x-38147(r=0.9999)，川陳皮素y=155126x-13930(r=0.9999)，橘皮素y=86681x-19198(r=0.9997)。橙皮苷、川陳皮素、橘皮素分別在0.289～5.78 μg、0.0392～0.784 μg、0.0168～0.336 μg的線性范圍內(nèi)，與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。橙皮苷的RSD為0.68%，川陳皮素的RSD為1.27%，橘皮素的RSD為0.94%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液 10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定并記錄峰面積值。試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，供試品中橙皮苷的RSD為1.06 %，川陳皮素的RSD為1.62%，橘皮素的RSD為0.81%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取復(fù)方新會(huì)陳皮含片0.5 g(批號(hào)：20191010)，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定并記錄峰面積，計(jì)算三種成分的含量。橙皮苷的平均含量為9.4624 mg·g-1，RSD為0.73%；川陳皮素的平均含量為0.9249 mg·g-1，RSD為0.34%；橘皮素的平均含量為0.6088mg·g-1，RSD為0.21%。說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收試驗(yàn) 取已知三種成分含量的復(fù)方新會(huì)陳皮含片(批號(hào)：20191010)，精密稱取樣品約0.25 g，共5份，分別置于10 mL量瓶中，加入一定量的對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定并記錄峰面積，計(jì)算橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方新會(huì)陳皮含片的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 (n=5)

2.11 樣品含量測(cè)定 取三批復(fù)方新會(huì)陳皮含片樣品，按“2.3”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液，注入高效液相色譜儀，外標(biāo)法計(jì)算樣品中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 復(fù)方新會(huì)陳皮含片的含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

廣陳皮(新會(huì)陳皮)是廣東十大道地中藥材之一。對(duì)新會(huì)陳皮的橙皮苷、川陳皮素、橘皮素成分含量測(cè)定研究已有報(bào)道[4-7]，2020年版《中國(guó)藥典》一部，陳皮項(xiàng)下對(duì)廣陳皮橙皮苷、川陳皮素、橘皮素含量列為質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)。復(fù)方新會(huì)陳皮含片中主藥就是新會(huì)陳皮，以藥粉直接入藥，參照藥典實(shí)驗(yàn)，結(jié)果按藥典流動(dòng)相梯度洗脫中，可能是復(fù)方制劑中成分較復(fù)雜的關(guān)系，川陳皮素峰與橘皮素峰之間分離度較差，雜峰影響較大，不能完全分離出指標(biāo)成分峰，經(jīng)多次調(diào)整流動(dòng)相比例與分析時(shí)間，按表1梯度洗脫結(jié)果樣品中三種成分峰基線分離度大于1.5，峰形良好，且保留時(shí)間適宜。

藥典要求廣陳皮中含橙皮苷不得少于2.0%，含川陳皮素和橘皮素的總量不得少于0.42%。復(fù)方新會(huì)陳皮含片實(shí)驗(yàn)用量的廣陳皮折算，含橙皮苷約3.8%，含川陳皮素和橘皮素的總量約為0.53%，結(jié)果表明新會(huì)陳皮原材料質(zhì)量良好。

本文建立的高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方新會(huì)陳皮含片中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量方法，簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，能較好的控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，是有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)資料。