慢性乙型肝炎患者血清纖維蛋白原樣蛋白1與HBV DNA載量的相關性分析

謝明容 張川

慢性乙型肝炎是因乙型肝炎病毒感染導致的慢性病毒感染性肝病，若早期救治不及時，將發展為肝纖維化，甚至發展為肝衰竭、肝硬化[1]。目前，用于評價慢性乙型肝炎患者肝纖維化的標準方法為肝組織病理學檢查，這種檢查方法雖準確度高，但因其具有創傷性，應用有局限[2]。故找到一種可以評價慢性乙型肝炎患者病情進展的無創手段極為關鍵且必要。研究認為，監測慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)DNA載量復制情況可以作為患者病情進展的直接標志[3]。但這種HBV DNA監測的方法對于部分低水平病毒復制的乙型肝炎e抗原陰性的患者，監測敏感度與特異度均降低，應用仍有局限[4]。研究發現，由肝臟分泌的纖維蛋白家族中的纖維蛋白原樣蛋白1(FLP1)用于肝纖維化早期診斷有一定價值[5]。FLP1是一種特異性促肝增殖因子，能夠加速正常肝細胞增殖，保護肝細胞不受其他有害物質的損傷，其血清濃度變化可能反映了肝細胞損傷與病變情況[6]。本研究主要檢測慢性乙型肝炎患者的血清FLP1、表達情況，分析患者血清FLP1與HBV DNA載量的相關性，旨在為慢性乙型肝炎感染者早期診斷與疾病進展提供一種敏感的血清檢測指標。

資料與方法

一、研究對象

在獲得醫院倫理委員會批準同意后，選取我院2017年8月至2019年10月期間就診的204例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，全部患者及其家屬對此次研究實施的內容均知情，并簽署知情同意書。全部患者均經肝臟穿刺后病理活檢結果確診，根據肝纖維化的嚴重程度對患者進行分組，分別為S0組(42例)、S1組(39例)、S2組(46例)、S3組(38例)、S4組(39例)，上述全部患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[7]中慢性乙型肝炎的診斷標準。排除：嚴重心肺功能不全患者、自身免疫性肝炎患者、其他類型病毒性肝炎患者、酒精性肝病患者、心理疾患或精神疾患等無法很好配合研究的患者、合并其他重要臟器功能衰竭的患者。5組不同肝纖維化嚴重程度患者的性別、年齡、體重、病程等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

二、研究方法

(一)肝穿刺組織活檢 經肝臟彩超輔助下定位，使用肝臟穿刺針(16G)經皮穿刺吸入適量肝組織，石蠟包埋之后進行蘇木精-伊紅染色法，由病理科2名有資深經驗的醫師閱片，并參照《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》中纖維化嚴重程度分級標準進行分析，包括S0～S4級。

(二)血清FLP1水平檢測 采集全部患者的空腹外周靜脈血5 mL，經3000 r/min轉速離心10 min，離心處理后，取上清液保存待檢。使用rinogen-like protein 1 Elisa Kit(HMl2166，BIOSWAMP)試劑盒，采用酶聯免疫吸附檢測血清FLP1水平。

(三)HBV DNA載量檢測 采集全部患者的空腹外周靜脈血5 mL，經3000 r/min轉速離心10 min，離心處理后，取上清液保存待檢。采用實時熒光定量(fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)檢測HBV DNA載量水平，檢測儀器為PE 5700型自動熒光PCR檢測儀，試劑盒由廣州中山大學達安基因股份有限公司提供，操作步驟嚴格參照說明書。結果判讀[8]：樣品HBV DNA含量低于1.0×103拷貝/mL時判定為陰性，反之則判定為陽性，比較各組HBV DNA拷貝數的對數值。

表1 5組慢性乙型肝炎患者的基線資料比較

三、統計學分析

結 果

一、5組患者血清FLP1水平、HBV DNA載量拷貝數的對數值比較

隨著慢性乙型肝炎患者的肝纖維化分級加重，患者的血清FLP1水平降低、HBV DNA載量拷貝數的對數值升高，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 5組患者血清FLP1水平、HBV DNA載量拷貝數的對數值比較(±s)

二、5組患者HBV DNA陽性率比較

隨著慢性乙型肝炎患者肝纖維化分級加重，患者HBV-DNA陽性檢出率升高，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 5組患者HBV DNA陽性檢出率比較

三、不同HBV DNA載量對數值患者的血清FLP1水平比較

隨著HPV DNA載量拷貝數對數值的升高，患者血清FLP1水平呈下降趨勢，4組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 4組不同HBV DNA載量對數值慢性乙型肝炎

四、血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數對數值的相關性結果

將血清FLP1作為自變量，HBV DNA載量拷貝數對數值作為因變量，經雙變量Pearson直線相關檢驗結果顯示，慢性乙型肝炎患者的血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數對數值呈負相關(r=-0.584，P<0.001)。見圖1。

圖1 血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數對數值相關性散點圖

討 論

目前，臨床上常通過檢測患者的HBV DNA載量來反映病毒復制情況，并將其作為慢性乙型肝炎患者治療的適應證及主要療效評價方法[9]。但這一方法依然存在局限，部分乙型肝炎病毒e抗原結果為陽性者，其e抗原在轉陰之后，血清HBV DNA載量的檢測結果多為陰性，此時因慢性乙型肝炎患者已經接受抗病毒治療，其體內的HBV DNA載量降低至檢測的下限以下；加之部分患者可能出現HBV突變的情況，常規檢測常無法獲得真實的病毒復制情況，此時若為這類患者行肝功能檢查或肝穿刺，可以發現HBV依然處于活動期，這就降低了病毒載量檢查的準確度與特異度[10-11]。可見，這些常規的檢查方法均無法很好反映出患者的真實的病毒復制情況，故還應找到一種準確度高、特異度高且無創的血清學標志物，與HBV DNA載體聯合用于慢性乙型肝炎早期病毒復制與活動情況的評價，以提高評價的準確性。

FLP1是一種肝源性生長因子，可以加速正常肝細胞的增殖[12]。FLP1基因包含外顯子8個與內含子7個，編碼氨基酸有312個，其中有22個N端氨基酸屬于先導肽，其單體相對分子質量為34×103，在機體中常以同源二聚體的形式來發揮自身局部的促正常肝細胞增殖的生物學活性[13-14]。部分研究表明，FLP1在肝組織呈高表達，能夠經自分泌加速正常肝細胞的增殖，在肝臟的再生過程中不斷分泌并上調自身表達量[15-16]。FLP1在刺激正常肝細胞增殖的同時，并不會對肝癌細胞產生刺激，不會誘導肝癌細胞發生增殖，相反，FLP1的過表達還有一定抑制肝癌細胞生長繁殖的作用[17]。基于FLP1的這些特點，推測其可能與慢性乙型肝炎患者肝纖維化有關。HBV DNA載量的表達情況不僅可以用于反映病毒復制情況，同時該載量還與各類肝病患者肝纖維化有關，常被作為肝纖維化分級主要的評價指標[18]。

本研究共納入204例慢性乙型肝炎患者，參照相關文獻根據肝纖維化分級進行分組，比較各組患者的血清FLP1水平及HBV DNA載量對數值，結果顯示，隨著肝纖維化分級提高，患者血清FLP1水平降低、HBV DNA載量對數值升高、HBV DNA陽性率升高；后根據HBV DNA載量對數值分組后，比較各組的血清FLP1水平結果顯示，隨著HBV DNA載量對數值升高，患者血清FLP1降低，可見二者間有一定相關性。進一步進行雙變量相關性檢驗結果顯示，慢性乙型肝炎患者的血清FLP1水平與HBV DNA載量間呈負相關，推測二者間互相影響，血清FLP1水平的變化檢測可能對早期監測慢性乙型肝炎患者病毒復制及肝纖維化的進展有一定指導價值。但本研究尚無較多循證依據可作為理論支持，加之此次研究納入樣本量相對較少，且未對治療前后的各指標進行觀察比較，研究仍有局限，還應在未來進一步展開大樣本、長時間的研究加以驗證，以指導臨床。