基于氧化還原反應界面可視化定量檢測辣根過氧化物酶

孔 昊,張 強,張 薇,劉偉文,曹成喜*,樊柳蔭

(1.上海交通大學學生創(chuàng)新中心,上海 200240;2.上海交通大學生命科學技術學院,上海 200240;3.上海交通大學電子信息與電氣工程學院,上海 200240)

辣根過氧化物酶(HRP)是一種重要的工具酶,被廣泛用于開發(fā)基于酶聯(lián)免疫吸附實驗[1]、酶聯(lián)適配體檢測實驗[2]以及其他基于酶催化反應[3]的生化檢測方法。同時,納米酶[4]、核酸過氧化物模擬酶[5]等具有HRP催化活性的物質亦被廣泛地用于開發(fā)生化分析方法。因此,開發(fā)檢測HRP的方法具有非常重要的意義。目前,HRP檢測方法主要基于光學檢測[1-5]以及電化學檢測[6-8]等方法進行檢測。這些方法依賴于昂貴、精密的儀器實現(xiàn)定量檢測,對于實驗環(huán)境、檢測成本有著較高要求,難以用于即時檢測,不易在條件受限地區(qū)推廣應用。

電泳滴定(electrophoresis titration,ET)是一種基于移動反應界面原理的可視化檢測方法,最初被用來對食品中蛋白質總量進行特異性檢測[9,10]。近年來,隨著檢測模型以及芯片技術的開發(fā),電泳滴定擺脫了傳統(tǒng)電泳裝置,實現(xiàn)了芯片化,并已成功用于乳制品中三聚氰胺及尿液中疾病標志物的現(xiàn)場檢測[11,12]。本文在上述研究基礎上,對隱色結晶紫(LCV)顯色體系與3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色體系在HRP催化顯色過程中的顯色效率進行了比較,以TMB顯色體系建立了基于氧化還原反應界面移動距離的可視化定量測定HRP的方法。該方法直觀、簡單、操作成本低,不需要光學檢測設備即可實現(xiàn)HRP的裸眼檢測,對于具有HRP活性的物質進行酶活測定或基于酶反應的生物標志物的檢測具有潛在的應用價值。……