試論HPLC法測定不同品種雞蛋中的膽固醇含量

馬丹霞

借助于HPLC法對不同種類雞蛋里面的膽固醇含量進行有效測定，本文以濃度為2.0mol/L的KOH-乙醇溶液開展皂化，石油醚萃取，以C18反相色譜柱進行分離，HPLC法測定，對操作環節進行了簡化，減少了試劑的總體使用量，并且進一步節省了探究時間，整個探究過程只需要1.5小時。本方法用來測定實際樣品，效果明顯。

膽固醇是生物膜以及神經髓鞘的核心構成部分，而且是膽汁酸以及類固醇激素的前體。可身體內部太多的膽固醇會進一步引起高血脂等疾病，于是，人們需要對日常飲食中膽固醇的攝入量進行控制。雞蛋是人體進一步攝入膽固醇的核心渠道。HPLC法對蛋黃里面膽固醇的具體含量進行測定，操作快速、方便，在短期內就能夠完成探究，能夠滿足快速探究以及大批量樣品測定的雙重需要。

材料與方法

儀器與試劑。Agilentl100化學工作站，紫外檢測器G1314A，Agilent 1100高效液相色譜儀，異丙醇、乙腈、甲醇、石油醚、膽固醇、氯化鈉、氫氧化鉀以及無水乙醇。制定濃度為1.0mg/ml的膽固醇溶液：將100mg膽固醇放在100ml的容量瓶里面，以少量甲醇進行溶解后，用甲醇稀到刻度。

樣品處理以及測定。將稱好的0.20g雞蛋放在50ml的具塞比色管里面，添加5.0ml濃度為2.0moL/L的KOH一乙醇液，進行充分振蕩，放在65℃的水浴里面實施皂化30分鐘后取出，利用流動的水實施冷卻，添加2.0ml的飽和氯化鈉溶液后，然后添加20.0ml的石油醚，旋渦混合均勻后開展離心分離，將10.0ml的上清液放進10ml刻度的比色管中，通入氮氣進行吹干，再采取1.0ml甲醇對殘渣進行有效溶解，過0.45μm濾膜之后，將10.0μl有效添加到液相色譜儀，根據以上色譜條件有效實施測定，外標法定量。

結果

線性范圍以及方法的最低檢出限。按照探究步驟對膽固醇的標準溶液進行配制，在本實驗的背景下，膽固醇的濃度從0至1.0mg/ml范圍，標準曲線進一步呈現優良的線性關系。檢出限低至0.005mg/ml，如果取樣1.0g，雞蛋里面膽固醇的最低檢出濃度是0.5mg/100g。

準確度以及精密度試驗。在0.20g的雞蛋樣品里面依次添加0.15、0.30以及0.45mg的膽固醇標準，操作方法與樣品一致，獲得的回收率如表1所示。由表1能夠得知，本實驗的測定結果是真實的，其平均回收率是92.1%，各種濃度的測定結果的誤差都不超過5%。

雞蛋測定。借助于HPLC法對購買的10份雞蛋樣品有效實施了測定，結果膽固醇含量依次在（180至545）mg/100g之間。

結論

第一，現如今，在借助于比色法以及HPLC法進一步測定雞蛋中膽固醇含量的過程中，一般需要對樣品實施皂化操作以及若干次提取，以減少蛋黃里面其他成分帶來的影響，操作復雜且耗時，一般需要很多個小時才可以測定完一個樣品，不適合快速檢測大批量的樣品。

第二，實驗結果進一步表明，不同種類雞蛋的膽固醇含量有所區別，于是對不同種類雞蛋的膽固醇含量的相關參考值進行測定，有利于充分指導當地城市居民的合理膳食。