曲霉(霉菌)蛋白酶早期研究的回顧

胡學(xué)智

上海市工業(yè)微生物研究所，上海 200233

蛋白酶是一用途廣泛的生物催化劑，上世紀(jì)50年代我國(guó)還沒(méi)有酶制劑工業(yè)，唯一的酶制劑只有制藥廠少量生產(chǎn)的胰酶和胃蛋白酶，供作醫(yī)藥用的消化劑和制革廠的軟化劑，60年代才開(kāi)始注意微生物蛋白酶的開(kāi)發(fā)利用，例如成都生物制品所之利用霉菌培養(yǎng)物試制蛋白胨，中科院微生物研究所之廣泛收集淀粉酶、蛋白酶生產(chǎn)微生物供釀造業(yè)使用，中科院上海生化研究所之利用菠蘿罐頭下腳提取蛋白酶、利用動(dòng)物廢棄胰臟提取蛋白酶等等。

筆者所在研究所前身上海市第一輕工業(yè)局試驗(yàn)所發(fā)酵組于1959年在顧問(wèn)陳騊聲先生領(lǐng)導(dǎo)下完成了液體曲制酒精研究后，為響應(yīng)市科委“大打工業(yè)生產(chǎn)細(xì)菌戰(zhàn)”的號(hào)召，在進(jìn)行谷氨酸發(fā)酵研究同時(shí)，又開(kāi)展了曲霉蛋白酶的生產(chǎn)與應(yīng)用研究，自1960到1974年的14年間先后完成了曲霉中性、酸性蛋白酶的生產(chǎn)和工業(yè)上應(yīng)用的研究，囿于當(dāng)時(shí)的環(huán)境和水平，我們克服了設(shè)備簡(jiǎn)陋、資料缺乏等困難，通過(guò)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和大量的試驗(yàn)工作，終于完成了任務(wù)，并成功地工業(yè)生產(chǎn)中性和酸性蛋白酶，及開(kāi)拓出在工業(yè)上能廣泛應(yīng)用。

光陰荏苒，轉(zhuǎn)瞬間60年過(guò)去了，當(dāng)年與我共事的同志都已耄耋之年，有的已經(jīng)離世，筆者也已年逾九旬，趁現(xiàn)在思維尚清，對(duì)我們上世紀(jì)60～70年代在蛋白酶研究中的崢嶸歲月的片段作一回顧，些許經(jīng)驗(yàn)供同輩和后進(jìn)同行參考，也為我國(guó)酶制劑工業(yè)發(fā)展提供點(diǎn)滴史實(shí)，不失為有意義之舉。

1 棲土曲霉蛋白酶和制革原料皮脫毛

1959年我所前身上海市第一輕工業(yè)局試驗(yàn)所發(fā)酵組與上海酒精廠、輕工業(yè)部食品發(fā)酵研究所合作項(xiàng)目“液體曲制酒精的研究”工業(yè)化試驗(yàn)成功，在國(guó)內(nèi)首先將抗生素生產(chǎn)的深層發(fā)酵技術(shù)引進(jìn)到我國(guó)的發(fā)酵工業(yè)，使酒精工業(yè)擺脫繁重的體力勞動(dòng)，為進(jìn)一步機(jī)械化自動(dòng)化創(chuàng)造了條件。1964年我所與天廚味精廠、上海生化研究所合作的發(fā)酵法生產(chǎn)味精的研究又積極開(kāi)展，加深了市科委對(duì)發(fā)酵工業(yè)的重視，提出了“工業(yè)生產(chǎn)細(xì)菌戰(zhàn)”的口號(hào)，我們?yōu)轫憫?yīng)工業(yè)細(xì)菌戰(zhàn)的號(hào)召，又展開(kāi)了蛋白酶生產(chǎn)和工業(yè)利用的研究，首先對(duì)由全國(guó)收集到的40余株釀造用曲霉作了普查，用麩皮原料做成麩曲，用水抽提后，分別在中性pH 7.0和酸性pH 4.0的環(huán)境下，用明膠甲醛滴定法測(cè)定它們的明膠分解力，結(jié)果表明黃綠色的曲霉在中性pH具有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)分解力，但在pH 4.0的酸性下無(wú)蛋白酶活性或活性甚微，若將浸出液在pH 3.0、40 ℃處理10 min，則中性下的酶活全部消失，只剩下在酸性的微弱酶活，而黑色曲霉則相反，在中性pH毫無(wú)蛋白酶活性，而只有在pH 4.0的酸性環(huán)境才有較強(qiáng)的蛋白酶活性，雖經(jīng)pH 3.0處理也無(wú)損于蛋白酶的活性，然而若經(jīng)pH 7.0的環(huán)境下40 ℃處理10 min則酶活力完全消失，此結(jié)果否定了當(dāng)時(shí)應(yīng)輕工業(yè)部邀請(qǐng)來(lái)華的蘇聯(lián)酶學(xué)專(zhuān)家芬尼克莎娃院士所作酶制劑的學(xué)術(shù)報(bào)告中宣稱(chēng)“黑曲霉不產(chǎn)蛋白酶”的結(jié)論，我們推測(cè)她是按常規(guī)，是在中性的pH下進(jìn)行測(cè)定所致，此結(jié)果加強(qiáng)了我們可用黑曲霉生產(chǎn)耐酸性蛋白酶的信心，其實(shí)日本已有從黑曲霉研制酸性蛋白酶的報(bào)導(dǎo)了。

皮革生產(chǎn)的第一步是將原料皮用水浸軟，在肉面涂抹硫化物石灰漿，使毛囊破壞而脫毛，再人工鏟毛，這種工藝勞動(dòng)強(qiáng)度高，污水嚴(yán)重，既污染環(huán)境，更損害工人健康，我們應(yīng)制革行業(yè)要求，試圖利用蛋白酶來(lái)破壞毛囊使之脫毛，而改善生產(chǎn)面貌，我們打破常規(guī)，采用將皮革原料樣品直接投入各種菌株麩曲抽提液中，保溫振蕩來(lái)篩選適合脫毛的蛋白酶生產(chǎn)菌種的方法，很快就篩選出了適用的蛋白酶生產(chǎn)菌——棲土曲霉3.374，此菌為中科院微生物研究所之保藏菌種，乃由上海酒精廠制成麩曲后交制革廠試用，很快酶法脫毛在上海和華東地區(qū)迅速推廣，在上海市7 000人大會(huì)受到了市領(lǐng)導(dǎo)的表?yè)P(yáng)，也引起了輕工業(yè)部的注意，酶脫毛新工藝于是在全國(guó)推廣，由于固體培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可土法上馬，在一些偏遠(yuǎn)地區(qū)甚至連小學(xué)、小酒坊也辦起了土法生產(chǎn)蛋白酶，來(lái)供應(yīng)當(dāng)?shù)刂聘飶S的需要。此外，我們還協(xié)助上海肉類(lèi)加工廠、上海魚(yú)品加工廠等將麩曲蛋白酶用于蛋白胨、蛋白、口服水解蛋白及硫酸軟骨素等制造以代替供應(yīng)緊張的胰酶，還用于塑料筆桿廠的廢膠卷片基三醋酸纖維和銀粒的回收。在此基礎(chǔ)上我們又展開(kāi)了液體深層培養(yǎng)生產(chǎn)蛋白酶的研究，在中科院微生物研究所的支持下，對(duì)該所提供的棲土曲霉突變株3.942的液體深層培養(yǎng)生產(chǎn)蛋白酶開(kāi)展了深入的研究，我們發(fā)現(xiàn)，向培養(yǎng)基添加洗凈劑LS等表面活性劑，可以不用玉米、黃豆粉等糧食原料，而只用麩皮、米糠、玉米漿等農(nóng)副產(chǎn)物為原料，來(lái)生產(chǎn)蛋白酶，取得通風(fēng)量要比原來(lái)降低到1/3，產(chǎn)酶量增加60%的效果，為低成本工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，與溫州味精廠協(xié)作進(jìn)行生產(chǎn)性擴(kuò)大試驗(yàn)，在半年多時(shí)間內(nèi)，克服了種種困難終于試生產(chǎn)成功，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的真菌中性蛋白酶終于上市供應(yīng)全國(guó)有關(guān)行業(yè)的應(yīng)用，促進(jìn)了許多行業(yè)的發(fā)展，此成果受到浙江省領(lǐng)導(dǎo)的重視，并被列為浙省重第二重大科研成果，當(dāng)時(shí)籌款40多萬(wàn)元，新建溫州發(fā)酵化工廠進(jìn)行生產(chǎn)。

在溫州味精廠進(jìn)行中試是異常艱辛和難以想象的，這個(gè)廠是由粉絲作坊等組合而成，工人文化程度低，更缺乏微生物方面的知識(shí)，要其掌握先進(jìn)的深層發(fā)酵技術(shù)難度可想而知，該廠廠長(zhǎng)王峰同志是位復(fù)員軍人，在他領(lǐng)導(dǎo)下辦起了味精廠，我們廠所密切合作在試制過(guò)程中好不容易解決了染菌，又遇到原料缺貨，如過(guò)濾用的助濾劑硅藻土缺貨，我們只得自己動(dòng)手做，將建筑用硅藻土在食堂廚房鐵鍋中焙炒去除有機(jī)質(zhì)，在大于200 ℃的高溫下鏟刀柄都烤焦了，工人眉毛也烤黃了，就這樣制出了合用的助濾劑。又如鹽析用硫銨也因供應(yīng)不繼得自己解決，我們只得從鹽析廢母液濃縮后回收才解決問(wèn)題，像這樣的問(wèn)題層出不窮，我們就是在這樣條件下來(lái)完成試驗(yàn)任務(wù)的。1968年11月，在浙江省科委主持下對(duì)棲土曲霉3.942蛋白酶進(jìn)行了全國(guó)鑒定，浙江日?qǐng)?bào)作為重大新聞大幅報(bào)導(dǎo)。不久上海輕工業(yè)局也籌建了佳樂(lè)酶制劑廠，令我們前去協(xié)助生產(chǎn)該蛋白酶。

2 酸性蛋白酶的研究

毛皮是北方人冬季御寒的主要用品，毛皮生產(chǎn)的傳統(tǒng)制法是米硝法，將米面抹在毛皮上任其自然發(fā)酵，使皮膠元的間隙蛋白質(zhì)分解而變得松軟，但這種工藝制成的皮有異臭，毛皮不可水洗，含灰量高，穿著笨重，生產(chǎn)耗費(fèi)糧食，為此新疆建設(shè)兵團(tuán)要求我所對(duì)采用酶法軟化毛皮進(jìn)行研究，以應(yīng)中國(guó)人民解放軍總后部提出“減輕戰(zhàn)士裝備重量一公斤”的號(hào)召，我們先同上海皮張廠協(xié)作，試用胰酶和棲土曲霉蛋白酶來(lái)軟化毛皮取得成功，成品毛皮輕薄軟暖，還可水洗，又大大節(jié)約糧食，此技術(shù)受到了第二輕工業(yè)部、外貿(mào)部和全國(guó)合作總社的重視，成立了三部聯(lián)合領(lǐng)導(dǎo)小組來(lái)推廣酶法軟化毛皮新技術(shù)，1974年專(zhuān)門(mén)邀請(qǐng)我們?nèi)埣铱谌珖?guó)軟化毛皮新工藝學(xué)習(xí)班講授蛋白酶有關(guān)知識(shí)(胡學(xué)智、王恩榮同去)，因酸性蛋白酶可在酸性環(huán)境下發(fā)揮作用，無(wú)中性蛋白酶之缺點(diǎn)，細(xì)菌不易繁殖，不會(huì)引起爛皮、掉毛等事故，且軟化浴可反復(fù)使用多次，節(jié)省成本故更為適用。

為此我們集中精力開(kāi)展了酸性蛋白酶的研究，那時(shí)尚沒(méi)有可以省工省時(shí)的優(yōu)選法，更沒(méi)有現(xiàn)代的高通量篩選技術(shù)，要取得成功全靠成百上千甚至上萬(wàn)個(gè)搖瓶培養(yǎng)收集測(cè)定數(shù)據(jù)才行，工作量之大現(xiàn)在是難以想象的。

我們對(duì)100多株黑曲霉，每個(gè)菌株采用固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)同時(shí)并舉的方法，液體培養(yǎng)每個(gè)菌株同時(shí)用四種配方培養(yǎng)基來(lái)篩選菌種以避免優(yōu)良菌株之漏篩。最后篩選得到黑曲霉3.350，宇佐美曲霉白色變株(即537的母株)以及玉桂色曲霉No.81的酶活性最強(qiáng)。

我們對(duì)黑曲霉3.350培養(yǎng)條件優(yōu)化以后乃同上海酒精廠合作進(jìn)行發(fā)酵罐放大試驗(yàn)，為便于查找發(fā)酵罐發(fā)酵發(fā)生的異常情況，我們套用了在谷氨酸發(fā)酵研究中摸索出來(lái)的一套罐對(duì)照試驗(yàn)方法，將實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基和發(fā)酵罐滅菌后的培養(yǎng)基分裝三角瓶，接種試管菌種后搖瓶培養(yǎng)來(lái)觀察發(fā)酵罐培養(yǎng)基有何問(wèn)題，將實(shí)驗(yàn)室配制之培養(yǎng)基分別接種試管菌種和種子罐種子作搖瓶試驗(yàn)以檢驗(yàn)種子罐培養(yǎng)有無(wú)問(wèn)題等，試驗(yàn)一式三份，故每上罐一次搖瓶對(duì)照樣品就一大堆，工作量很大。

在5 000 L發(fā)酵罐發(fā)酵時(shí)，一連幾個(gè)月發(fā)酵很不正常時(shí)或不長(zhǎng)菌，時(shí)或產(chǎn)酶很少，查遍菌種、原料和罐對(duì)照搖瓶都無(wú)問(wèn)題，令人費(fèi)解，也遭到了廠方質(zhì)疑，懷疑菌種、懷疑科研不成熟等等，壓力很大。作者只得從發(fā)酵罐去找原因，乃親自鉆入發(fā)酵罐檢查，發(fā)現(xiàn)在紫銅冷卻盤(pán)管有一層藍(lán)綠色污垢，憑著大學(xué)中學(xué)到的定性化學(xué)分析知識(shí)，意識(shí)到這是一種銅氨復(fù)離子，是由培養(yǎng)基中銨離子與銅結(jié)合生成的絡(luò)合物，因?yàn)槲覀兯门囵B(yǎng)基中含大量的氯化銨作無(wú)機(jī)氮源，而銨離子對(duì)銅有腐蝕性，乃生成了銅氨復(fù)離子從而對(duì)菌體造成毒害，于是將此判斷反映給廠領(lǐng)導(dǎo)，建議將銅管換熱器改成不銹鋼的，起初廠方不信，我們只得將銅管銅片按發(fā)酵罐中冷卻管與發(fā)酵液接觸面積之比例剪取小塊銅片放入搖瓶培養(yǎng)基中作搖瓶試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。結(jié)果表明，加有銅片的一組菌體生長(zhǎng)不佳產(chǎn)酶甚少，而對(duì)照組不加銅片的一切正常，這一措施終于獲得了廠領(lǐng)導(dǎo)的信服，花4千多元錢(qián)改換了冷卻管，再次投料試驗(yàn)，一舉成功，一連試驗(yàn)45罐平均產(chǎn)酶活性2 500 U/mL，最高3 000 U/mL，圓滿(mǎn)完成了酸性蛋白酶的試生產(chǎn)任務(wù)，我國(guó)酸性蛋白酶終于工業(yè)生產(chǎn)成功，填補(bǔ)了我國(guó)酶制劑工業(yè)的一個(gè)空白。

此外我們又同上海醫(yī)藥工業(yè)研究院協(xié)作，將酸性蛋白酶鹽析粗品離交脫鹽純化冷凍干燥后作成腸溶片，在上海十家醫(yī)院(包括中山醫(yī)院、第六人民醫(yī)院、第二人民醫(yī)院、龍華醫(yī)院、曙光醫(yī)院、市勞動(dòng)衛(wèi)生研究所等中西醫(yī)院及四家地段醫(yī)院)的支持下，歷時(shí)二年多對(duì)700多名內(nèi)外科患者進(jìn)行臨床試驗(yàn)[9]，結(jié)果表明酸性蛋白酶對(duì)于呼吸道疾病、外科血栓性靜脈炎、術(shù)后血腫水腫粘連等均有良好效果，用于慢性支氣管炎的有效率達(dá)80%，且兼具平喘效果，藥用酸性蛋白酶受到醫(yī)院和患者的歡迎，但因不久國(guó)家有文件規(guī)定非醫(yī)藥企業(yè)不得從事藥品生產(chǎn)，藥用酸性蛋白酶終于未能正式生產(chǎn)造福患者，殊為可惜。

近年由不同菌株生產(chǎn)的酸性蛋白酶已被廣泛用作飼料添加劑，用于糧食酒精發(fā)酵、酒、醬、醋等發(fā)酵制品的生產(chǎn)，對(duì)提高飼養(yǎng)效率，減少動(dòng)物疾病，提高發(fā)酵品得率與品質(zhì)發(fā)揮了明顯的經(jīng)濟(jì)效益。

3 關(guān)于蛋白酶活性劑測(cè)定出現(xiàn)的問(wèn)題

蛋白酶是一類(lèi)復(fù)雜的酶，專(zhuān)一性極強(qiáng)，對(duì)其切開(kāi)的肽鍵氨基酸組成有著嚴(yán)格的選擇性，水解肽鍵的能力還受到肽鍵長(zhǎng)度、切開(kāi)點(diǎn)前后肽鍵氨基酸組成的影響，不同來(lái)源蛋白酶水解同一蛋白質(zhì)的能力不同，同一蛋白酶水解不同蛋白質(zhì)的能力也不同，故采用不同的蛋白酶測(cè)定方法，能反映蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)底物的水解行為。上世紀(jì)50年代我國(guó)還沒(méi)有酶制劑工業(yè)，也沒(méi)有測(cè)定蛋白酶的標(biāo)準(zhǔn)方法，其時(shí)國(guó)外已發(fā)展了不少測(cè)定蛋白酶活性的方法，例如明膠液化法、明膠粘度下降法、明膠甲醛滴定法、酪蛋白血紅蛋白沉淀法、275 nm紫外分光光度法、Folin試劑顯色法，以及Gross-Fold法、DHT酪蛋白測(cè)定法等等。由于Folin試劑顯色法靈敏度高，即使微弱的蛋白酶活性也可以顯示出來(lái)，因此我們?cè)趪?guó)內(nèi)首先選用了Folin試劑比色法來(lái)測(cè)定蛋白酶活性，那時(shí)光電比色計(jì)已算是很高級(jí)的儀器了，而Folin試劑得自己來(lái)合成，此法在國(guó)內(nèi)推廣后，經(jīng)中國(guó)發(fā)酵協(xié)會(huì)驗(yàn)證后，申報(bào)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局列為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法。其實(shí)此法還存在一些問(wèn)題尚待解決。我們?cè)谒嵝缘鞍酌秆芯繒r(shí)，用Folin法測(cè)定金屬離子對(duì)酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)向酶液添加終濃度2×10-3mol/L的銅、錳、鋁等金屬離子時(shí)，可明顯提高酸性蛋白酶的活性，尤其這三者同時(shí)添加時(shí)，酶活性可增強(qiáng)三倍(表1)，因而得出Cu2+、Mn2+、Al3+可激活酸性蛋白酶活性的結(jié)論，并發(fā)表在《微生物學(xué)報(bào)》[1976,16(3):220-223]和作者參與編寫(xiě)的《酶制劑工業(yè)》、《酶制劑生產(chǎn)技術(shù)》等書(shū)中，40多年來(lái)被廣泛引用，但在2005年筆者等利用宇佐美曲霉酸性蛋白酶試制高效酒精發(fā)酵劑時(shí)，試圖向酶粉添加銅離子等來(lái)增強(qiáng)蛋白酶活性，同一樣品同時(shí)用紫外分光光度法測(cè)定法與Folin法測(cè)定酶活性，卻發(fā)現(xiàn)用紫外分光光度法測(cè)定280 nm吸光值的方法，Cu2+、Mn2+等對(duì)酶活性非但無(wú)激活作用反而有輕度的抑制。雖然Folin法測(cè)定對(duì)這些金屬離子對(duì)酶活性仍呈明顯的促進(jìn)作用(表2)。令人百思不解，查遍有關(guān)文獻(xiàn)終于在日本酶學(xué)泰斗赤崛四郎1950年所著巨著《酵素研究法》第二卷蛋白酶一章中得到啟發(fā)，他說(shuō)“Folin法與紫外分光法相比，靈敏度高，尤其加有銅的Folin試劑靈敏度更高，適合于微量蛋白酶的檢測(cè)，與之相反，紫外分光275 nm吸收法，不受加銅的影響”，可見(jiàn)銅離子的存在可引起酪氨酸與Folin試劑的藍(lán)色反應(yīng)增強(qiáng)而造成銅離子可增強(qiáng)蛋白酶活性之假像，以致造成誤導(dǎo)，為此將此發(fā)現(xiàn)發(fā)表在《江蘇調(diào)味劑食品雜志》，但未受到有關(guān)人員的注意，陸續(xù)有人在其文章中仍談到銅等金屬離子對(duì)酸性蛋白酶呈激活作用。令人費(fèi)解的是我們?cè)?967年進(jìn)行棲土曲霉蛋白酶研究時(shí)，同樣是用Folin法來(lái)測(cè)定金屬元素對(duì)酶活性的影響的，卻并未發(fā)現(xiàn)銅離子對(duì)中性蛋白酶的激活作用(表3)，唯一的區(qū)別是酸性蛋白酶是在酸性環(huán)境下作保溫處理，

表1 金屬離子對(duì)酸性蛋白酶活性的激活作用*

表2 金屬離子對(duì)宇佐美曲霉酸性蛋白酶活性影響*

表3 金屬離子對(duì)棲土曲霉中性蛋白酶的影響*

而中性蛋白酶是在中性環(huán)境下處理的，除此無(wú)法解釋?zhuān)@恐怕還有待于今后學(xué)者去探明了。

4 后記

上世紀(jì)60年代我國(guó)科技界為貫徹科研14條，通過(guò)批判“知識(shí)私有”、“技術(shù)壟斷”、“名利思想”等資產(chǎn)階級(jí)思想，提倡共產(chǎn)主義風(fēng)格，我們與大家一樣，對(duì)科研上的有所發(fā)現(xiàn)、有所心得以及一些know how都會(huì)無(wú)保留地與同行共享，甚至連原始記錄也會(huì)公開(kāi)給前來(lái)學(xué)習(xí)取經(jīng)的同志參閱，唯恐對(duì)方不掌握。技術(shù)交流會(huì)、技術(shù)鑒定會(huì)、主辦方都能把技術(shù)無(wú)保留地與大家交流，使與會(huì)者深為受益，當(dāng)時(shí)的研究論文報(bào)告都能翔實(shí)記敘研究過(guò)程的細(xì)節(jié)，可以照搬重復(fù)出來(lái)，因之國(guó)內(nèi)有些科研內(nèi)容時(shí)有雷同而水平也相仿。

在谷氨酸發(fā)酵研究中，北大錢(qián)存柔教授將其分離得到的谷氨酸桿菌29906無(wú)私地供給我們研究，中科院上海生化所的周光宇先生將其國(guó)外學(xué)習(xí)帶回的栓壓法測(cè)定谷氨酸和紙層析、電泳等新技術(shù)無(wú)私傳授給我們，上海植物生理研究所焦瑞身先生將其從國(guó)外帶回的黑曲霉337與330提供給我們研究，使液體曲制酒精得以迅速完成，上海醫(yī)藥工業(yè)研究院童村院長(zhǎng)將其抗生素發(fā)酵摸索得出的一套染菌防治措施無(wú)保留地傳授給我們，解決了谷氨酸發(fā)酵罐經(jīng)常染菌的問(wèn)題，在葡萄糖異構(gòu)酶的研究中，江蘇化工研究所將其鏈霉菌生產(chǎn)異構(gòu)酶的資料、固定化技術(shù)連同菌種毫無(wú)保留提供我們作進(jìn)一步的研究，同樣我們也將自己的研究心得無(wú)保留地奉獻(xiàn)給前來(lái)取經(jīng)學(xué)習(xí)的同行，例如蘑菇菌絲體深層培養(yǎng)技術(shù)，國(guó)內(nèi)外首創(chuàng)的用蘑菇深層培養(yǎng)菌絲體作農(nóng)業(yè)栽培種的方法，以及經(jīng)過(guò)千百次試驗(yàn)成功的糖蜜原料發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的研究都無(wú)保留地傳授給前來(lái)學(xué)習(xí)的同行，使這些技術(shù)得以在外地推廣應(yīng)用。在谷氨酸發(fā)酵研究中，周光宇先生提供的利用谷氨酸脫羧酶栓壓法測(cè)定谷氨酸的方法在全國(guó)味精行業(yè)獲得推廣，但因老方法制取的脫羧酶活性不高反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，影響工作效率，我們通過(guò)研究，向培養(yǎng)基添加含有脫羧酶輔酶維生素B6的酵母，使大腸桿菌脫羧酶總活性增加了5倍，反應(yīng)時(shí)間由24 min縮短到6 min～7 min，大大提高了工作效率和正確性，我們主動(dòng)將這一研究結(jié)果油印后寄發(fā)全國(guó)味精廠和科研大專(zhuān)院校交流共享，像這樣將研究成果無(wú)保留給兄弟單位參考的事在當(dāng)年是很平常的事。當(dāng)時(shí)，發(fā)表研究論文，為避免名利思想之嫌大多以單位名義發(fā)表，若合作方是工廠企業(yè)，則署名時(shí)將工廠企業(yè)列在前，而科研設(shè)計(jì)單位列于后。80年代改革開(kāi)放以來(lái)，為了促進(jìn)競(jìng)爭(zhēng)，實(shí)現(xiàn)了專(zhuān)利制，加強(qiáng)了保密觀念，技術(shù)成果實(shí)行有償轉(zhuǎn)讓?zhuān)欢螘r(shí)間甚至有些技術(shù)交流咨詢(xún)也實(shí)行起按時(shí)計(jì)費(fèi)等等，一些研究報(bào)告、技術(shù)鑒定資料、論文和技術(shù)總結(jié)也語(yǔ)焉不詳，只起到自我推介廣告的作用。因此，如何做到既保密又實(shí)用而且有學(xué)術(shù)交流價(jià)值，是值得研究的。