基于化學發光法的血清Lp-PLA2 質量檢測試劑性能評價

程云龍，于林，李奎，李雙法

（鄭州安圖生物工程股份有限公司，河南 鄭州）

0 引言

脂蛋白相關磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）是磷脂酶A2 超家族成員，由成熟的巨噬細胞和淋巴細胞合成并分泌，受炎性介質的調節。它在低密度脂蛋白的氧化、促進動脈粥樣硬化以及冠心病和卒中的形成等方面發 揮重要作用[1,2]，其水平升高是預測動脈粥樣硬化相關的冠心病、缺血性卒中風險的一種獨立危險因子[3]。在疾病進展過程中，血漿和血清Lp-PLA2 水平的升高往往早于臨床癥狀及影像學檢查。

目前臨床檢測方法有免疫層析法、酶聯免疫法、化學發光法等，Autobio 公司提供的Lp-PLA2 檢測試劑盒，采用化學發光微粒子免疫檢測法測定Lp-PLA2 的濃度水平，作為檢查動脈粥樣硬化炎癥程度，評估動脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病風險的提示性指標，配合安圖生物公司的全自動磁微?；瘜W發光免疫檢測分析儀進行檢測，具有操作便捷，樣本周轉時間短等優點。本研究參照美國國家臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）相關文件標準，對Autolumo A2000 PLUS 全自動磁微?；瘜W發光儀儀器定量檢測Lp-PLA2 的各項性能參數進行驗證、評價，現報道如下。

1 材料及方法

1.1 標本的來源

收集2019年3-10月河南某醫院65 例健康體檢者與住院患者的血清標本。

1.2 儀器和試劑

采用Autobio A2000 PLUS，Autobio 公司的配套試劑、質控品和校準品，所有檢測過程均嚴格按照說明書操作；AutobioPHOmo 酶標儀，康爾克公司的Lp-PLA2 試劑和校準品，所有檢測過程均嚴格按照說明書操作。

1.3 方法[4]

1.3.1 精密度

參照CLSI 的EP5-A2 方案，使用兩個批號的試劑，在同一臺儀器上，對Lp-PLA2 質控品進行檢測，每天在兩個不同的時間段分別檢測兩次，共檢測20 天。

1.3.2 靈敏度

參照CLSI 的EP17-A 方案，對4 個零濃度的標本和8 個Lp-PLA2 濃度在 0-30ng/mL 之間的標本進行檢測，使用兩個批號的試劑，在兩臺儀器上，將這些標本分5 個批次進行檢測，檢測5 天。

1.3.3 線性范圍

參照CLSI 的EP6-A 方案，使用四對標本，將含高濃度Lp-PLA2（濃度范圍為400-500ng/mL）的標本按照比例用含低濃度Lp-PLA2（濃度范圍＜15ng/mL）的標本進行稀釋，每對標本共得到13 個稀釋標本，然后使用Autobio A2000 PLUS及配套試劑進行檢測。

1.3.4 干擾試驗

主要驗證Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑對溶血、黃疸、脂血的抗干擾能力。取3 例陰性標本，分別加入干擾物質：膽紅素50mg/dl、甘油三酯1500mg/dl、血紅蛋白100mg/dl，分別重復檢測3 次，比較加入干擾物前后檢測結果的差異。

1.3.5 參考值驗證

參照選取20 位表觀健康者，若20 個參考個體中不超過1個觀測值在原始報告的參考限之外，廠商提供參考區間可以接受。若2 個以上超出界限，另選擇20 個參考個體進行驗證，若≤1 個觀測值超過原始參考限，廠商提供參考區間可以接受，若仍有2 個觀測者超出參考限，則應重新檢查所用分析程序，考慮兩個樣本總體生物學特征上是否存在差異，并考慮建立自己的參考區間。標準要求：若20 個參考個體中不超過1 個觀測值在原始報告的參考限之外，廠商提供參考區間可以接受。

1.3.6 方法學比較

對65 例血液標本用Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑和AutobioPHOmo 酶標儀及康爾克配套Lp-PLA2試劑平行進行測定。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0 統計學軟件，方法學比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 精密度試驗結果

三個不同水平的質控血清標本在自動化學發光免疫分析儀上進行精密度測試的結果見表1，滿足試劑盒聲明的不精密度。

2.2 靈敏度試驗

Autobio Lp-PLA2 試劑的空白檢測限為1.10ng/mL，最低檢測限為5.0ng/mL，功能靈敏度為10.0ng/mL。

2.3 線性評價結果

如圖1 示，Lp-PLA2 的多點線性回歸方程為Y=0.9312X+5.7541，R2=0.9967。各檢測結果在15-450ng/mL濃度范圍內，相關系數r＞0.990，相關性良好。

2.4 干擾試驗

由表2 結果可知，加入干擾物前后檢測結果差異不顯著，檢測結果與未加入干擾物相比，檢測結果偏差在±10%以內，驗證通過。

表2 干擾物質加入前后檢測結果對比（Mean±SD）

2.5 參考值驗證結果

由表3 結果可知，20 個參考個體的觀測值均在廠家提供參考值（175ng/mL）以下，驗證通過。

表3 參考值驗證結果

2.6 方法學比較

經配對t檢驗，Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑和AutobioPHOmo 酶標儀及康爾克Lp-PLA2 試劑進行Lp-PLA2 測定結果的差異無顯著性（P＞0.05），兩種方法測定結果的回歸方程為Y=1.0317X-2.5925，相關系數R2=0.9754，見圖2 示。

圖2 兩種方法測定結果的相關性

3 討論

由于Lp-PLA2 在動脈粥樣硬化發生發展的過程中具有關鍵的作用[5]，近年來，西蘇格蘭冠心病預防研究（The West of Scotland Coronary Prevention Study，WOSCOPS） 將 LPPLA2 作為預測動脈粥樣硬化風險程度的獨立標志物[6]。目前市場上出售的Lp-PLA2 的檢測試劑較多，檢測該標志物，需要操作方便、快捷、性能良好的儀器及試劑，Autobio 公司基于Autolumo A2000 PLUS 的Lp-PLA2 定量檢測試劑，正是滿足了這一需求，但其檢測性能是否滿足臨床需要應通過實驗予以驗證和評估。

本研究參照據國際權威的CLSI 制定的EP 文件方案對其檢測的精密度、靈敏度和線性范圍等性能進行了驗證，評估其臨床適用性。結果顯示其精密度、靈敏度均在廠家聲明的范圍之內，可以接受。線性范圍為15-450ng/mL，可滿足臨床需要。并且檢測結果不受50mg/dl 膽紅素、1500mg/dl 甘油三酯、100mg/dl 血紅蛋白干擾的影響。為比較Autobio Lp-PLA2 試劑與市售康爾克Lp-PLA2 檢測試劑之間的差異，本研究對65例新鮮血清標本進行了對比分析，兩種方法測定結果的回歸方程為Y=1.0317X-2.5925，相關系數R2=0.9754，兩種檢測試劑之間的差異不顯著（P＞0.05）。

綜上所述，Autobio 公司基于Autolumo A2000 PLUS 儀器的Lp-PLA2 定量檢測試劑精密性、靈敏度、線性范圍和抗干擾能力均符合要求，可以滿足臨床檢測要求。