GBA在復發性阿弗他口炎中的表達特點

董霞 許興路 彭靜 賈浩楠 張辰蔚 王麗茹

復發性阿弗他口炎是臨床常見的口腔疾病，且其在口腔黏膜疾病的發病率中占據首位，其誘因較多，很多情況都會引起該疾病，如精神緊張、情緒不佳、消化不良、感冒等好發于唇、頰、舌緣等，在黏膜的任何部位均能出現[1-3]。發病年齡一般在10～30歲，女性較多，一年四季均能發生，具有周期性、復發性及自限性等特點。復發性阿弗他口炎屬于結締組織病中的系統性血管炎，為變異性血管炎，可累及大、中、小靜脈和動脈，除皮膚黏膜外可累及消化道、神經系統、心血管、呼吸道、泌尿系統，嚴重者可導致死亡[4]。對于反復口腔潰瘍而高度懷疑復發性阿弗他口炎的患者因不滿足診斷標準而無法明確診斷，并且該病沒有特異的病理學診斷標準和實驗室特異抗體，大部分患者從出現臨床癥狀到明確診斷3～4年，因此該病的診斷比較團難，從而影響早期的治療，部分患者病情反復導致出現嚴重的內臟損害或不可逆的視力障礙，因此特異的實驗室抗體檢測對于疾病的早期診斷意義重大。筆者總結國內外近些年的相關研究，發現抗小腸杯狀細胞抗體（antibody to goblet epithelium of small intestine，GBA）可用于該病的早期診斷，現總結研究具體情況并匯報。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2018年2月—2019年2月本醫院收治的復發性阿弗他口炎患者102例作為研究組，其中男30例，女72例，年齡10～30歲，平均年齡（20±10）歲。同時選擇健康志愿者102例作為對照組，其中男32例，女70例，年齡在10～29歲，平均年齡（20±9）歲。本研究經研究對象同意，且經醫院倫理委員會批準。

1.2 診斷標準

目前的診斷標準采用的是1990年白塞病的國際分類標準[5]（敏感性為81.2%，特異性為95.9%），有下述5項中至少3項陽性者：（1）反復口腔潰瘍；（2）反復外陰潰瘍；（3）皮膚病變；（4）眼病變；（5）針刺試驗陽性。

1.3 方法

采用ELISA方法測定GBA-IgG型和GBA-IgA型。具體措施如下：（1）將加樣板放置于泡沫板上，在加樣板的所有反應區位置均滴加稀釋后的血清，劑量為25 U，避免出現氣泡。（2）將載片放置于加樣板凹槽中，保證其沒有生物薄片的一面朝上，其反應會馬上開始。需保證所有樣品均接觸生物玻片，同時樣品與樣品不能接觸。放在室溫中溫育半個小時，即18～25℃。（3）將磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）吐溫緩沖液放置于燒杯中，對玻片進行流水快速沖洗，然后馬上將其放置到磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液中進行浸泡超過5 min，操作旋轉搖床開始震蕩處理。（4）于加樣板反應區位置滴加熒光二抗，共計20 mL，操作連續加樣器將全部熒光二抗滴加完，可在前一個加樣板進行溫育期間將熒光二抗滴加到下一個加樣板上，以此縮短操作時間。（5）將載片從洗杯中取出，使用吸水紙將載片邊緣及背面的水分擦干，保證該操作于5 s中完成，然后馬上將其放置到加樣板凹槽中，不可對反應區間隙進行擦拭，以免基質遭到破壞。在確定液滴和生物玻片良好接觸后可對下一個玻片進行上述操作，在室溫中進行0.5 h溫育，期間注意載片被陽光直射。（6）將磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液放置于燒杯中，對玻片進行流水快速沖洗，然后馬上將其放置到磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液中進行浸泡超過5 min，操作旋轉搖床開始震蕩處理。（7）將蓋玻片放置于泡沫板凹槽內，于蓋玻片上滴加甘油/磷酸緩沖鹽溶液，一個反應區的滴加劑量為10 μL左右。將載片從洗杯中取出，使用吸水紙將載片邊緣及背面的水分擦干，不可對反應區間隙進行擦拭，以免基質遭到破壞。將載片放置于蓋薄片中，保證其沒有生物玻片的一面朝上，馬上進行查看，同時對蓋玻片進行調整，使其嵌入進載片凹槽。（8）使用顯微鏡對熒光模型進行觀察。

1.4 觀察指標與判定標準

測定GBA-IgG型和GBA-IgA型陽性率。

1.5 統計學方法

數據對比以SPSS 23.0統計學軟件處理，（±s）為計量資料的表示形式，通過t檢驗；率（%）為計數資料的表示形式，通過χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

研究組102例復發性阿弗他口炎患者中GBA-IgG型陽性患者45例（44.12%），GBA-IgA型陽性56例（54.90%）；對照組102例健康志愿者中GBA-IgG型陽性7例（6.86%），GBA-IgA型陽性8例（7.84%）。研究組GBA-IgG型與GBAIgA型陽性率均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 GBA-IgG型和GBA-IgA型陽性情況比較[例（%）]

3 討論

貝赫切特病（Behcet's disease，BD）又名白塞病，其屬于慢性疾病，其臨床特征為皮膚損害、外陰潰瘍、口腔潰瘍、眼炎等，且會對患者的多個系統造成影響[6-7]。本病有較強的地區分布：又稱絲綢之路病，因為在絲綢之路上的國家多發，東亞、中東、地中海發病率高，我國北方高于南方。筆者總結國內外近些年關于白塞病的相關研究[8-9]，發現黏膜相關抗體在國外已經用于白塞病的早期診斷的報告，相關研究證實其在白塞病的診斷中具有特異性，可用于白塞病的診斷。黏膜相關抗體包括抗釀酒酵母抗體（anti-saccharomces cerevisiae antibody，ASCA）、GBA、抗中性粒細胞胞漿抗體（antineutrophil cytoplasmic antibody，p-ANCA）。ASCA最早發現于炎性腸病患者的血清中，后來在臨床中用于黏膜相關疾病的診斷，尤其在炎性腸病、原發性硬化性膽管炎等疾病的診治中已開展，省內、國內尚無相關文獻報道ASCA在貝赫切特病中的應用[10]。在臨床上開展黏膜相關抗體應用于貝赫切特病的診治應用部分患者的臨床診斷，得到了陽性結果，提示該抗體在我國白塞病患者具有診斷意義。因此對于臨床標準尚不符合白塞病的患者，ASCA抗體陽性有利于復發性阿氟他口炎的早期診斷，從而指導臨床治療。

GBA被認為是潰瘍性結腸炎的特異性抗體，在前期的臨床研究中發現在復發性阿氟他口炎、結節性紅斑、白塞病、自身免疫性肝炎等多種自身免性疾病中GBA均有表達，可見GBA-IgG型和GBA-IgA型陽性，關于兩種類型的抗體表達在相關疾病中的意義需進一步研究[11-13]。

本研究表明，研究組中GBA-IgG型陽性45例，GBA-IgA型陽性56例，陽性率分別為44.12%、54.90%。對照組中GBA-IgG型陽性7例，GBA-IgA型陽性8例，陽性率分別為6.86%、7.84%。研究組GBA-IgG型、GBA-IgA型陽性率均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，抗小腸杯狀細胞抗體可用復發性阿弗他口炎患者的早期診斷，尤其是對于存在黏膜損傷的患者更加有意義。本研究的樣本量不足，在擴大樣本量后尚需進一步驗證。