人乳頭狀瘤病毒E6/E7mRNA在宮頸高度鱗狀上皮內病變患者診斷中的應用價值

徐海元，郭宗，王中山，范學亮，鄭鶴，殷仁斌，張曉燕，劉亞南，張姍姍

(鄭州金域臨床檢驗中心，河南 鄭州 450000)

持續感染人乳頭狀瘤病毒(HPV)是造成宮頸上皮內瘤變中度及以上(高度鱗狀上皮內病變)病變發生、發展的重要原因[1]。既往，多采用HPV基因(HPV DNA)檢測，但其僅能反映宮頸上皮細胞的病毒種類和(或)載量，不能提供病毒活動程度以及整合程度的相關信息，而且絕大多數的HPV感染為一過性且在1年內可恢復正常，臨床檢測具有局限性[2-3]。研究表明，HPV E6/E7基因可對機體的免疫應答產生干擾，其自身表達能反映HPV的基因活性，當表達失控時會引發宮頸癌[4]。因此，對宮頸病變患者的HPV E6/E7 mRNA水平進行檢測，或許能反映出HPV感染程度以及癌變風險[5]。基于此，本研究旨在探討HPV E6/E7 mRNA在宮頸高度鱗狀上皮內病變患者診斷中的應用價值。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2018年1月我院收治的120 例宮頸高度鱗狀上皮內病變患者為觀察組，并選取同期120 例宮頸低度鱗狀上皮內病變患者為對照組。觀察組年齡(42.83±1.56)歲，體質量(75.00±5.50)kg。對照組年齡(43.00±1.52)歲，體質量(76.00±5.44)kg。兩組一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。本研究均經醫學倫理委員會批準。

1.2 納入及排除標準

納入標準：所有患者均經病理活組織檢查確診為高度鱗狀上皮內病變以及低度鱗狀上皮內病變患者；有性生活史者；有完整子宮者；患者與家屬均知情并簽署知情同意書。排除標準：近期接受宮頸病變藥物治療者；合并非宮頸組織的其他惡性腫瘤者；近期接受放療以及化療者；6個月內給予免疫調節劑或免疫抑制劑治療者；7 d內有陰道給藥者；免疫功能缺陷者；嚴重傳染性疾病者。

1.3 方法

兩組患者均先進行HPV DNA檢測。使用廣州安必平醫藥科技有限公司生產的檢測試劑盒、珠海黑馬醫學儀器有限公司生產的基因擴增PCR儀及佛山達安醫療設備有限公司的全自動核酸分子雜交儀，嚴格按照產品說明書進行檢測操作。對28種HPV亞型進行檢測。判斷標準：1種HPV陽性即為陽性。使用河南中美合資科蒂亞生物技術有限公司生產的試劑盒再進行HPV E6/E7 mRNA檢測，將檢測結果輸入電腦軟件換算為拷貝數。判斷標準：以拷貝數≥1 copy/mL為陽性。統計并比較兩組HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA陽性以及陰性數量，計算陽性檢出率。

1.4 統計學方法

采用SPSS20.0軟件進行數據處理，計數資料以百分數和例數表示，組間比較采用χ2檢驗。將宮頸病變患者作為狀態變量，HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率作為自變量，繪制受試者工作曲線(ROC)，觀察曲線下面積(AUC)，檢驗HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA在診斷宮頸高度鱗狀上皮內病變患者中的價值。AUC≤0.5說明無預測價值；AUC>0.5～0.7說明預測價值較低，AUC>0.7～0.9說明有較好的預測價值；AUC>0.9說明預測價值好。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HPV DNA與HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率

觀察組HPV DNA，HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率均高于對照組，差異有統計學意義(χ2分別為9.351和109.969，P<0.05)(見表1)。

表1 兩組陽性檢出率比較 例(%)

2.2 HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測預測宮頸高度鱗狀上皮內病變患者的價值分析

將不同級別宮頸病變作為狀態變量，將HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率作為自變量，繪制ROC曲線，結果顯示HPV DNA檢測陽性率預測宮頸高度鱗狀上皮內病變的AUC為0.575(95%CI：0.503～0.647)，預測價值較低。HPV DNA檢測的標準誤為0.037。HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率預測宮頸高度鱗狀上皮內病變的AUC為0.838(95%CI：0.783～0.892)，預測價值較好。HPV E6/E7 mRNA檢測的標準誤為0.028(見圖1、圖2)。

圖1 HPV DNA檢測預測宮頸高度鱗狀上皮內病變的ROC曲線圖

圖2 HPV E6/E7 mRNA檢測預測宮頸高度鱗狀上皮內病變的ROC曲線圖

3 討 論

宮頸是女性內生殖器的一部分。宮頸病變指宮頸區域發生的各種病理性改變，主要包括炎癥、損傷、腫瘤以及癌前病變等，是女性最常見的疾患之一，其最嚴重的疾病是子宮頸癌[6-7]。而宮頸高度鱗狀上皮內病變主要指的是高級別鱗狀上皮內病變(HSIL)，包括宮頸上皮內瘤變2級(CIN2)和宮頸上皮內瘤變3級(CIN3)，是浸潤程度較高的癌前病變。宮頸高度鱗狀上皮內病變患者無特殊癥狀，偶有陰道排液增多，伴有或不伴有臭味，也可在性生活或者婦科檢查后發生接觸性出血。臨床檢查時可見子宮頸光滑，或僅見局部紅斑、白色上皮，或子宮頸糜爛樣表現，病灶不明顯，往往會忽略病情，延誤治療，導致其向子宮頸癌發展。有研究表明，宮頸高度鱗狀上皮內病變最主要的致病原因是宮頸長期被HPV感染，通過檢測HPV有利于篩查及鑒別宮頸上皮類瘤樣病變和宮頸癌[8-9]。目前臨床主要依據HPV DNA檢測診斷感染的病毒類型或負荷量[10]。但該檢測只能判斷有無HPV病毒感染，不能判斷HPV病毒是否整合進入宿主細胞，也不能鑒別宮頸病變發展程度，對HPV感染活動程度以及惡性轉化風險不能實現有效預測[11-12]。研究表明[13]，HPV E6/E7基因蛋白長時間處于高水平狀態是宮頸病變的始發因素。在HPV病毒整合入駐宿主細胞后，HPV E6/E7 mRNA編碼的蛋白會對腫瘤抑制因子(RPb，P53)產生抑制作用，對細胞周期調控、免疫逃逸等機制產生阻礙作用，造成宮頸細胞發生癌變[14]。同時HPV E6/E7 mRNA能夠準確反映HPV病毒在宿主細胞內轉錄以及復制的活動程度，有效預測宮頸癌病的風險[15]。本研究結果顯示，觀察組HPV DNA檢測以及HPV E6/E7 mRNA檢測的陽性檢出率高于對照組。繪制ROC曲線，結果顯示HPV E6/E7 mRNA檢測預測宮頸高度鱗狀上皮內病變的AUC為0.838，預測價值較好。表明將HPV E6/E7 mRNA檢測用于宮頸高度鱗狀上皮內病變患者的臨床診斷中，能獲得較高的陽性預測值，可作為宮頸高度鱗狀上皮內病變患者的有效預測指標，應用價值較高。