日糧中添加小肽對育肥牦牛生產性能和消化道PepT1 mRNA表達的影響

苗建軍，彭忠利，高彥華，柏雪，謝昕廷

日糧中添加小肽對育肥牦牛生產性能和消化道PepT1 mRNA表達的影響

苗建軍，彭忠利，高彥華，柏雪，謝昕廷

（西南民族大學畜牧獸醫學院/青藏高原動物遺傳資源保護與利用教育部重點實驗室，成都 610041）

【】研究日糧中添加小肽對育肥牦牛生產性能、養分表觀消化率、血液指標及消化道小肽轉運載體1（PepT1）mRNA表達的影響，為小肽在牦牛日糧中的合理應用提供數據支持。選取36頭體重（（180.98±20.57）kg）相近，健康的麥洼公牦牛，按照隨機區組試驗設計分為4組，每組9個重復，每個重復1頭牛。分別飼喂小肽添加水平為0、0.75%、1.50%、2.25%的全混合日糧。預飼期30 d，正試期80 d。試驗開始和結束時記錄體重，每日飼喂時記錄每頭牦牛的喂料量及剩料量。試驗最后一周，連續3 d收集每頭牦牛的飼料及糞便樣品，進行常規營養分析；同時，每組選取5頭牦牛采集頸靜脈血并制備血清，測定血清生化及免疫指標。試驗結束后，將每組采血的5頭牦牛屠宰，立即取瘤胃、網胃、瓣胃、皺胃及十二指腸、空腸、回腸組織，通過實時熒光定量PCR法測定各組織中PepT1 mRNA的表達量。（1）平均日增重（ADG）、干物質采食量（DMI）和料重比（F/G）隨小肽添加水平的升高均呈二次曲線變化（＜0.05），以2.25%組牦牛的生產性能表現最優，其DMI和ADG均顯著高于對照組和0.75%組（＜0.05），而F/G顯著低于對照組和0.75%組（＜0.05）。（2）隨小肽添加水平的升高，日糧有機物（OM）和粗蛋白（CP）的表觀消化率呈二次曲線上升（＜0.05），中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）的表觀消化率線性升高（＜0.01），以2.25%組消化率最高；各處理組中鈣、磷的表觀消化率無顯著差異（＞0.05）。（3）隨小肽添加水平的升高，血清中谷丙轉氨酶（ALT）含量線性降低（＜0.05），而尿素氮（UN）含量線性升高（＜0.05），總蛋白（TP）含量有線性升高的趨勢（＜0.10），谷草轉氨酶（AST）含量呈二次曲線降低（＜0.05），而堿性磷酸酶（ALP）、葡萄糖（GLU）、膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）含量未產生顯著變化（＞0.05）；日糧中添加不同水平小肽對牦牛血清中IgG、IgA和IgM三種免疫球蛋白的含量均無顯著影響（＞0.05）。（4）牦牛消化道中PepT1 mRNA表達量由高到低依次為空腸、回腸、十二指腸、網胃、瓣胃、瘤胃、皺胃，且空腸PepT1 mRNA的表達量顯著高于其他消化道部位（＜0.05），而皺胃PepT1 mRNA的表達量顯著低于空腸和回腸（＜0.05）；回腸、十二指腸、瘤胃、網胃、瓣胃的PepT1 mRNA表達量無顯著差異（＞0.05）。隨小肽添加水平的升高，瘤胃、網胃和空腸的PepT1 mRNA表達量均呈線性升高變化（＜0.05），但對瓣胃、皺胃、十二指腸和回腸的PepT1 mRNA表達量均無顯著影響（＞0.05）。日糧中添加小肽能夠提高育肥牦牛的生產性能和養分表觀消化率，改善肝功能，促進小肽在消化道中的轉運吸收。在本試驗條件下，日糧小肽添加水平為2.25%時飼喂效果最佳。

小肽；育肥牦牛；生產性能；養分表觀消化率；血液指標；PepT1 mRNA表達

0 引言

【研究意義】受自然條件、風俗習慣等影響，青藏高原地區的牦牛養殖長久以來處于靠天養畜的傳統模式下，集約化程度低，生產效率低下。牦牛舍飼育肥技術的推廣，能夠提高牦牛的生產效率，彌補牦牛肉在市場上斷季供應的缺陷，提升牦牛產品的商品率。因此，選擇適宜飼料添加劑，優化牦牛飼料配方，對于提升牦牛的生產性能，增加牧民的經濟效益具有重要意義。【前人研究進展】小肽是含有2或3個氨基酸的小分子物質，主要由飼糧蛋白在胃腸道內消化后得到，具有多種生物學功能，是一種安全、高效的飼料添加劑[1]。有研究表明，在日糧中添加小肽能夠促進動物機體蛋白質的合成[2]、增強機體免疫力[3-5]、提高飼料養分的消化率[6]、提高動物的生產性能[7-9]，具有廣闊的應用前景。小肽的轉運方式主要包括：載體轉運、滲透擴散、旁細胞穿透和胞吞4種方式，載體轉運為主動轉運，需要消耗能量，其余3種方式為被動轉運，無能量消耗[10]。轉運載體主要為小肽轉運載體1（PepT1），可以轉運二肽、三肽和擬肽類藥物[1]。區別于氨基酸的轉運載體，PepT1的轉運不存在專一性，對400種二肽和8 000種三肽具有轉運能力，是低親和力、高容量的載體[11]。反芻動物PepT1主要分布于胃上皮組織和小腸黏膜[12-13]，在奶牛[14]、綿羊[12, 15]、湖羊[16]上的研究顯示，PepT1 mRNA在小腸各腸段的表達量要高于胃，但在肉牛上的研究發現，PepT1 mRNA在瓣胃和瘤胃的表達量要高于十二指腸[13]，可見PepT1 mRNA在消化道中的表達存在物種差異性。【本研究切入點】牦牛是高海拔地區的特有家畜，其對氮利用的機制可能與其他低海拔生存的反芻動物有所不同，且飼養方式的改變能否引起PepT1表達的差異也有待進一步研究。【擬解決的關鍵問題】本研究通過開展牦牛的舍飼育肥試驗，探討日糧中添加不同水平小肽對育肥牦牛生產性能、養分表觀消化率以及血清生化指標的影響，并通過實時熒光定量PCR技術，對牦牛消化道PepT1 mRNA的表達量進行分析，旨在揭示PepT1在育肥牦牛消化道的表達特性，并探尋小肽添加水平對牦牛消化道PepT1表達的影響，為小肽在牦牛日糧中的合理應用提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

材料：富力肽[酸溶蛋白（小肽）≥28.0%，水分≥8.0%，粗脂肪≥2.5%，粗灰分≥15.0%，粗纖維≥7.0%，游離棉酚≤400 mg·kg-1]，由成都美溢德生物技術有限公司生產，選用棉籽蛋白為原料，經液態組合酶解制得（表1）。

表1 富力肽中氨基酸組成及含量（干物質基礎）

1.2 試驗時間與地點

試驗于2017年11月至2018年3月在四川省阿壩藏族羌族自治州茂縣茂欣農牧業發展有限責任公司進行，試驗場海拔1 450 m，整個試驗期內圈舍最高溫25℃，最低溫4℃。

1.3 試驗動物與試驗設計

選取36頭體重（（180.98±20.57）kg）相近，健康的麥洼公牦牛，按照隨機區組試驗設計分為4組，每組9個重復，每個重復1頭牛。分別飼喂小肽添加水平為0、0.75%、1.50%、2.25%的全混合日糧。預飼期30 d，正試期80 d。

1.4 試驗日糧

采用TMR全混合日糧，由玉米型精料和青貯、發酵酒糟混合而成。每天按預估采食量現配現用。各處理組日糧組成及營養成分見表2。

1.5 飼養管理

試驗開始前對圈舍清理消毒，牦牛進圈后用伊維菌素注射液皮下注射驅蟲，稱重后分組，栓系飼喂，每日8：00和15：00各飼喂一次，自由采食、自由飲水。

1.6 樣品采集及檢測指標

1.6.1 生產性能 試驗開始和結束時，晨飼前對每頭試驗牦牛空腹稱重，記錄初重（IBW）和末重（FBW）；每日飼喂時，精確記錄每頭牦牛的喂料量及剩料量，計算干物質采食量，試驗結束后計算平均日增重（ADG）、平均干物質采食量（DMI）以及料重比（F/G）。

表2 試驗日糧組成及營養成分（干物質基礎）

1)預混料為每千克日糧提供：維生素A 2 500 IU，維生素D 500 IU，維生素E 30 IU，銅10 mg，鐵50 mg，錳30 mg，鋅30mg，碘0.5 mg，硒0.1 mg，鈷0.2 mg。2)增重凈能為計算值，其他營養指標為實測值

1)The premix provided the following per kg of diets：VA 2500 IU, VD 500 IU, VE 30 IU, Cu 10 mg, Fe 50 mg, Mn 30 mg, Zn 30 mg, I 0.5 mg, Se 0.1 mg, Co 0.2 mg.2)Net energy for gain was a calculated value, while other nutrient indexes were measured values

1.6.2 養分表觀消化率 試驗結束前3天，每天每頭牦牛收集新鮮糞便100 g，每份糞便加入10 mL 10%的H2SO4固氮，3 d收集完成后，將同一頭牦牛的糞便混合，取150 g于-20℃冷凍保存。除糞樣外，每天同時采集各處理組日糧1 kg，將3 d的樣品混合后取樣1 kg，帶回實驗室65℃烘干，粉碎后過20目篩，進行常規營養分析，采用酸不溶灰分（AIA）作為指示劑，計算各養分的表觀消化率。

樣品中的干物質（DM）、粗蛋白（CP）、鈣（Ca）、磷（P）的測定參照張麗英[17]的方法，中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）的測定參照VAN SOEST等[18]的方法，有機物（OM）通過計算得出，酸不溶灰分的測定參照GB/T 23742-2009的方法。各養分表觀消化率計算公式如下：

某養分表觀消化率= 100%-（飼料中AIA含量/糞中AIA含量）×（糞中某養分含量/飼料中某養分含量）×100%

1.6.3 血清生化及免疫指標 試驗第80天，每組隨機選取5頭牦牛，對每頭牦牛空腹頸靜脈采血20 mL，然后在4℃下4 000 r/min離心5 min收集血清樣品，分裝于3個1.5 mL EP管后，-20℃保存。用全自動生化分析儀（TC6010L，江西）測定血清中谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（UN）、總蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、膽固醇（CHO）含量。采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（Ig M）含量。

1.6.4 消化道PepT1 mRNA表達量的測定 試驗結束后，所有試驗牦牛分批運送至屠宰場待宰。將每組采血的5頭牦牛，經電擊、放血、剝皮后，將內臟分離，立即取瘤胃、網胃、瓣胃、皺胃、十二指腸、空腸、回腸組織，用冰生理鹽水清洗內容物。在潔凈的托盤上剝離瘤胃、網胃、瓣胃上皮組織，并刮取皺胃黏膜和十二指腸、空腸、回腸的腸道黏膜，各部位取2塊，并用錫箔紙包好，放入2 mL的凍存管中，立即投入液氮帶回實驗室保存。

依照Rayscript cDNA Synthesis KIT試劑盒使用說明書，將提取的各上皮組織和黏膜的總RNA反轉錄為cDNA。以Pep T1為目的基因，由上海捷瑞生物公司合成引物（表3），經熒光定量PCR方法對牦牛消化道樣本進行PepT1 mRNA定量分析；反應體系為：SYBR Green Mix 7 μL，上下游引物各0.5 μL，cDNA 8 μL；條件為95℃預變性5 min，95℃變性10 s，60℃退火34 s，共40個循環。

1.7 數據分析

各樣品PepT1 mRNA表達量的計算采用2-??Ct法，以0水平組中瘤胃PepT1 mRNA表達量作為對照。

數據通過Excel 2010處理后，再使用SPSS 24.0中的GLM模型進行單因素方差分析，采用Duncan’s法多重比較，隨后使用曲線估計（Curve estimation）進行線性（Linear）和二次函數（Quadratic）的顯著性檢驗。結果以平均值±標準差的形式表示，＜0.01表示差異極顯著，＜0.05表示差異顯著，＞0.05表示差異不顯著。

2 結果

2.1 小肽添加水平對育肥牦牛生產性能的影響

由表4可知，隨小肽添加水平的升高，ADG、DMI和F/G呈二次曲線變化（＜0.05），2.25%組的DMI和ADG顯著高于對照組和0.75%組（＜0.05），而F/G顯著低于對照組和0.75%組（＜0.05）；FBW有線性增高的趨勢（＜0.10），以2.25%組牦牛的生產性能表現最優。

表3 引物序列

表4 小肽添加水平對育肥牦牛生產性能的影響

同行數據不同大寫字母表示差異極顯著（＜0.01），不同小寫字母表示差異顯著（＜0.05），相同或者無字母表示差異不顯著（＞0.05），下同。T表示不同處理，L表示一次線性，Q表示二次曲線。下同

In the same row, values with no letters or the same letters mean no significant at＞0.05, while with different small letters mean significant difference at＜0.05, with different capital letters mean significant difference at＜0.01, the same below. T means Treatment, L means Linear, Q means Quadratic. The same below

2.2 小肽添加水平對育肥牦牛養分表觀消化率的影響

由表5可知，隨小肽添加水平的升高，OM和CP的表觀消化率呈二次曲線變化（＜0.05），1.50%組和2.25%組對OM的消化率顯著高于0.75%組（＜0.05），2.25%組中CP的消化率顯著高于對照組和0.75%組（＜0.05）；NDF和ADF的表觀消化率線性升高（＜0.01），1.50%組和2.25%組NDF和ADF的消化率顯著高于對照組和0.75%組（＜0.01），以2.25%組養分消化率最優。不同處理組間鈣、磷的表觀消化率均無顯著差異（＞0.05）。

2.3 小肽添加水平對育肥牦牛血清生化及免疫指標的影響

由表6可知，隨小肽添加水平的升高，血清中ALT含量線性降低（＜0.05），而UN含量線性升高（＜0.05），TP含量有線性升高的趨勢（＜0.10），AST含量呈二次曲線變化（＜0.05），且1.50%組和2.25%組AST含量顯著低于對照組和0.75%組（＜0.05）。日糧中添加不同水平小肽對血清中ALP、GLU、CHO和TG含量均無顯著影響（＞0.05）。

由表7可知，日糧中添加不同水平小肽對育肥牦牛血清中IgG、IgA和IgM 3種免疫球蛋白的含量均無顯著影響（＞0.05）。

2.4 育肥牦牛消化道PepT1 mRNA的組織表達特性

由圖1可知，牦牛消化道中PepT1 mRNA表達量由高到低依次為空腸、回腸、十二指腸、網胃、瓣胃、瘤胃、皺胃，且空腸的Pep T1 mRNA表達量顯著高于其他消化道部位（＜0.05），而皺胃PepT1 mRNA的表達量顯著低于空腸和回腸（＜0.05）。回腸、十二指腸、瘤胃、網胃、瓣胃的PepT1 mRNA表達量無顯著差異（＞0.05）。

表5 小肽添加水平對育肥牦牛養分表觀消化率的影響

表6 小肽添加水平對育肥牦牛血清生化指標的影響

表7 小肽添加水平對育肥牦牛血清免疫指標的影響

2.5 小肽添加水平對育肥牦牛消化道PepT1 mRNA表達量的影響

由表8可知，隨小肽添加水平的升高，瘤胃、網胃和空腸的PepT1 mRNA表達量均呈線性升高變化（＜0.05），但小肽添加水平對瓣胃、皺胃、十二指腸和回腸的PepT1 mRNA表達量無顯著影響（＞0.05）。

表8 小肽添加水平對育肥牦牛消化道PepT1 mRNA表達量的影響

柱形標注不同字母表示差異顯著（P＜0.05）

3 討論

3.1 小肽添加水平對育肥牦牛生產性能的影響

日糧中加入小肽能夠提高動物的生產性能。祝平[7]的研究發現，在日糧中添加2%、4%的植物小肽能夠降低斷奶仔豬的料重比和腹瀉指數，提高日增重，但對采食量無顯著影響。卜艷玲等[9]報道稱，在斷奶仔豬日糧中添加腸桿菌肽能顯著提高日增重，降低料重比。宋增廷[6]在育肥羊的日糧中分別添加500和800 mg·kg-1的谷胱甘肽，結果顯示，與對照組相較，兩試驗組均顯著提高了日增重，降低了料重比。本研究中，當小肽添加水平達到2.25%時，牦牛的ADG和DMI比對照組顯著提高，料重比顯著降低，生長性能最佳。1.50%和2.25%組采食量的升高，說明小肽能夠改善日糧的適口性，提升牦牛的采食量，提高能量和蛋白的攝入量，增加體重。另有研究表明，小肽能夠提高肌肉中胰島素樣生長因子-1（IGF-1）mRNA的表達量，促進生長軸中生長激素（GH）與IGF-1的分泌[6]，本試驗中牦牛體重的顯著增加也可能與此有關。但前期的體外試驗表明，當小肽的添加量超過2.25%時會產生負效應，而在實際的生產當中是否存在同樣的效果，還有待進一步研究。

3.2 對育肥牦牛養分表觀消化率的影響

瘤胃中發酵非結構性碳水化合物的微生物能夠利用肽作為氮源[19]，外源小肽的加入，能夠刺激該類瘤胃微生物的生長，加速對淀粉、糖類等的發酵，促進瘤胃對營養成分的降解。另有研究表明，小肽能夠提高瘤胃中纖維分解菌的活力，促進對纖維素和半纖維素的降解[20-21]。王文娟[22]分別給安裝永久性瘺管的魯西黃牛每天灌注100、200、300 g大豆小肽，結果顯示，小肽的灌注，提高了機體對DM、OM、NDF、ADF和氮的表觀消化率。在本研究中，日糧中加入小肽，促進了牦牛瘤胃對OM、CP、NDF、ADF的消化率，與上述報道結果相似。本課題組對瘤胃菌群的研究結果顯示，小肽能夠提高普雷沃氏菌屬、丁酸弧菌屬和擬桿菌屬的相對豐度，而普雷沃氏菌屬和丁酸弧菌屬對蛋白、淀粉等均有降解作用，擬桿菌屬能夠促進纖維類物質的消化，幾種菌屬豐度的提高能夠促進飼糧成分在瘤胃中的消化利用。

3.3 對育肥牦牛血清生化及免疫指標的影響

血清指標能夠反映機體的代謝和病理狀況。TP含量能夠衡量機體蛋白質的吸收和代謝狀況，TP含量的升高，可以促進組織蛋白的沉積。本試驗中，隨小肽水平的升高，TP含量有線性升高的趨勢，有利于機體組織蛋白的沉積。血清中ALT和AST能夠反映肝臟受損狀況，當肝臟受損時，兩種轉氨酶的活性會迅速增高。在本試驗中發現，ALT含量隨小肽水平升高線性降低，1.50%和2.25%組牦牛血清中AST的活性顯著降低，與孫海元的報道相近，小肽能夠使肝臟功能得到改善，減輕肝臟損傷[23]。CHO能夠儲存能量，但過高的CHO會引發心血管等疾病，本研究中CHO和TG含量在各組之間無顯著差異，表明小肽沒有帶來負面影響。GLU能夠反映機體對能量的調節是否恒定，有研究表明，動物血清中GLU的含量不應超過6.1 mmol·L-1[24]，本研究中，各組GLU含量均在4.6—4.9 mmol·L-1之間變動，未超過上述界限，且各組之間無顯著差異，供能均衡。UN能夠反映動物機體蛋白質代謝和氨基酸之間的平衡狀況。UN含量過高，說明氨基酸平衡受到影響，氮代謝效率降低，本研究中，隨小肽水平的升高，UN含量線性升高，與SWANSON等[25]在羔羊上的研究相近，但本研究中各組之間UN含量無顯著差異，未對機體氨基酸平衡造成顯著不利影響。

IgA、IgG、IgM 3種免疫球蛋白參與機體的體液免疫，其含量能夠反映機體免疫力的強弱。張迪等[26]的研究表明，在種公豬日糧中分別添加1%、2%的小肽對血清中IgG、IgA、IgM的含量無顯著影響；孫海元[23]在對生長育肥豬的研究中也得到類似的結論。本研究中，添加不同水平小肽沒有使免疫球蛋白含量發生顯著變化，對機體體液免疫無顯著影響，與上述報道一致。

3.4 對育肥牦牛消化道PepT1 mRNA表達的影響

大量的研究表明，反芻動物消化道中PepT1的表達量存在物種差異性。在對奶牛、綿羊、湖羊的研究中發現，回腸、十二指腸和空腸的PepT1 mRNA表達量較高，在瓣胃和瘤胃中的表達量較低，在盲腸中最少[12,14-16]；但雜交肉牛中，瘤胃和瓣胃的PepT1 mRNA表達量要高于十二指腸，由低到高依次為盲腸、皺胃、網胃、十二指腸、瘤胃、瓣胃、空腸、回腸[13]；而在犢牛中，胃部的PepT1 mRNA表達量由低到高依次為皺胃、瓣胃、網胃、瘤胃[27]，與在奶牛和肉牛的研究上有所差異；在對放牧牦牛的研究中發現，PepT1 mRNA在小腸的表達量要高于胃部和大腸，由低到高依次為盲腸、皺胃、結腸、瓣胃、瘤胃、網胃、十二指腸、回腸、空腸，且網胃的表達量顯著高于瘤胃、瓣胃和皺胃，但顯著低于回腸和十二指腸[28]。本試驗是對舍飼育肥牦牛開展的研究，PepT1的組織表達特性與上述報道的放牧牦牛組織表達特性存在差異，在本研究中，PepT1 mRNA在小腸的表達量要高于前胃和真胃，由低到高依次為皺胃、瘤胃、瓣胃、網胃、十二指腸、回腸、空腸，但十二指腸、網胃、瓣胃、瘤胃的表達量無顯著差異。造成上述差異的原因可能與品種、飼養方式以及飼料組成不同有關。另有研究表明，非腸系膜系統（瘤胃、網胃、瓣胃、皺胃、十二指腸）的小肽吸收量大于腸系膜系統（空腸、回腸、盲腸、結腸）[29-30]，而在本試驗中，小腸段PepT1 mRNA的表達量在前胃和真胃之上，猜測原因可能是另外幾種非耗能的轉運方式占主導作用所致。有研究表明，小肽的轉運方式主要包括：載體轉運、滲透擴散、旁細胞穿透和胞吞4種方式[10]，而只有載體轉運消耗能量。

有研究表明，消化道內底物的濃度會影響PepT1的表達活性，底物濃度較高時會增加轉運載體的數量和活性[31]。PepT1的轉運依賴跨膜質子梯度以及胞內的pH，小肽和H+一同被PepT1轉運進入細胞，而后再通過氫鈉泵轉出H+[32]。在本研究中，隨著日糧小肽添加水平的升高，瘤胃、網胃和空腸PepT1 mRNA的表達量線性增加，可能與消化道中底物和H+的濃度變化有關，消化道不同部位酸堿環境存在差異，而胞外酸度能夠影響PepT1對肽的親和力[14]，進而影響小肽的轉運效率。

4 結論

日糧中添加小肽能夠提高養分的表觀消化率，提升育肥牦牛生產性能，而且能夠改善肝臟功能，促進機體代謝，但對機體體液免疫無顯著影響；PepT1 mRNA在育肥牦牛小腸的表達量要高于前胃和真胃，且瘤胃、網胃和空腸中PepT1 mRNA的表達量隨小肽添加水平的升高而線性升高，促進了小肽的轉運和吸收。本試驗條件下，日糧中小肽添加水平為2.25%時飼喂效果最佳。

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Effects of Dietary Small Peptides on Production Performance and Expression of PepT1 mRNA in Digestive Tract of Fattening Yaks

MIAO JianJun, PENG ZhongLi, GAO YanHua, BAI Xue, XIE XinTing

(College of Animal and Veterinary Sciences, Southwest Minzu University/Key Laboratory of Qinghai-Tibetan Plateau Animal Genetic Resource Reservation and Utilization, Ministry of Education, Chengdu 610041)

【】This study investigated the effects of dietary small peptides on production performance, apparent digestibility of nutrients, blood indexes and expression of PepT1 mRNA in digestive tract of fattening yaks.【】Health Maiwa male yaks (n=36, (180.98±20.57) kg body weight) were divided into 4 groups in a randomized complete block design, and each group had 9 male yaks. And they were fed 4 types of total mixed ratio diet with small peptides additions of 0, 0.75%, 1.50% and 2.25%, respectively. There was a pre-experimental period of 30 days, followed by a trial period of 80 days. Every yak’s weight was recorded before and after the trial begins, and the feed intake was also recorded every day. During the last week of the trial period, the fecal grab samples were collected for 3 consecutive days from each yak for routine analysis of nutrients. And five yaks were selected from each group to collect jugular vein blood and prepare serum to determine serum biochemical and immune indicators. At the end of the trial period, 5 yaks with blood collected were slaughtered, and the rumen, reticulum, omasum, abomasum, duodenum, jejunum, and ileum tissue were collected to determine the expression of PepT1 mRNA by using real time quantitative PCR.【】(1) With the level of small peptides increasing, the dry matter intake, average daily gain and the feed gain ratio showed quadratic variation (＜0.05). The group with the best production performance was the 2.25% group. Compared with the control group and the 0.75% group, the dry matter intake and average daily gain were significant improved in the 2.25% group, but the feed gain ratio was significant decreased in the 2.25% group. (2) With increasing of small peptides levels, the degradation rate of neutral detergent fibre and acid detergent fibre linearly increased (＜0.01); the degradation rate of organic matter and crude protein presented quadratic variation (＜0.05). The 2.25% group had the highest digestibility. No significant difference existed between the degradation rate of calcium and phosphorus in four groups (＞0.05). (3) Across the range of small peptides supplementation levels, the content of alanine aminotransferase linearly decreased (＜0.05); the content of urea nitrogen linearly increased (＜0.05); the total protein showed linearly increased trend (＜0.10), and the content of aspartate aminotransferase showed quadratic variation (＜0.05). There were no significant effects on the content of alkaline phosphatase, glucose, cholesterol, triglyceride and immunoglobulins (IgG, IgA and IgM) in yak serum by adding different levels of small peptides. (4) The expression of PepT1 mRNA in the digestive tract of yaks from the highest to the lowest was the jejunum, ileum, duodenum, reticulum, omasum, rumen, and abomasum, while the expression of PepT1 mRNA in jejunum was significantly higher than that of the other gastrointestinal tracts (＜0.05). The expression of PepT1 mRNA in abdomen was significantly lower than those of jejunum and ileum. No significant difference was found between the expression of PepT1 mRNA in ileum, duodenum, reticulum, omasum, and rumen. With increasing of small peptides levels from 0 to 2.25%, the expression of PepT1 mRNA in rumen, reticulum and jejunum linearly increased (＜0.05), and small peptides levels had no significant effect on the expression of PepT1 mRNA in omasum, abomasum, duodenum and ileum (＞0.05).【】In conclusion, dietary small peptides could improve the production performance, apparent digestibility of nutrients, liver function of fattening yaks, and promote the transport and absorption of small peptides in the digestive tract. In this research, the appropriate level of dietary small peptides of yaks was 2.25%.

small peptides; fattening yaks; production performance; apparent digestibility of nutrients; blood indexes; expression of PepT1 mRNA

10.3864/j.issn.0578-1752.2020.23.019

2019-12-11；

2020-05-12

國家重點研發計劃（2017YFC0504806）、國家現代農業產業技術體系四川省肉牛創新團隊（sccxtd-2020-13）、四川省重點研發項目（2017NZ0042）

苗建軍，E-mail：332779037@qq.com。通信作者彭忠利，E-mail：leo3131@163.com

（責任編輯 林鑒非）