漢桃葉化學成分的藥理作用及質量控制研究進展

羅 媛，晏 婷，鞏仔鵬，李月婷，王愛民，陳思穎，鄭 林，黃 勇*

(1.貴州省骨科醫(yī)院 藥科劑，貴州 貴陽 550002； 2.貴州醫(yī)科大學 貴州省藥物制劑重點實驗室/藥用植物功效與利用國家重點實驗室，貴州 貴陽 550004； 3.貴州醫(yī)科大學 藥學院，貴州 貴陽 550004； 4.貴州醫(yī)科大學 民族藥與中藥開發(fā)應用教育部工程研究中心，貴州 貴陽 550004)

漢桃葉(ScheffleraarboricolaHagata)為五加科植物鵝掌柴屬的干燥莖枝[1]。又名鵝掌藤、七葉蓮。主要分布于我國廣西、貴州、云南、福建、浙江等地[2]。始載于《常用中草藥手冊》，并收載于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》、2005年版《云南省中藥材標準》和2009年版《湖南省中藥材標準》，其單方制劑“漢桃葉片”收載于2015年版《中國藥典》一部，其性苦味甘，有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和催眠作用，對坐骨神經痛、三叉神經痛、神經性頭痛、風濕性關節(jié)痛等均有較好的療效[3]。漢桃葉在臨床上主要用于止痛，對三叉神經痛、坐骨神經痛等有明顯的緩解作用。目前已對其化學成分、藥理活性及質量檢測研究等方面進行了深入研究。為漢桃葉資源的研究及開發(fā)利用提供參考依據，在廣泛檢索文獻的基礎上，從化學成分、藥理活性及質量檢測等方面對漢桃葉的研究進行綜述。

1 化學成分

漢桃葉藥材的研究主要集中在20世紀80年代，國內外研究表明，漢桃葉的化學成分主要是齊墩果烷型的五環(huán)三萜及其苷類[4-5]，另外還含有甾醇、長鏈烯烴、有機酸、揮發(fā)油等成分[6-7]。這些成分均具有藥理作用。藥理研究[6-10]證明，漢桃葉中藥材中含有多種藥理活性成分，如漢桃葉總三萜具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛作用，總皂苷具有降尿酸及影響尿酸轉運蛋白作用，有機酸具有鎮(zhèn)痛及抗驚厥作用，揮發(fā)油具有抗菌、抗炎和鎮(zhèn)痛作用等。

1.1 三萜皂苷類

MELEK等[4]采用高相液相色譜法，從漢桃葉莖葉中分離出9種三萜皂苷類成分，分別是3-O- [α-L-鼠李糖基吡喃糖基-(1→4)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齊墩果酸(1)、3-O- [α-L-鼠李糖基吡喃糖基-(1→4)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]棘膽囊酸(2)、3-O- [β-D-呋喃呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齊墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3)、3-O-α-L-吡喃吡喃糖基-(1→4)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖-花生酰基齊墩果酸(4)、3-O-α-L-鼠李糖基-(1→4)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖基齊墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯(5)、3-O-α-L-鼠李糖基吡喃糖基-(1→4)-[β-D-吡喃并吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖基齊墩果酸(6)、3-O-α-L-鼠李糖基-(1→4)-[β-D-吡喃并吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖基齊墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基(7)、3-O-β-D-呋喃呋喃糖基-(1→4)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖基齊墩果酸(8)、3-O-β-D-呋喃呋喃糖基-(1→4)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)-]β-D-葡糖醛酸吡喃糖基齊墩果酸28-O-b-D-吡喃葡萄糖基酯(9)。WANG等[11]從漢桃葉中分離得到4種新的齊墩果酸型三萜皂苷，分別是齊墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[α-L-阿拉伯吡喃糖基(1→4)]-β-D-(6-O-甲基)葡糖醛酸吡喃糖苷(1)、22α-羥基油酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基(1→4)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷(2)、3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基(1→4)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷(3)、齊墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基酯(4)。張橋等[12]采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜等方法從200 g的漢桃葉莖中分離出10個化學成分，其中野木瓜苷 C(49 mg)、刺楸皂苷 B(48 mg)、3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(30 mg)、刺楸皂苷 G(57 mg)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃木糖基 L-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(152 mg)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃木糖基 l-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-O-6-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(75 mg)，首次從漢桃葉植物中分離出。

1.2 揮發(fā)油類

THUC等[13]采用氣相色譜-質譜聯用(GC/MS)技術對漢桃葉莖葉揮發(fā)油進行分析表明，鑒別出的漢桃葉莖和葉揮發(fā)油化學成分分別占莖油和葉油的80.41%和93.23%，莖油中含有倍半萜類化合物，占莖油揮發(fā)油總含量的49.73%，葉油中主要成分為倍半萜類化合物，占葉油揮發(fā)油總含量的49.85%。莖油中的主要成分是石竹烯氧化物(29.21%)、石杉醇(10.30%)和環(huán)氧化物Ⅱ(6.27%)；葉油中主要成分為β-石竹烯(23.05%)、檸檬烯(14.90%)、石竹烯(13.97%)和α-Humulene(8.41%)。劉佐仁等[7]取漢桃葉嫩枝及鮮葉，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，共得到52個成分，經氣相色譜-質譜聯用儀綜合分析確認了其中的 16個化合物，占揮發(fā)油總量的 82.80%，其中，揮發(fā)油中大部分是萜烯類化合物[7，12]。章立華等[10]從漢桃葉揮發(fā)油中共分離出61種成分，并鑒定確認了其中53種主要成分，其中主要化合物為4-萜品醇(20.40%)、(-)-斯巴醇(16.01%)和氧化石竹烯(8.90%)等。

1.3 有機酸類

王大林等[6]采用水煎醇沉再以1%鹽酸洗脫的方法，分離得到粘液酸及反丁烯二酸。申佩玲等[1]采用薄層色譜與氣相色譜對漢桃葉醇提物進行定性鑒別，表明漢桃葉藥材中含有反丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸等有機酸成分。

1.4 甾醇類

HANSEN等[14]通過紅外光譜和核磁共振法從漢桃葉中分離出多孔甾醇，該物質在242 nm有最大吸收。

1.5 黃酮類

崔濤等[15]對漢桃葉地上部分采用65%乙醇進行提取，對其提取液回收乙醇后濃縮液再經過D-101大孔吸附樹脂柱純化得到干浸膏，稱取50 mg，甲醇稀釋后，使用高效液相色譜檢測3批漢桃葉中提取出的黃酮類化合物，在 509 nm處測定吸收度，其總黃酮含量分別為34.5%、36.0%和35.0%。稱取約100 mg干浸膏加入甲醇-25%鹽酸溶液( 4∶1) 25 mL，進行加熱回流，提取漢桃葉中的槲皮素，使用高效液相色譜檢測3批漢桃葉中提取出的槲皮素，3批漢桃葉中槲皮素含量分別為 0.955%、0.927%和0.906%。HANSEN 等[14]在200 g漢桃葉中分離出了鐮葉芹醇(110 mg)、(E)-β-金合歡烯(190 mg)和植物醇(100 mg)，其中鐮葉芹醇為過敏性接觸性皮炎的致敏原。張慧等[16]從漢桃葉檢測出Ca(6 096 μg/g)、Mg(2 670 μg/g)、Mn(1 212 μg/g)、Fe(170 μg/g)、Zn(87.4 μg/g)、Sr(71.6 μg/g)、Cu(4.8 μg/g)等多種人體必須的微量元素。

2 藥理作用

2.1 抗菌消炎

THUC等[13]采用微量稀釋法測定漢桃葉莖葉油中的抑菌活性結果表明，其對枯草芽孢桿菌的抑菌效果較好，抑菌原因可能是由于高濃度的β-石竹烯和氧化石竹烯的存在。LI等[17]從漢桃葉細枝和葉中分離出4-乙酰氧基-3,4,30,40-四甲氧基聯芐，并對該成分進行體外研究發(fā)現，4-乙酰氧基-3,4,30,40-四甲氧基聯芐具有抑制轉錄因子NF-KB的活性，轉錄因子NF-KB通過編碼促炎細胞因子、黏附分子、趨化因子、生長因子和誘導酶(如COX-2和iNOS)的基因調控多種促炎途徑，從而抑制炎癥反應效應。張慧等[16]用硝酸-高氯酸進行消解，通過電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)測定漢桃葉中Al、Ba、Ca、Co、Cu、Fe、Mg等多種微量元素的含量表明，漢桃葉中含有Ca、Mg、Mn、Fe、Zn、Sr、Cu等多種人體必須的微量元素，其中與炎癥相關的Mn、Zn、Fe等微量元素含量較高，Mn、Zn、Fe具有明顯的抗菌消炎作用。

2.2 鎮(zhèn)痛抗炎及解痙

秦思等[8]通過體內及體外試驗表明，漢桃葉藥材中提取的總三萜成分具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛作用，較漢桃葉片效果更佳，為漢桃葉藥材中的有效部位。劉嫻等[18]用乙酸乙酯部位、正丁醇部位對大鼠棉球肉芽腫以及二甲苯引起的耳廓腫脹均有明顯的抑制作用，其中乙酸乙酯部位能夠有效抑制大鼠醋酸刺激腹腔黏膜引起的疼痛反應；指出漢桃葉乙酸乙酯提取物可能是治療類風濕性關節(jié)炎的有效部位。林小鳳等[19]研究表明，漢桃葉抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用的有效部分主要集中在葉揮發(fā)油部分、莖水提液的氯仿部分和正丁醇部分。經小鼠試驗證明，相當生藥2.5 g漢桃葉注射液的鎮(zhèn)痛效果較嗎啡0.12 mg的效能略強。章立華等[10]研究表明，漢桃葉揮發(fā)油可明顯減少小鼠醋酸所致的扭體次數，可明顯緩解小鼠二甲苯所致的耳廓腫脹。黃婧等[20]用扭體法觀察鎮(zhèn)痛作用，用二甲苯使小鼠致炎法觀察該藥的抗炎作用表明，漢桃葉中的黃酮具有較強的鎮(zhèn)痛抗炎活性。徐杰等[21-22]研究表明，漢桃葉注射液對離體豚鼠腸、胃平滑肌有解痙作用。

2.3 降尿酸及影響尿酸轉運蛋白

朱玲玲等[9]通過評估血清尿酸水平、肝臟黃嘌呤氧化酶活性和腎臟尿酸轉運蛋白表達水平來研究漢桃葉總皂苷抗高尿酸血癥的作用，結果顯示，漢桃葉總皂苷低、中、高劑量均能抑制黃嘌呤氧化酶活性，并隨劑量的增加，抑制作用逐漸增強。在體內研究中，漢桃葉總皂苷低、中、高劑量組小鼠的血清尿酸水平、肝臟黃嘌呤氧化酶活性及腎臟尿酸轉運蛋白URAT1表達均較模型組低，并均呈現一定的劑量依賴性；并指出漢桃葉總皂苷可以通過抑制黃嘌呤氧化酶活性和降低腎臟尿酸轉運蛋白URAT1表達2種途徑發(fā)揮降尿酸的作用。

2.4 抗驚厥

漢桃葉中的有機酸由一些已知的粘液酸及反丁烯二酸等組成。王大林等[6]以漢桃葉有機酸注射液與戊巴比妥鈉協同作用為指標找出漢桃葉的有效部位為有機酸，并分離到粘液酸及反丁烯二酸，對反丁烯二酸進行了藥理試驗，證明其具有鎮(zhèn)痛及抗驚厥作用。

3 質量檢測方法

目前《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》《云南省中藥材標準》和《湖南省中藥材標準》地方藥材標準中收載有漢桃葉藥材[23-24]，標準中僅有性狀、鑒別(薄層)、檢查和浸出物等項目，除地方標準規(guī)定的檢查、鑒別方法外，還研究開發(fā)了不同的質量檢測方法，在深度和廣度方面都有了明顯的進步。主要以氣相色譜-質譜聯用、高效液相色譜法、紫外分光光度法、薄層色譜法為技術支撐，進行漢桃葉藥材的質量評價。

3.1 氣相色譜-質譜聯用法

氣相色譜-質譜聯用法主要用于分離分析易揮發(fā)的物質，此法具有簡便、快速、高靈敏度、高選擇性等特點。在漢桃葉的質量分析中主要用于揮發(fā)油、大孔樹脂有機殘留物的檢測。THUC等[13]利用水蒸氣蒸餾法提取漢桃葉莖葉中揮發(fā)油，用面積歸一法測得各組分的百分含量，共鑒定了39種化合物。章立華等[10]利用水蒸汽蒸餾，取餾出液，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液，減壓蒸餾，回收乙醚，用無水硫酸鈉干燥24 h后，過濾，得到具有特殊氣味的無色揮發(fā)油，結合計算機檢索技術對分離的化合物進行鑒定，應用面積歸一法計算各成分的相對含量，共鑒定出60種化合物。

3.2 紫外分光光度法

王立業(yè)等[24]根據漢桃葉藥材的性質及所含化學成分，將漢桃葉經過石油醚脫脂后，除去非皂苷類的親脂性的雜質，再用甲醇提取，然后用水飽和的正丁醇萃取，制得的溶液液體澄清，以齊墩果酸為對照品，香草醛-冰醋酸-硫酸溶液為顯色劑，于532 nm波長下進行的檢測結果表明，齊墩果酸檢測濃度在0 ～ 240 μg/mL與吸光度呈良好的線性關系。崔濤等[15]采用紫外分光光度法，對3個批次漢桃葉分離出的總黃酮及槲皮素測定結果表明，總黃酮及槲皮素含量測定的方法均簡便合理、專屬性強，含量測定數據和圖譜均符合要求。故漢桃葉提取物質量標準研究可選用紫外分光光度法對其做定量測定。

3.3 高相液相色譜法

高效液相色譜法有簡便、快速、靈敏、準確等特點，在漢桃葉藥材的定性、定量的質量控制中非常重要。據報道，漢桃葉中的如反丁烯二酸[25]、延胡索酸[26]、常春藤皂苷元[27]、齊墩果酸[27]、槲皮素[16]和富馬酸[28]等成分均可使用高效液相色譜法進行測定，其中反丁烯二酸在215 nm有最大吸收，富馬酸在216 nm效果較好。常春藤皂苷元和齊墩果酸是漢桃葉中三萜皂苷類的主要類型，含量較高，可作為漢桃葉含量測定的主要指標[27]。

3.4 比色法

比色法是以生成有色化合物的顯色反應為基礎，通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。磷化鋁、磷化鋅、磷化鈣等磷化物是國內外廣泛使用的高效、低成本倉貯害蟲熏蒸殺蟲劑，中藥材漢桃葉在保存過程中，最常用的即為磷化物熏蒸法以預防和消滅蟲害[28]。藥材保存過程中產生的磷化物殘留存在很大的安全隱患，因此對藥材中磷化物殘留測定具有重要意義。牛延菲等[28]采用磷鉬酸銨比色法測定磷化物含量，同時采用電感耦合等離子體質譜法進行檢測方法的比較結果表明，10個不同產地漢桃葉中藥材中磷化物的含量均沒有超過糧食標準中有關規(guī)定(磷化物最大殘留限量 0.05mg /kg)且10個漢桃葉樣品的磷鉬酸銨比色法分析結果和電感耦合等離子體質譜法無顯著差別。磷鉬酸銨比色法測定漢桃葉藥材中磷化物殘留，簡單、快速和準確。

3.5 薄層色譜法

申佩玲等[1]通過薄層色譜試驗，選用氯仿-醋酸乙酯-甲酸(10∶5∶1)研究結果表明，從漢桃葉中提取的反丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸與對照品相應的位置上顯示相同顏色的斑點。李雅靜等[29]以亞油酸為對照，以三氯甲烷-丙酮(12∶1)溶液為展開劑，展開，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視結果表明，薄層色譜斑點清晰，分離度較好。該法可以有效區(qū)分漢桃葉及其混偽品，漢桃葉與其他易混淆的鵝掌柴屬植物薄層色譜行為差異較大。

4 結語

漢桃葉作為我國傳統的民間中草藥，含有多種化學成分，具有廣泛的生物活性，尤其是抗炎鎮(zhèn)痛等方面有顯著的療效。目前，漢桃葉的研究仍存在諸多問題，藥理研究僅見以水煎劑、醇提物及有機酸方面的報道，對化學成分方面的研究報道較多。漢桃葉研究僅局限在粗體物的活性上，對單體化合物的篩選較少，很多藥理作用的目標成分還不是很清楚，僅對研究較多的有機酸類、三萜皂苷類、黃酮類化學成分等進行定性、定量檢測，并且在質量控制方面研究較少，缺少含量測定等有效的質量控制方法，嚴重制約了該植物的合理開發(fā)利用。因此，還有待進一步探索漢桃葉的有效部位和有效成分，明確其化學成分與藥理活性之間的關系，建立有效的質量控制方法以促進中藥漢桃葉的開發(fā)。