彌漫大B細胞淋巴瘤組織中PCDH10的表達

薛伍君，陳清江，張旭東，張明智，陳國榮，吳少璇，尹美鳳，楊萬秋，王進隆，吳曉爽， 唐燦偉，李 沖

1)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院腫瘤科 河南新鄉(xiāng)453000 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科 鄭州450052

彌漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是最常見的非霍奇金淋巴瘤，約占所有惡性淋巴瘤的30%，具有高度侵襲性、異質(zhì)性等特點，約60%的患者經(jīng)過一線標準治療方案R-CHOP(利妥昔單抗、環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿和潑尼松)治療后可達到臨床治愈，但仍有近40%的患者治療效果較差[1-3]。因此，探索新的治療相關(guān)靶點成為研究的熱點。

原鈣黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)屬于非聚集原鈣黏蛋白家族δ2型，其在細胞黏附、細胞凋亡、細胞周期、集落形成和信號傳導(dǎo)等過程中發(fā)揮重要的調(diào)控功能[4-5]。最新研究[6-8]顯示PCDH10可抑制腫瘤細胞的生長、遷移、侵襲和集落形成等生物學(xué)行為，可能作為抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。PCDH10表達下調(diào)是成熟B細胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展的重要早期事件[9]，且部分淋巴瘤細胞系中PCDH10表達下調(diào)會促進化療耐藥[10-11]。 此外，研究[12]還發(fā)現(xiàn)在B細胞淋巴瘤細胞系中，野生型P53可誘導(dǎo)PCDH10表達上調(diào)，上調(diào)PCDH10表達可抑制腫瘤細胞遷徙和轉(zhuǎn)移。本研究采用免疫組化染色法檢測DLBCL組織及炎性增生淋巴結(jié)組織中PCDH10蛋白的表達情況，并結(jié)合患者臨床資料進行分析，探討PCDH10在DLBCL組織中的表達情況及臨床意義。

1 對象與方法

1.1研究對象收集2014年1月至2016年12月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院和鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院診斷為DLBCL的石蠟包埋組織55例(DLBCL組)，其中男30例，女25例，年齡16～85歲。骨髓侵犯12例；Ⅰ、Ⅱ期24例，Ⅲ、Ⅳ期31例；國際預(yù)后評分指數(shù)(IPI)0～2分29例，3～5分26例；乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)≥281 U/L 32例， <281 U/L 23例；Ki-67≥60% 26例， <60% 29例。另收集此期間23例炎性增生淋巴結(jié)組織(炎性組)作為對照。

1.2DLBCL組織及炎性增生淋巴結(jié)組織中PCDH10蛋白表達的檢測采用免疫組化SP法。兔抗人PCDH10多克隆抗體購自三鷹生物技術(shù)公司，免疫組化SP染色試劑盒和DAB顯色劑購自中杉金橋生物技術(shù)公司。石蠟包埋組織切片，常規(guī)脫蠟，高溫修復(fù)后PBS沖洗3次，暴露抗原，H2O2處理，加兔抗人PCDH10多克隆抗體(1∶100稀釋)，4 ℃孵育過夜(PBS代替一抗作陰性對照)；加二抗孵育30 min后DAB顯色，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化，透明，最后中性樹膠封片。細胞核和細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色染色為陽性細胞。每張切片均在高倍鏡下選取5個視野，計數(shù)陽性細胞數(shù)，每個視野至少計數(shù)200個細胞。結(jié)果判定參照文獻[13]：無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細胞百分比<25% 1分，25%～50% 2分，>50% 3分。兩項結(jié)果相乘得分≥2分為陽性， <2分為陰性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0處理數(shù)據(jù)。采用χ2檢驗比較兩種組織中PCDH10蛋白陽性表達率的差異，采用χ2趨勢檢驗分析PCDH10陽性表達率隨腫瘤分期和IPI評分變化的趨勢，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1兩種組織中PCDH10的表達情況PCDH10蛋白主要表達于細胞核與細胞質(zhì)(圖1)。DLBCL組PCDH10的陽性表達率為29.1%(16/55)，低于炎性組[65.2%(15/23)](χ2=8.838，P=0.003)，提示PCDH10在DLBCL組織中低表達。

A：炎性組PCDH10高表達；B：DLBCL組PCDH10低表達

2.2DLBCL組織中PCDH10的表達與患者臨床病理特征之間的關(guān)系DLBCL組織中PCDH10的表達與LDH水平、Ki-67表達水平、Ann Arbor分期和IPI有關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、有無骨髓侵犯均無關(guān)(P>0.05)(表1)。

表1 PCDH10的表達與DLBCL患者一般和臨床指標之間的關(guān)系 例

表2 不同Ann Arbor分期和IPI患者DLBCL組織中PCDH10表達的變化

3 討論

PCDH10基因又稱OL-protocadherin(OL-PCDH)，位于4q28.3，其編碼的PCDH10蛋白屬于非聚集原鈣黏蛋白家族δ2型，是一種鈣黏蛋白相關(guān)的跨膜蛋白，廣泛表達于成人和胎兒組織中，在細胞-細胞連接、細胞遷移和軸向引導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用[14]。早期研究[15-16]發(fā)現(xiàn)，PCDH10是與自閉癥相關(guān)的候選基因，在自閉癥的形成中發(fā)揮重要作用。

研究發(fā)現(xiàn)，PCDH10在子宮內(nèi)膜癌[17]、胃癌[18]、乳腺癌[5]等癌組織中低表達，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因作用，且PCDH10可以通過調(diào)控PCDH10-DEPDC1-caspase調(diào)控軸激活caspase凋亡信號通路促進腫瘤細胞凋亡[17]。研究[19]報道，肝癌患者PCDH10低表達與高TNM分期、較大腫瘤尺寸等病理特征之間具有顯著相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，DLBCL組織中PCDH10蛋白的表達低于增生淋巴結(jié)組織，提示其可能發(fā)揮抑癌基因功能而參與DLBCL的發(fā)生。此外，PCDH10在Ann Arbor分期Ⅲ、Ⅳ期組織中的表達低于Ⅰ、Ⅱ期，且PCDH10陽性表達率隨Ann Arbor分期進展呈下降趨勢，提示PCDH10低表達可能參與了DLBCL的惡性化進展過程。PCDH10可以與Nap1/WAVE1相互作用形成PCDH10/Nap1/WAVE1復(fù)合物從而調(diào)節(jié)細胞遷移[14]，DLBCL中PCDH10表達異常可能會導(dǎo)致其調(diào)節(jié)細胞遷移功能紊亂而加速疾病惡性化進程。

此外有研究指出，PCDH10低表達可作為預(yù)測肝癌[19]、胃癌[20]、肺癌[21]患者不良預(yù)后的指標。本研究顯示，PCDH10陰性表達的DLBCL患者普遍具有較高LDH水平、Ki-67和IPI等不良預(yù)后指標，且PCDH10陽性表達率隨IPI增加呈下降趨勢，提示其低表達可能與DLBCL不良預(yù)后相關(guān)。另據(jù)文獻[22]報道，PCDH10是一種人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)相互作用蛋白，其與hTERT相互作用并通過負調(diào)節(jié)端粒酶活性來發(fā)揮抑癌作用，因此推測DLBCL中PCDH10表達異常可能會導(dǎo)致腫瘤細胞端粒酶活性失調(diào)從而促進患者不良預(yù)后的發(fā)生。

綜上所述，PCDH10在DLBCL組織中低表達，與腫瘤細胞惡性行為及不良預(yù)后有關(guān)，可能作為抑癌基因參與DLBCL的發(fā)展。檢測PCDH10有望為DLBCL患者病情評估及預(yù)后分析提供幫助，在DLBCL發(fā)病機制研究和臨床診療中具有潛在價值。