高效液相色譜法同時測定八珍丸（濃縮丸）中5個成分的含量

王月玲，徐雪梅，陳文慧，白雯靜，王蕙

（蘭州市食品藥品檢驗所，甘肅 蘭州 730050）

0 引言

八珍丸（ 濃縮丸） 由白術（炒）、黨參、茯苓、甘草、當歸、白芍、川芎、熟地黃等八味藥組成，具有補氣益血的作用，臨床上主要用于氣血兩虛，面色萎黃，食欲不振，四肢乏力，月經過多[1]。據文獻報道，該藥還對于頑固性頭痛經中醫辨證屬于氣血兩虛所致者有效，癥見頭痛纏綿難愈、面色萎黃、頭暈目眩等癥[2]，且該藥屬于國家基本藥物之一[3]。據文獻報道，黃衛娟等人采用高效液相色譜法對八珍丸（濃縮丸）中芍藥苷的含量測定方法進行了研究[4]。崔慧芳等人也對此成分含量也進行了研究[5]。本文運用HPLC法建立了同時測定八珍丸 （濃縮丸）5個成分的含量測定方法，現講方法匯報如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器。Waters e2695高效液相色譜儀；MITTLE XSR205DU電子天平；超聲清洗機；密理博公司超純水機。

1.2 對照品與試劑。白術內酯Ⅲ：批號111978-201501，含量99.9%；芍藥苷：批號110736-201842，含量97.4%；甘草酸銨：批號110731-201720，含量97.7%；毛蕊花糖苷：批號111530-201713，含量92.5%；阿魏酸：批號110773-201915，含量99.4%。以上對照品均來源于中國食品藥品檢定研究院。甲醇、乙腈為德國默克公司生產色譜純試劑，其它試劑為國產分析純試劑，水為密理博超純水機所生產超純水。

1.3 樣品。市售八珍丸（濃縮丸）9批，規格均為每8丸相當于原生藥3 g。

2 方法

2.1 色譜條件。以資生堂MGⅡ十八烷基鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-甲醇（60:40）為流動相A，0.6%磷酸水溶液為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長芍藥苷、甘草酸銨、白術內酯Ⅲ為230 nm，阿魏酸和毛蕊花糖苷為320 nm；流速1.0 mL·min-1，進樣量20μL，柱溫35℃，洗脫梯度見表1。

表1 梯度洗脫程序

2.2 測定法

2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取白術內酯Ⅲ對照品0.01032 g，芍藥苷對照品0.01103 g，毛蕊花糖苷對照品0.01111 g，分別置10 mL量瓶中，阿魏酸對照品0.01199 g，置50 mL量瓶中，甘草酸銨對照品0.01148 g，置25 mL量瓶中，分別加75%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取上述5種溶液各2 mL，置同一10 mL量瓶中，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取各份樣品適量，粉碎，分別精密稱取細粉約1.0 g，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇溶液100 mL，稱定重量，超聲提取（500 W，50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學驗證

2.3.1 精密度試驗：取2.2.2項下的混合對照品溶液，按上述色譜條件，連續進樣6針，分別記錄色譜圖。積分顯示各峰面積的RSD均小于2.0%，表明儀器重復性符合要求，圖譜分別見圖1，圖2。

圖1 混合對照品溶液在230 nm波長下圖譜

圖2 混合對照品溶液在320 nm波長下圖譜

2.3.2 重復性試驗：精密稱定同一批次八珍丸 （濃縮丸）樣品6份，按上述供試品溶液制備方法分別制備供試品重復性試驗溶液。記錄色譜圖，計算各個成分的含量，結果RSD均小于2.0%，在可接受限度以內。

2.3.3 準確度試驗：精密稱定已知含量的樣品6份，每份1.0 g，置250 mL具塞錐形瓶中，分別加各個對照品溶液1 mL，按上述供試品溶液制備方法分別制備成供試品加標溶液，記錄色譜圖，計算加標回收率，結果加標回收率均大于90%，表明本方法準確性良好。

2.3.4 穩定性試驗：取同一份供試品溶液，在溶液制備后0、3、6、9、12 h分別進行測定，計算色譜圖峰面積RSD。結果顯示，各成分在不同時間測定的數據RSD均小于2.0%，可見供試品溶液在12 h內性質穩定。

2.3.5 線性關系考察：精密吸取2.2.1項下的混合對照品溶液1，5，10，15，20，25μL，記錄色譜圖。以對照品質量與色譜峰峰面積擬合標準曲線，得到各組分回歸方程與相關系數，結果見表2。

表2 結果數據

3 結果

運用該方法進行測定，白術內酯Ⅲ、芍藥苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、甘草酸銨5個成分分離效果良好，溶液濃度和峰面積在一定濃度范圍內呈現線性，回歸方程相關系數r>0.99，運用外標法計算，結果顯示方法精密度、重復性、加標回收率均符合要求。

4 討論

目前國內外有關八珍丸（大蜜丸、水蜜丸）的質量標準的研究有很多報道，八珍丸（水蜜丸、大蜜丸） 中各組分均為粉末入藥，現行標準為《中國藥典》2015年版，該品種正文項下除對各組分進行了顯微鑒別外，還運用薄層色譜技術對白芍、甘草進行了鑒別，對其中白芍運用HPLC法進行了含量測定[6]。據文獻報道，孫燕等人對八珍丸HPLC特征指紋圖譜進行了探索，對多種成分定量分析方法進行了研究[7]。而目前對八珍丸（濃縮丸）的研究卻較為鮮見，八珍丸（濃縮丸）的現行標準為《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第八冊

WS3-B-1478-93。該標準正文項下只考察了性狀、鑒別兩個項目，鑒別項下僅對當歸進行了顯微鑒別，對其它藥味均未進行鑒別和含量測定，因此無法對該藥市售品種的真偽進行甄別，優劣進行評價。這與我國目前的建立最嚴謹的標準，構建科學、全面、可檢驗、能執行的藥品標準體系的方針政策嚴重不相適應，和我國當前的科學技術發展水平不相匹配，因此對其現行標準進行研究顯得非常地必要。本文采用高效液相色譜法建立了一種八珍丸（濃縮丸）中5種成分的含量測定方法， 并進行了方法學驗證，結果表明該方法操作簡便，準確可靠，為八珍丸（濃縮丸）的質量控制提供參考。