PAQR9 對棕色脂肪產熱及UCP1 表達的影響

劉 玲 劉思佳 劉 洋 湯其群

（復旦大學基礎醫學院生物化學與分子生物學系 上海 200032）

脂肪組織是一種重要的能量代謝器官，當機體攝入能量大于消耗能量，多余的能量會以甘油三酯的形式儲存在脂肪組織中［1］。脂肪組織過多會引發肥胖、2 型糖尿病、非酒精性脂肪肝等疾病，對公眾健康造成了巨大威脅。人體有3 種脂肪組織，分別是白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT），棕色脂肪組織（brown adipose tissue，BAT）和米色脂肪組織（beige adipose tissue）［2］。WAT 可以將多余的能量以甘油三酯的形式儲存，而BAT 中含有較多線粒體，通過解偶聯蛋白1（uncoupling protein 1，UCP1）將跨線粒體內膜的質子勢能與ATP 解偶聯，將能量轉化為熱能，從而起到產熱和消耗能量的作用［3］。近年來研究發現，在低溫環境誘導下小鼠腹股溝皮下白色脂肪會產生功能、形態類似于棕色脂肪的細胞，內含許多線粒體和小脂滴，能夠高表達UCP1，和棕色脂肪細胞一樣能夠促進脂肪組織代謝產熱。但其與傳統棕色脂肪細胞的前體起源不同，因此被命名為米色脂肪細胞［4］。二者被統稱為產熱性脂肪組織。自此，研究者對于米色脂肪細胞的誘導激活產生了極大的興趣，其可作為對抗肥胖的新型靶細胞。

UCP1 特異性表達于BAT 的線粒體中［5］，是成熟棕色脂肪特異性的產熱基因［6］。白色脂肪細胞被誘導為米色脂肪細胞后高表達UCP1。實驗中往往將UCP1 作為重要的標志物來研究脂肪組織的產熱功能。棕色、米色脂肪細胞的線粒體內膜上有UCP1 質子通道，通過線粒體內膜來消散質子梯度，使質子回流，破壞電子傳遞中的跨膜電化學梯度，物質氧化和ATP 生成解偶聯，ATP 合成受到抑制，能量會以熱量的形式散發出去。UCP1 在體溫維持過程中發揮重要作用。有研究發現，當機體的交感神經系統發生興奮，如受到冷刺激的誘導時［7］，棕色和米色脂肪組織的產熱功能被激活，可以被用于治療肥胖、糖尿病等代謝性疾病［8］。冷刺激誘導下，腹股溝皮下WAT 中UCP1 表達明顯上調［9］，使其出現BAT 的典型特點，增加產熱和能量消耗［10］。

由于傳統的減肥藥具有不良反應，未達到理想的臨床效果。因此，篩選出新型基因來誘導激活棕色脂肪產熱有助于改善機體代謝和減輕肥胖程度，具有良好的研究前景。本課題組致力于研究脂肪細胞發育分化及代謝調控機制，篩選在脂肪組織產熱過程發揮重要作用的蛋白。此前，課題組通過轉錄組測序技術在冷刺激誘導后的腹股溝皮下WAT中篩選，發現PAQR9 的表達水平顯著升高，推測其可能在激活脂肪組織產熱過程中發揮重要作用。近年來對PAQR9 的研究非常少見，對其在該過程中的功能進行初步探索，可以為肥胖等疾病治療提供新的理論依據。

本研究中，我們首先檢測了PAQR9 在小鼠脂肪組織中的表達情況及冷暴露刺激條件下脂肪組織和腹股溝皮下WAT 成熟脂肪細胞中PAQR9 的表達情況，對轉錄組測序結果進行驗證。再利用前棕色脂肪細胞系DE2-3 和間充質干細胞C3H10T1/2 為模型開展研究，通過在細胞中過表達和敲低PAQR9 基因，探討該基因對棕色脂肪產熱及UCP1表達的影響。

材料和方法

儀器設備二氧化碳培養箱購于美國Thermo Fisher 公司；PCR 儀購于德國Eppendorf 公司；蛋白質印跡電泳槽等購于美國Bio-Rad 公司；化學發光儀購于美國GE 公司；冷凍離心機購于德國Eppendorf AG 公司；Milli-q 超純水系統購于德國Millipore 公司。

主要試劑DMEM 培養基，胎牛血清購于美國Gibco 公司；UCP1 抗體購于美國Abcam 公司；HSP90 抗體購于美國Santa Cruz Biotechnology 公司；SYBR Green reagent 購于美國ABI 公司；逆轉錄試劑盒購于日本TaKaRa 公司；ECL 發光液購于上海圣爾生物有限公司；三氯甲烷、異丙醇、75%乙醇、無水乙醇均購于國藥集團化學試劑上海有限公司；BCA 定量試劑盒、opti-MEM 培養基、蛋白Marker 購于美國Thermo Fisher 公司；Trizol 和lipofectamine RNAiMAX 試劑購于美國Invitrogen公司；PBS 試劑購于以色列BI 公司；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX）、地塞米松、三碘甲狀腺氨酸（T3）、吲哚美辛、羅格列酮、油紅O 購于美國Sigma-Alderich 公司；胰島素、蛋白酶抑制劑購于瑞士Roche 公司。

實驗動物雄性C57BL/6J 小鼠購于南京大學模式動物中心，小鼠置于SPF 級動物房，在（22±2）℃，相對濕度55%±5%的環境中飼養。維持12/12 h 光/暗循環。動物實驗均遵循復旦大學實驗動物倫理委員會相關規定。

處死取材將動物適應性飼養1 周后處死，取5只雄性C57BL/6J 小鼠BAT、附睪內臟WAT 及腹股溝皮下WAT，速凍于液氮中。

前棕色脂肪細胞系DE2-3 培養及誘導分化實驗室前期獲得了永生化的前棕色脂肪細胞系［11］（美國麻省大學醫學院王永旭博士及復旦大學基礎醫學院潘東寧教授惠贈），按照下述標準法可誘導其分化為成熟棕色脂肪細胞。細胞培養箱恒溫37 ℃，含有5%CO2。在含有10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素雙抗的DMEM 培養基中培養細胞，每2 天給細胞換1 次液，傳代后接種于3.5 cm 培養皿。鏡下觀察貼壁細胞密度占視野70%時記為第2 天（day-2），培養基中加入三碘甲狀腺氨酸和胰島素，混勻后給細胞換液；2 天后細胞密度達到100%，記為第0 天（day 0），在DMEM 中加入0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤，0.5 μmol/L 地塞米松，0.125 mmol/L吲哚及1 μg/mL 胰島素，搖勻后換液；在第2 天（day 2）和第4 天（day 4），操作同第-2 天（day -2），補加三碘甲狀腺氨酸和胰島素，混勻后給細胞換液，鏡下觀察到細胞的脂滴逐漸增多；第6 天（day 6），可以觀察到鏡下布滿脂滴，誘導分化結束，收取細胞樣本進行后續實驗。

C3H10T1/2 細胞系培養及誘導分化間充質干細胞C3H10T1/2 購于美國ATCC 細胞庫。該細胞系是科學家于1973 年由14～17 日齡C3H 小鼠胚胎中分離出來［12］，細胞呈現成纖維細胞形態。Tang等［13］研究發現該細胞模型可以定向誘導分化為成熟脂肪細胞。細胞培養箱恒溫37 ℃，含有5%CO2。在含有10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素雙抗的DMEM 培養基中培養細胞，每2 天換1 次液，傳代后接種于3.5 cm 培養皿。細胞接觸抑制2 天后開始誘導分化，記為第0 天（day 0），在DMEM 培養基中加入1 μg/mL 胰島素、1 μmol/L 地塞米松、0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和1 μmol/L 羅格列酮誘導48 h。第2 天（day 2）時更換培養基，補加1 μmol/L羅格列酮和1 μg/mL 胰島素繼續誘導細胞48 h。在第4 天（day 4）給細胞更換含有10% 胎牛血清的DMEM 培養液，不補加藥物。直至第6 天（day 6）脂肪細胞分化成熟。

構建過表達腺病毒設計帶有酶切位點的引物，PCR 得到兩端帶有酶切位點的基因。酶切回收得到目的片段和載體，將回收的產物相連接；擴增連接產物，測序以驗證序列；LR 重組及PacⅠ酶切；將酶切產物轉染至HEK 293A 工具細胞中包裝病毒。向培養皿中加入LacZ 病毒（對照組）和PAQR9病毒各（實驗組）60 μL 感染DE2-3 細胞，24 h 后更換為含有10%胎牛血清的DMEM 培養液，繼續培養至脂肪細胞分化成熟。

小干擾RNA 100 μL opti-MEM 中加入6 μL 3.5 cm 細胞培養皿用量的小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA），根據所需用量配齊總管，輕輕吹打混勻，記為管1。再取另一EP 管加入100 μL opti-MEM 及6 μL轉染試劑lipofectamine RNAiMAX（3.5 cm 細胞培養皿用量），根據所需用量配齊總管，輕輕吹打混勻，記為管2，管1、管2 靜置3 min，將管2溶液緩緩滴加到管1 中，反復吹打5 次，混勻后靜置20 min。將細胞上清培養基傾倒，換為2 mL opti-MEM。將靜置的siRNA 緩緩加到細胞，每個3.5 cm培養皿加入200 μL siRNA。24 h 后傾倒轉染培養液，換成含有10%胎牛血清的DMEM 培養液，在轉染48 h 后進行后續實驗操作。siNC 為對照組，siPAQR9 1-3 為實驗組。siRNA 序列如下：NC 上游引物序列5’-UUCUCCGAACGUGUCACG-UTT-3’，NC 下游引物序列ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’；siPAQR9-1 上游引物序列5’-GCUGCCGCUGUGGUGCUAUTT-3’，siPAQR9-1 下游引物序列5’-AUAGCACCACAGCGGCAGCTT-3’；siPAQR9-2 上游引物序列5’-GCCUUCUUCUACCUGGACUTT-3’，siPAQR9-2下游引物序列5’-AGUCCAGGUAGAAGAAGGCTT-3’；siPAQR9-3 上游引物序列5’-GCACCUUCGUCUUCGUCAUTT-3’，siPAQR9-3 下游引物序列5’-AUGACGAAGACGAAGGUGCTT-3’。

液態氧電極檢測細胞氧氣消耗按照說明書安裝氧電極（YSI model 5300A），KCl 溶液作為電解液，連接線路接通電源。在電腦軟件中校正，清洗反應室，將細胞用700 μL 胰酶消化，再加入700 μL緩沖液終止消化。500×g離心2 min，棄上清，用700 μL 緩沖液重懸細胞。加入機器中，觀察耗氧曲線，記錄數值。緩沖液配置方法：PBS 溶液中加入25 mmol/L 葡萄糖，1 mmol/L 丙酮酸鈉和2% BSA。每個3.5 cm 細胞培養皿中加入700 μL 緩沖液。

RNA 制備和實時熒光定量PCR 檢測利用Trizol 法提取細胞及組織中的RNA，測定RNA 濃度后，根據逆轉錄試劑盒說明書將其逆轉錄為cDNA。引物序列如下：18SrRNA 上游引物序列5’-CGCCGCTAGAGGTGAAATTCT-3’，18SrRNA下游引物序列5’-CATTCTTGGCAAATGCTTTCG-3’；PAQR9 上游引物序列5’-GGACTACGCTTCCATCAGCTA-3’，PAQR9 下游引物序列5’-CAGTCGGTGCGGCTCTTAC-3’；UCP1 上游引物序列5’-AGGCTTCCAGTACCATTAGGT-3’，UCP1 下游引物序列5’-CTGAGTGAGGCAAAGCTGATTT-3’；Adipoq 上游引物序列5’-TGTTCCTCTTAATCCTGCCCA-3’，Adipoq 下游引物序列5’-CCAACCTGCACAAGTTCCCTT-3’；Fabp4 上游引物序列：5’-CCTTTGTGGGAACCTGGAA-3’，Fabp4 下游引物序列5’-CTGTCGTCTGCGGTGATT-3’；PPARγ 上游引物序列5’-GTGCCAGTTTCGATCCGTAGA-3’，PPARγ 下游引物序列5’-GGCCAGCATCGTGTAG-TGA-3’。

蛋白免疫印跡法檢測用細胞裂解液裂解細胞和組織蛋白，BCA 法測定蛋白質濃度。將蛋白樣品加入上樣孔，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，再經過PVDF 膜濕轉法轉膜、5%脫脂牛奶封閉，在4 ℃冰箱中搖床上用特異性的一抗孵育，過夜。孵育與之對應的二抗，持續1 h。洗膜5 次后，用ECL 發光液發光顯影。

油紅O 染色稱量0.5 g 油紅O 粉末，溶于100 mL 異丙醇，搖床過夜搖勻后制備為貯存液。油紅O貯存液與蒸餾水比例為3∶2混合搖勻，轉速1 000×g，離心5 min，棄去管底沉淀，濾紙過濾3 次，制備成油紅O 工作液。脂肪細胞誘導分化成熟后，將細胞棄去DMEM 培養液，用PBS 清洗2～3 次，3.7%甲醛固定細胞20 min 后用水清洗，每個3.5 cm 培養皿加入2 mL 油紅O 工作液，染色2 h 以上。染色結束后用水清洗油紅，每個培養皿中加入少量蒸餾水，鏡下觀察及拍照。

統計學處理所有數據使用GraphPad Prism 7.0 分析處理，數據分析均為兩組結果之間相比較，采用非配對t檢驗。數據結果用表示。P＜0.05 為差異有統計學意義。

結果

小鼠BAT 和WAT 及冷刺激后PAQR9 的mRNA水平變化取C57BL/6 雄性小鼠肩胛間區BAT、腹股溝皮下白色脂肪組織（inguinal WAT，iWAT）和附睪內臟白色脂肪組織（epididymal WAT，eWAT）用于實驗研究（圖1A）。檢測以上不同位置脂肪組織中PAQR9 的mRNA 水平，發現BAT 中PAQR9 的mRNA 水平顯著高于WAT（P＜0.001，圖1B），這提示PAQR9 可能在BAT 中發揮重要功能。同時，實驗設計了3 種溫度條件，分別是在4 ℃冷暴露（cold）、室溫（RT）和30 ℃熱中性（warm）環境下，檢測發現，與室溫條件相比，BAT 和iWAT 在冷刺激誘導下PAQR9 的mRNA 水平顯著上調（BAT：P＜0.001，iWAT：P＜0.01，圖 1C），而eWAT 在冷刺激誘導下PAQR9 的mRNA 水平變化不明顯（圖1C）。相較于室溫條件，在冷刺激誘導下的iWAT 中提取出的成熟脂肪細胞中PAQR9 的mRNA 水平顯著上調（P＜0.001，圖1D）。以上結果提示，PAQR9 在冷刺激誘導脂肪組織產熱的過程中可能扮演重要角色。

圖1 小鼠BAT 和WAT 及冷刺激后PAQR9 的mRNA 水平變化Fig 1 The mRNA level of PAQR9 from BAT and iWAT from C57BL/6 mice after cold stimulation

DE2-3 細胞中過表達PAQR9 對成脂分化及產熱基因UCP1 的影響將前棕色脂肪細胞系DE2-3通過標準法誘導分化為成熟棕色脂肪細胞。分別取第-2、0、2、4、6 天的細胞，檢測PAQR9 的mRNA水平，發現第6 天時PAQR9 的mRNA 水平顯著上調（P＜0.001，圖2A），推測PAQR9 在棕色脂肪細胞成脂分化過程中可能發揮功能。構建過表達PAQR9 的腺病毒感染DE2-3 細胞，成功過表達PAQR9（P＜0.001，圖2B）。過表達PAQR9 后，DE2-3 細胞中產熱基因UCP1 的mRNA 水平顯著上調（P＜0.01，圖2C）。通過液態氧電極測量氧氣消耗量，發現過表達PAQR9 后耗氧量增加（P＜0.01，圖2D），說明過表達PAQR9 可以增加氧氣的消耗，促進細胞代謝功能。同時，探究PAQR9 是否對細胞的成脂分化能力有影響。在成脂誘導分化后第7 天收取細胞樣品，過表達PAQR9 病毒的實驗組與過表達LacZ 病毒的對照組相比，成脂分化相關轉錄因子過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）、脂聯素（adiponectin/Adipoq）和脂肪酸結合蛋白4（fatty acid binding protein，FABP4）的mRNA 水平沒有顯著性差異（圖2E）。對細胞進行油紅O 染色，肉眼觀察和鏡下觀察（比例尺50 μm）并拍照，發現兩組細胞的油紅染色率相當（圖2F、2G）。說明過表達PAQR9 不影響DE2-3 細胞的成脂分化功能，可以促進細胞氧氣消耗，使產熱基因UCP1 的mRNA 水平升高。

DE2-3 細胞中敲低PAQR9 抑制產熱基因UCP1的mRNA 水平將前棕色脂肪細胞系DE2-3 通過標準法誘導分化為成熟棕色脂肪細胞。設計了3 條siRNA 進行實驗，成功將PAQR9 在DE2-3 細胞中敲低（P＜0.001，圖3A）。檢測發現DE2-3 細胞在敲低PAQR9 之后UCP1 mRNA 水平顯著下調（P＜0.001，圖3B）。

C3H10T1/2 細胞中敲低PAQR9 對成脂分化及產熱基因UCP1 的影響間充質干細胞C3H10T1/2能夠在誘導劑作用下分化為成熟脂肪細胞［14］。在C3H10T1/2 細胞培養過程中，取第0、2、4、6 天的細胞，檢測發現在第4～6 天脂肪細胞分化成熟時PAQR9 的mRNA 水平顯著上調（P＜0.001，圖4A）。設計了2 條siRNA，檢測發現siPAQR9-2 將基因敲低，差異有統計學意義（P＜0.05，圖4B）。檢測發現C3H10T1/2 細胞在敲低PAQR9 之后UCP1的蛋白質水平明顯下調（圖4C）。以上結果表明，敲低PAQR9 會抑制脂肪細胞產熱基因UCP1 的mRNA 和蛋白質水平。對細胞進行油紅O 染色，肉眼觀察并拍照，發現兩組細胞的油紅染色率相當（圖4D），說明敲低PAQR9 不影響C3H10T1/2 細胞的成脂分化功能。

圖2 DE2-3 細胞中過表達PAQR9 對成脂分化及產熱基因UCP1 的影響Fig 2 The effect on adipogenesis and thermogenesis gene UCP1 after the overexpression of PAQR9 in DE2-3 cells

圖3 DE2-3 細胞中敲低PAQR9 抑制產熱基因UCP1 的mRNA 水平Fig 3 The mRNA level of thermogenesis gene UCP1 after knocking down PAQR9 in DE2-3 cells

討論

隨著生活水平提高、社會環境改變及遺傳等多方面因素的影響，人們攝入體內的能量遠遠高于其消耗量，導致了能量不平衡［15］，進一步誘發肥胖等疾病，給患者及其家庭和社會帶來痛苦和沉重負擔，已然成為科學界密切關注的問題。遺憾的是，傳統的治療方法效果不能令人滿意［16］。

圖4 C3H10T1/2 細胞中敲低PAQR9 對成脂分化及產熱基因UCP1 的影響Fig 4 The effect on adipogenesis and thermogenesis gene UCP1 after knocking down PAQR9 in C3H10T1/2 cells

棕色脂肪細胞內存在多個小脂滴，含有大量線粒體，便于其吸收、利用葡萄糖和脂肪酸等能量供應物質［17］。通過細胞內線粒體中UCP1 將能量轉化為熱能，使機體內環境趨于穩態。正因為棕色脂肪具有產熱功能，已然成為了當下治療代謝性疾病的潛在靶點之一。米色脂肪則與傳統的棕色脂肪來源不同，但它們都是產熱性脂肪，能夠在寒冷刺激等因素誘導下激活產熱功能，具有消耗多余能量的潛力。產熱性脂肪的功能調節成為了代謝領域的研究熱點，科研人員試圖以此為突破口篩選出能夠促進產熱功能的基因，開發出健康有效的新一代肥胖治療方法［18］。

UCP1 是成熟棕色脂肪細胞的特異性標志物，同時也是白色脂肪棕色化激活的表現。在低溫環境下，哺乳動物會發生顫栗，通過產熱來維持體溫恒定，而后會轉變成利用棕色脂肪組織進行非顫栗性產熱，線粒體內膜的UCP1 則是決定BAT 產熱功能的關鍵因素。而在熱中性條件下，無需額外消耗能量即可維持生理活動。冷暴露是一種非顫抖性產熱的強刺激因子，實驗經常在冷暴露誘導的條件下開展，探究激活產熱脂肪發揮作用的機制［19］。

既往研究發現，6 周齡大小的C57BL/6 小鼠BAT 中Zfp516 的mRNA 水平顯著高于WAT。相比于室溫條件，在4 ℃冷暴露刺激下BAT 中的Zfp516 和UCP1 蛋白質水平顯著上調，從而促進棕色脂肪產熱［20］。還有文獻報道，在4℃條件下BAT中JAK2 基因蛋白質水平上調，而在WAT 中變化不明顯，且UCP1 的mRNA 水平和蛋白質水平都顯著上調［21］。篩選出調控棕色脂肪產熱功能的新型基因對于治療肥胖等代謝性疾病具有深遠意義。本課題組在前期實驗中發現，在冷暴露誘導下腹股溝皮下WAT 中PAQR9 表達上調，結合前人的研究經驗，我們推測PAQR9 可能在棕色脂肪產熱過程中發揮著重要功能。PAQRs 共有11 個家族成員，具有7 次跨膜結構，特有1 個PFAM-UPF0073 結構域。該家族成員分為3 個亞群：PAQR1-PAQR4 屬于脂聯素受體，能夠在葡萄糖攝取及脂肪酸代謝方面發揮調節作用；孕激素膜蛋白受體為PAQR5-PAQR9；此外，還有溶血素受體即PAQR10 和PAQR11［22］。PAQR 蛋白家族發揮著廣泛的生物學功能，在細胞凋亡、脂肪酸氧化、性激素調控等方面發揮作用［23］。然而近年來對PAQR9 的研究非常少，僅有報道其在蛋白質質量控制方面的作用［24］，其功能尚未被完全闡明，且在脂肪代謝領域未見報道。根據前期實驗結果，我們推測PAQR9 可能在脂肪代謝產熱過程中扮演一定角色，進一步探索將為治療相關代謝性疾病提供新型靶標。

為了進一步探究PAQR9 基因在脂肪代謝產熱過程中的作用，我們首先檢測了肩胛間區BAT、iWAT 和eWAT 中PAQR9 的表達情況，發現其在BAT 中特異性高表達。與室溫條件相比較，4 ℃冷暴露刺激后，BAT 和iWAT 中PAQR9 表達顯著上調，在iWAT 中提取的成熟脂肪細胞中的結果與上述一致。由于冷刺激能夠促進BAT 產熱，以上結果提示脂肪產熱過程中PAQR9 扮演著重要角色。

后續實驗采用兩種不同的細胞模型進行研究，首先將DE2-3 前棕色脂肪細胞系誘導分化為成熟棕色脂肪細胞，發現在分化第6 天脂肪細胞中PAQR9 顯著性高表達，提示PAQR9 在棕色脂肪細胞的成脂分化過程中可能發揮作用。PPARγ 被認為是脂肪早期形成的關鍵調節劑，而脂聯素（adiponectin/Adipoq）和FABP4 則負責成熟脂肪細胞的形成［25］。于是通過實時熒光定量PCR 技術檢測以上成脂相關轉錄因子的mRNA 水平，結合油紅O 染色法檢測發現過表達PAQR9 后DE2-3 細胞的成脂分化能力無明顯變化。在DE2-3 細胞中成功過表達PAQR9，檢測發現標志性產熱基因UCP1 的mRNA 水平顯著上調。細胞耗氧量的檢測是研究細胞代謝及其功能的一項重要指標，液態氧電極法檢測發現PAQR9 上調可以促進氧氣消耗，促進細胞代謝。在DE2-3 細胞中敲低PAQR9 后，UCP1 的mRNA 水平顯著下調。

以C3H10T1/2 細胞為研究模型，檢測發現在第4～6 天脂肪細胞分化成熟時PAQR9 的mRNA 表達顯著上調。敲低PAQR9 之后UCP1 蛋白質水平明顯下調。敲低PAQR9 后脂肪細胞的成脂分化無明顯變化。以上結果表明，在C3H10T1/2 細胞中敲低PAQR9 會抑制產熱基因UCP1 的表達。

本研究發現，PAQR9 能夠促進棕色脂肪細胞產熱，調控產熱基因UCP1 的表達，為PAQR9 在脂肪代謝領域的研究提供了思路，為治療肥胖等疾病提供更多理論依據，為研發新型減肥藥帶來了重大突破。未來可以進一步開展動物實驗研究，進一步研究和探討PAQR9 的作用通路及機制等問題。