肝癌組織LncRNATINCR表達水平對術(shù)后長期生存的影響

陸悅 唐成武

[摘要] 目的 探討肝癌組織中LncRNA TINCR表達水平對術(shù)后長期生存的影響。 方法 回顧性分析2013年4月～2016年2月間在本院接受手術(shù)治療的157例肝細胞肝癌患者的臨床資料。RT-PCR 法檢測肝癌標(biāo)本內(nèi)LncRNA TINCR表達水平，采用ROC曲線和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表達水平對肝癌術(shù)后長期生存的影響。結(jié)果 肝癌組織LncRNA TINCR表達水平對術(shù)后長期生存預(yù)測的曲線下面積（AUC）為 0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果，將肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平大于1.89的93例（59.24%）患者納入高表達組，而肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達組。Kaplan-Meier法生存分析發(fā)現(xiàn)高表達組術(shù)后3年內(nèi)有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達組術(shù)后3年內(nèi)有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64），低表達組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達組（P<0.0001，兩組間死亡風(fēng)險比為3.7534，95%可信區(qū)間為2.5158～5.6000）。 結(jié)論 肝癌組織LncRNA TINCR表達水平與肝癌術(shù)后長期生存顯著相關(guān)，LncRNA TINCR表達水平升高則預(yù)示著預(yù)后不佳。

[關(guān)鍵詞] 肝細胞癌;表達;肝切除;長期生存;LncRNA TINCR

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）29-0024-04

[Abstract] Objective To explore the effect of the LncRNA TINCR expression level in hepatocellular carcinoma tissues on the long-term survival. Methods The clinical data of 157 patients with hepatocellular carcinoma who received surgical treatment in our hospital from April 2013 to February 2016 were retrospectively analyzed. The expression levels of LncRNA TINCR in HCC specimens were detected by RT-PCR， and the effect of the expression levels of LncRNA TINCR on the long-term survival after HCC surgery was analyzed by the ROC curve and Kaplan-Meier method. Results The AUC， specificity， sensitivity and the optimum interpretation value of the LncRNA TINCR expression levels in hepatocellular carcinoma tissues for prediction of the long-term survival after surgery were 0.812， 73.77%， 79.17% and 1.89（P<0.0001）. According to the ROC curve analysis results， 93 patients（59.24%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues greater than 1.89 were included in the high-expression group， while 64 patients（40.76%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues less than or equal to 1.89 were included in the low-expression group. A total of 76 patients in the high-expression group died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 18.28%（17/93）， which was found by the Kaplan-Meier survival analysis. In the low-expression group， 20 patients died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 68.75%（44/64）. The 3-year overall survival rate in the low-expression group was significantly better than that in the high-expression group（P<0.0001， mortality risk ratio between the two groups were 3.7534， 95% confidence interval was 2.5158-5.6000）. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in HCC tissues is significantly correlated with long-term survival after HCC surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates poor prognosis.

[Key words] Hepatocellular carcinoma（HCC）; Expression; Hepatectomy; Long-term survival; LncRNA TINCR

肝癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是嚴(yán)重危害國民健康的重大公共衛(wèi)生難題[1-3]，全世界超過一半的新發(fā)HCC病例和死亡病例發(fā)生在我國。雖然針對HCC的治療有了長足的發(fā)展，但是根治手術(shù)仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國大部分HCC發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，甚至已經(jīng)侵犯膽道及門脈系統(tǒng)，因此術(shù)后復(fù)發(fā)率高，總體預(yù)后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探究引起HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的易感因素和靶點，從根本上阻斷HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的通路，達到改善預(yù)后的目的。終末分化誘導(dǎo)非編碼RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb的LncRNA轉(zhuǎn)錄本[7]。研究發(fā)現(xiàn)LncRNA TINCR在肝細胞癌、結(jié)直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等惡性腫瘤中表達異常，并與多種分子相互作用而影響基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后過程，可加速腫瘤的發(fā)展[8-11]。本研究旨在探討HCC組織中LncRNA TINCR表達水平對肝癌術(shù)后長期生存的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性研究2013年4月～2016年2月在本院行肝癌切除的157例HCC患者的臨床資料，納入標(biāo)準(zhǔn)[12]：未接受任何抗癌治療;非彌漫性HCC;術(shù)后隨訪6個月以上;無失訪情況;所有治療經(jīng)患者本人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前已有肝外轉(zhuǎn)移;術(shù)后隨訪短于6個月。

1.2 肝癌組織LncRNA TINCR相對表達量檢測

采用Tissue RNA Kit提取肝癌組織RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后，用于RT-PCR檢測組織中TINCR相對表達量，試劑盒均購自南京東極醫(yī)藥科技有限公司，操作過程嚴(yán)格參照說明書進行。TINCR上游引物為5'-CCATC CCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物為5'-GTTGGGT-CTAGATTCCAGCA-3'，以Actin為內(nèi)參，Actin上游引物為5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物為5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR程序：95℃預(yù)變性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃，30 s，40個循環(huán);最后72℃延伸10 min。

1.3 隨訪及觀察指標(biāo)

術(shù)后半年內(nèi)每個月進行隨訪，之后每3個月1次。隨訪內(nèi)容包括體格檢查、血常規(guī)、生化及腫瘤標(biāo)記物監(jiān)測，如有可疑復(fù)發(fā)，需行超聲、增強CT、MRI，必要時行腸鏡及穿刺活檢確認(rèn)。一旦確認(rèn)腫瘤復(fù)發(fā)，記錄復(fù)發(fā)的時間及部位。總生存時間定義為自手術(shù)開始直至死亡或最后一次隨訪（復(fù)發(fā)前）。比較兩組3年總生存情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。LncRNA TINCR表達對術(shù)后生存的預(yù)測作用采用ROC曲線分析。Kaplan-Meier法繪制患者無瘤生存情況曲線，采用Log-rank法分析。所有統(tǒng)計均由MEDCALC 15.2軟件完成，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術(shù)后生存的預(yù)測價值

將HCC組織LncRNA TINCR表達水平與術(shù)后復(fù)發(fā)情況（無復(fù)發(fā)=0，復(fù)發(fā)=1）繪制ROC曲線（圖1），并計算得出曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。

2.2 HCC組織LncRNA TINCR表達對術(shù)后長期生存的影響

將HCC組織LncRNA TINCR相對表達水平大于1.89（ROC曲線所得的最佳判讀值）的93例（59.24%）患者納入高表達組，而將LncRNA TINCR相對表達水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達組。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。高表達組術(shù)后3年內(nèi)有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達組術(shù)后3年內(nèi)有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64）。Log-rank法分析生存曲線發(fā)現(xiàn)低表達組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達組（P<0.0001，兩組間死亡風(fēng)險比為3.7534，95%可信區(qū)間為2.5158～5.6000）。見封三圖1。

3 討論

HCC目前仍是嚴(yán)重危害國民健康的重大公共衛(wèi)生難題，全世界超過一半的新發(fā)HCC病例和死亡病例發(fā)生在我國[1]。雖然針對HCC的治療有了長足的發(fā)展，但是根治手術(shù)仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國大部分HCC發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，甚至已經(jīng)侵犯膽道及門脈系統(tǒng)，因此術(shù)后復(fù)發(fā)率高，總體預(yù)后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探究引起HCC術(shù)后復(fù)發(fā)易感因素和靶點，以改善HCC患者預(yù)后[12]。

新一代的基因測序技術(shù)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過90%的人類基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一系列非蛋白編碼（非編碼）RNA（ncRNA）[13-14]。長鏈非編碼RNA（LncRNA）大于200核苷酸長度，雖然不具有蛋白質(zhì)編碼功能，卻能顯著影響生物學(xué)過程[15]。與microRNA相比，LncRNA的功能及機制尚未完全被人類掌握。然而，近年來人們對LncRNA的研究越來越深入。目前已經(jīng)證實LncRNA能調(diào)節(jié)多種細胞生理活動，包括染色質(zhì)修飾、基因印記、選擇性剪接、基因組重排、細胞增殖、遷移、凋亡及核質(zhì)轉(zhuǎn)運等[16]。研究表明，LncRNA參與了廣泛的生理及病理生理過程，通過正反饋/負反饋通路在癌癥發(fā)生發(fā)展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有證據(jù)顯示，LncRNA與腫瘤細胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)[18-19]。因此，LncRNA有望成為腫瘤診斷標(biāo)志物及潛在的治療的靶點。

終末分化誘導(dǎo)非編碼RNA（Terminal differentiation -induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb的LncRNA轉(zhuǎn)錄本[20]。研究發(fā)現(xiàn)TINCR在肝細胞癌、結(jié)直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表達異常，TINCR與多種分子相互作用而影響基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后過程，可加速腫瘤發(fā)展[8-11，21]。

近年來，關(guān)于LncRNA TINCR 在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制研究日漸受到重視。有學(xué)者利用蛋白組學(xué)對攜有丙肝病毒的肝癌患者的肝癌組織進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在此類肝癌組織中LncRNA TINCR的表達較正常肝組織增高[22]。有學(xué)者將HCC組織中的LncRNA TINCR的表達水平與腫瘤大小、TNM分期及血管浸潤進行相關(guān)性分析，結(jié)果提示兩者相關(guān)性緊密，而進一步的生存分析發(fā)現(xiàn)，高表達的患者術(shù)后無瘤生存率略低于表達患者，從而推測LncRNA TINCR表達升高能增加腫瘤侵襲性，并能促進HCC術(shù)后進展[10]。

本研究結(jié)果顯示，HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術(shù)后生存預(yù)測的曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。通過此結(jié)果，將患者分為LncRNA TINCR高表達組和LncRNA TINCR低表達組，Log-rank法分析生存曲線發(fā)現(xiàn)低表達組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達組（P<0.0001）。

已有研究顯示，LncRNA TINCR能作為競爭性地結(jié)合microRNA（Competing endogenous RNA，ceRNA）調(diào)控基因表達，其不但可活化某些蛋白編碼基因的表達，亦可以抑制蛋白編碼基因的表達[23-25]。目前已經(jīng)證實，LncRNA TINCR能通過競爭性結(jié)合miR-375，從而下調(diào)miR-375表達，起到促進腫瘤進展的作用，而大量研究表明miR-375在肝癌中發(fā)揮抑制腫瘤的功能[26-27]。因此，可以推測通過降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表達，從而抑制HCC進展，能顯著改善HCC預(yù)后。

綜上所述，肝癌組織LncRNA TINCR表達水平與肝癌預(yù)后顯著相關(guān)，LncRNA TINCR表達水平升高則預(yù)示著預(yù)后不佳，因此LncRNA TINCR可能是改善肝癌術(shù)后長期生存的有效治療靶點。

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（收稿日期：2019-09-17）