壯藥青風藤總生物堿對類風濕關節炎模型大鼠PDGF、PAF表達的影響

曹知勇 張青槐 龐宇舟

【摘 要】 目的：觀察壯藥青風藤總生物堿對類風濕關節炎模型大鼠的治療療效以及對模型大鼠血清PDGF、PAF表達的影響。方法：選用40只SD大鼠，隨機分為空白組、模型組、青風藤總生物堿低、中、高劑量組五組。除空白組外，其余組均采用Ⅱ型膠原酶誘導關節炎大鼠，造模后進行關節炎評分和體重記錄。給藥4周后處死，取血清，采用ELISA法檢測血清中PDGF、PAF的表達。結果：造模后，大鼠關節腫脹明顯，血清中PDGF、PAF表達顯著增加。給藥后，大鼠關節腫脹明顯好轉，血清中PDGF、PAF表達較模型組低。結論：壯藥青風藤總生物堿能有效減輕類風濕關節炎癥狀，并能抑制血清中PDGF、PAF表達。

【關鍵詞】 壯藥青風藤;類風濕關節炎;血小板生長因子;血小板活化因子

【中圖分類號】R29?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2020）20-0016-03

The Effect of Total Alkaloids of Sinomenine on the Expression of PDGF and PAF in Rheumatoid Arthritis Rats

CAO Zhiyong ZHANG Qinghuai PANG Yuzhou*

Guangxi Zhuang Yao Medicine Center of Engineering and Technology， Guangxi University of

Chinese Medicine， Nanning 530200， China

Abstract：Objective To observe the therapeutic effect of total alkaloids of sinomenia on rheumatoid arthritis model rats and the effect on the expression of serum PDGF and PAF.Methods 40 SD rats were randomly divided into five groups： blank group， model group， low， medium and high dose group. Except for the blank group. The other groups were induced by type II collagenase. Arthritis score and body weight were recorded. After 4 weeks of administration， the serum was taken and the expression of PDGF and PAF were detected by ELISA.Results After the establishment of the model， the joint swelling was obvious， and the expression of PDGF and PAF in serum increased significantly. After administration， the joint swelling of rats was improved obviously， and the expression of PDGF and PAF in serum was lower than that of model group.Conclusion the total alkaloids of sinomenia can effectively alleviate the symptoms of rheumatoid arthritis. It can also inhibit the expression of PDGF and PAF in serum.

Keywords：Caulis Sinomenii; Rheumatoid Arthritis; Platelet Growth Factor; Platelet Activating Factor

類風濕關節炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種類風濕因子侵犯滑膜、關節的慢性免疫性疾病，最明顯的病理反應是對機體關節和骨質的破壞。同時，它也能引起全身性的并發癥，如肺炎、泌尿系感染、口腔潰瘍等。然而由于對于類風濕關節炎的病機病因認識并不徹底，導致類風濕關節炎的治療，差異性較大。目前行之有效的治療RA的藥物分為4大類：NSAIDs、DMARDs、糖皮質激素及植物藥制劑[1]，可是都易形成耐藥性。類風濕關節炎的發病過程常常伴隨著血細胞的變化，尤其以血小板的活化最為相關。血小板生長因子（PDGF）和血小板活化因子（PAF）作為血小板活化后的產物，是RA過程中血小板活化的標準性指標[2]。青風藤是防己科植物青藤（Sinomenium acuturn）及毛青藤（Sinamenium acutum）的干燥藤莖，是壯藥龍鉆通痹方的主要組成藥物，能通“龍路”“火路”，臨床上多用于治療類風濕關節炎，且療效顯著。青藤堿是壯藥青風藤的主要化合物，具有抗炎、抑制移植物排斥、抗腫瘤以及抑制免疫等藥理作用[3]。但對RA患者的血小板的影響機制還不明確。本實驗就此現狀，望探究出青藤堿在治療類風濕關節炎的過程中對血小板因子PDGF、PAF表達的影響。

1 材料

1.1 實驗動物 SPF級健康（SD）大鼠40只，8～10周齡，雄性，體質量（180±20）g（湖南斯萊克景達，SCXK（湘）2016-002），適應性喂養5天后開始實驗。

1.2 材料 青風藤干燥藤莖（購于廣西中醫藥大學第一附屬醫院，經韋松基鑒定為防己科植物青藤藤莖Sinomenium acuturn）;天然牛Ⅱ型膠原蛋白、完全弗氏佐劑、P-選擇素檢測試劑盒、PECAM-1檢測測試盒購自與南寧市鵬碧實驗室器材經營部。

2 方法

2.1 分組與造模 將40只SD大鼠隨機分為空白組8只以及造模組32只，將溶于醋酸的牛Ⅱ型膠原蛋白先于4 ℃低溫保存過夜，第2 d與完全弗氏佐劑以等體積乳化，乳化成功后，對模型組大鼠背部及尾部多點行皮下注射，誘導類風濕關節炎模型;空白對照組大鼠注射等量0.9%氯化鈉溶液[4]。

2.2 造模評分 按照關節指數評分標準對類風濕關節炎模型大鼠進行評分，首次注射后每3 d稱重1次，每周固定兩名實驗員記錄關節腫脹評分。

2.3 給藥 造模后第21 d進行關節評分，評分>4分即認定為造模成功。成模大鼠隨機分為模型組n=8）和青藤堿低劑量組、青藤堿中劑量組、青藤堿高劑量組。分組后開始給藥：青藤堿組灌胃給予青藤堿的混懸液，低劑量組給藥青藤堿5 mg/kg/d;中劑量組給與10 mg/kg/d;高劑量組給藥20 mg/kg/d。模型組與對照組灌胃等量0.9%氯化鈉溶液;灌胃劑量按照10 mL/kg/d，每天1次，持續28 d。

2.4 實驗取材 造模成功后，行第一次眼眶取血，離心保存血清。第二輪取血于實驗結束后;此次取血先禁食一夜，次日于大鼠眼眶取血。ELISA法測定血清中PDGF、PAF水平，操作方法嚴格按試劑盒說明書操作。

3 結果

3.1 各組大鼠足關節指數的變化 造模后，大鼠多關節腫脹明顯，并伴有明顯紅腫;給藥后，大鼠關節明顯好轉。給藥第7、14、21 d時，壯藥青藤堿高劑量組足關節指數評分明顯低于模型組P<0.05），第28 d顯著低于模型組P<0.01）;給藥第7、14、21、28 d，壯藥青藤堿中劑量組關節指數明顯下降，關節腫脹改善情況優于模型組P<0.05）;給藥第14、21、28 d，壯藥青藤堿低劑量組關節指數下降，關節腫脹改善情況優于模型組P<0.05）。見表1。

3.2 各組大鼠血清PDGF、PAF的表達情況 給藥后，壯藥青藤堿高劑量組和空白組大鼠血清PDGF、PAF的表達顯著下降，且低于模型組P<0.01）;壯藥青藤堿中、低劑量組大鼠血清PDGF、PAF的表達明顯下降，且低于模型組P<0.05）。見表2。

4 討論

RA在我國的發病率僅約為0.35%，但由于我國人口基數大，患病總人數超500萬，嚴重影響人民身心健康，甚至在某些地區，患者中存在很高的抑郁率，給患者家庭和社會帶來了巨大負擔。類風濕關節炎的發病和多種炎癥因子相關，如腫瘤壞死因子-α （TNF-α）、IL-4[5]、IL-6、IL-17[6]、IL-10、IL-1[7]、IL-1β[8]等。董文哲等[9]研究發現，血細胞血小板的計數變化和RA的關系尤為密切，血小板的激活和類風濕關節炎的炎癥反應呈正相關;而血小板的激活必然會分泌PDGF和PAF，導致PDGF和PAF在類風濕關節炎炎性反應中呈現高表達[10]。

壯醫認為，RA屬于壯醫“發旺”（壯名：Fungcaep）范疇。該病的主要發病機理為風、寒、濕、熱等毒邪乘虛侵入人體，阻滯“龍路” “火路”，使氣血運行不暢，痹阻于筋骨肌肉、關節所致;治療當祛風除濕，行氣消腫止痛。壯藥龍鉆通痹方是壯醫治療活動期RA的經驗方，該方遵循壯醫主幫配伍的組方原則。由飛龍掌血、大鉆、八角楓、兩面針、青風藤、九龍藤等組成，能疏通“龍路”“火路”之瘀滯，直接祛邪外出，恢復天、人、地三氣的同步運行，從而達到治療目的。

青藤堿是壯藥青風藤治療類風濕關節炎主要有效的化學成分，現代臨床及實驗發現，青藤堿治療類風濕關節炎的臨床效果顯著，對類風濕發病過程中的各種炎性因子都有一定的影響。如能降低細胞因子IL-1、IL-6[14]、IL-1、IL-17[15]、TNF-α等的表達;還能上調IL-4[16]的表達，從而減輕類風濕關節炎的滑膜增生和骨破壞。但是對類風濕關節炎發病過程中血小板的影響情況卻研究不多。

本實驗發現，青藤堿對類風濕關節炎模型大鼠的血小板因子PDGF和PAF有抑制作用，并能有效緩解大鼠關節腫脹，達到治療類風濕關節炎的效果。但在藥物濃度上有一定的要求。

參考文獻

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（收稿日期：2020-06-09 編輯：程鵬飛）

基金項目：國家自然科學基金資助項目（編號：81973976）;壯瑤藥協同創新中心（桂教科研〔2013〕20號）;廣西一流學科建設項目（編號：桂教科研[2018]12）。

作者簡介：曹知勇（1994-），男，土家族，碩士研究生在讀，研究方向為民族醫藥、中醫疑難雜病。E-mail：caozhiyong2019@163.com

通信作者：龐宇舟（1963-），男，漢族，碩士，教授，博士研究生導師，研究方向為民族醫藥、中醫內科。E-mail：2017yuzhoupang@sina.com