一例應(yīng)用腺苷核苷類似物GS-441524對貓傳染性腹膜炎進行抗病毒治療分析

王麗新吳豐劉海超胡格陳大鵬

(1.北京農(nóng)學(xué)院動物科技學(xué)院，北京 102200；2.北京天空之城寵物醫(yī)院，北京 100071)

貓傳染性腹膜炎(FIP)是一種致命疾病，發(fā)生于世界各地的家庭飼養(yǎng)及野生動物。FIP是由貓冠狀病毒(FCoV)特異性位點突變而來的，貓冠狀病毒(FCoV)發(fā)生在2個不同的病理類型，可以區(qū)分其生物學(xué)行為，但不是其形態(tài)。一些作者[1,3,4]對這2種病理類型使用不同的名稱，盡管二者都屬于同一病毒物種。貓腸冠狀病毒(FECV)在多貓環(huán)境中非常普遍，并且具有高度的傳染性——幾乎100%的貓從脫落的貓的糞便中接觸到FECV就會受到感染。然而感染大多是無癥狀的，或只引起輕度和短暫的腹瀉[2]。相反，貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)不是通過糞便—口腔途徑傳染的，而是由一小部分感染貓的無毒性FECV突變而產(chǎn)生的，然后導(dǎo)致致命疾病貓傳染性腹膜炎(FIP)[5-7]。臨床癥狀有厭食癥、嗜睡、體重減輕、發(fā)熱等，眼部和神經(jīng)體征，如步態(tài)異常或精神異常，都是非特異性[2,8,9]。目前尚不清楚哪些確切的基因攜帶導(dǎo)致FIPV發(fā)展的突變。由于使用新藥物治療貓的FIP有希望的結(jié)果已經(jīng)發(fā)表，GS-441524是能夠直接阻斷病毒的復(fù)制，來達到治療目的。目前這一類藥物在市場上未商品化，須向國外進口，國內(nèi)對于這個藥物的研究暫時空白，據(jù)調(diào)查，在臨床上此藥物價格昂貴，難以大量應(yīng)用在臨床中，主人在沒有寵物保險下很難付得起費用。對此，只向此藥物的臨床結(jié)果做研究，為以后研究GS-441524藥物在臨床試驗中奠定基礎(chǔ)，也希望能夠使費用降低，普遍應(yīng)用于臨床，挽救貓傳染性腹膜炎的疾病。

1 案例情況

喬巴，美國短毛貓，2個月，雄性，未絕育，主人從貓舍購買到家中飼養(yǎng)28d，家中無其它寵物，臨床檢查食欲不振、嗜睡、眼睛游離，被毛色澤光亮，脊柱明顯，體溫39.5℃，體重1.3kg，腹部觸診波動感明顯，腹圍增大，疑似貓傳染性腹膜炎，進行實驗室檢查。

2 實驗室檢測結(jié)果與診斷

2.1 血常規(guī)及血液生化

血常規(guī)結(jié)果見表1；血液生化指標(biāo)結(jié)果見表2。由表1可見，喬巴淋巴細(xì)胞數(shù)參考值范圍，血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積明顯低于參考值，該結(jié)果有貧血的現(xiàn)象，可能跟最近食欲不佳、伴有病毒感染導(dǎo)致。由表2可見，總蛋白(TP)偏高，白球比A/G=0.5<0.8，這一指標(biāo)有效判定患有FIP風(fēng)險較高，進行了實驗室RT-PCR檢測。

表1 血常規(guī)檢查報告

表2 血液生化檢查報告

2.2 腹部B超超聲波檢查與腹水穿刺

腹部超聲顯示(見圖1)，腹部回聲增強，腹水大量，未見腹腔腸系淋巴結(jié)明顯增大；膀胱內(nèi)未見明顯異常影像；左腎與右腎表面不光滑，皮質(zhì)回聲不均，髓質(zhì)環(huán)征，腎周有不均質(zhì)回聲結(jié)構(gòu)。均未見腎盂積液；肝臟回聲均勻，膽囊內(nèi)未見明顯異常回聲；脾臟回質(zhì)均勻。

圖1 腹部超聲影像

腹水穿刺出來的液體呈黃綠色粘稠狀(見圖2)，進行細(xì)胞學(xué)檢查，呈大量單核巨噬細(xì)胞，無其它細(xì)胞，李凡他試驗結(jié)果呈陽性(見圖3)。

圖2 腹水 圖3 李凡他試驗

2.3 RT-PCR檢測

RT-PCR檢測(見圖4、圖5)出含有貓冠狀病毒，經(jīng)過序列對比，未發(fā)現(xiàn)明顯存在的特異性位點突變，患有貓傳染性腹膜炎(FIP)風(fēng)險一般。

圖4 貓冠狀病毒

圖5 貓傳染性腹膜

綜合以上結(jié)果診斷，A/G比小于0.8，對診斷貓傳染性腹膜炎有很大指導(dǎo)作用，B超檢測含有腹水，淋巴結(jié)腫大，RT-PCR檢測出貓冠狀病毒。

3 治療方案

3.1 用藥療程

由于喬巴生化檢測總蛋白低且患有貧血癥狀，先進行輸液療法，主人每天帶過來輸液，在進行輸液4d后，喬巴精神好轉(zhuǎn)，食欲增強，4d后結(jié)束輸液，并在此期間使用核苷類似物GS-441制劑，按4mg·kg-1給藥，每天持續(xù)給藥，連續(xù)12周，前4周每周檢查1次，后續(xù)癥狀減緩改為每月檢查1次，觀察用藥療效。(無明顯異常)在給藥期間患貓(除了前4d靜脈滴注)均在家中注射藥物。

3.2 用藥療效對比

3.2.1 患貓體重變化

從連續(xù)給藥之后，前4周每周稱重1次，后續(xù)癥狀減緩改為每月稱重，表3為采集的體重變化，由于為幼貓，時間長些才能夠看出來體重的增加，從就診的1.3kg增至2.8kg，并且腹部明顯縮小，有緊實感。

表3 患貓用藥后每周、月平均體重的變化

3.2.2 患貓每次復(fù)查血液的血常規(guī)及生化指標(biāo)

連續(xù)給藥之后，每次血液血常規(guī)復(fù)查的結(jié)果，由表4可見，白細(xì)胞總數(shù)在逐漸下降恢復(fù)至正常范圍內(nèi)，中性粒細(xì)胞數(shù)也有所下降，到第3周后明顯趨于正常水平，平均血紅蛋白濃度持續(xù)增高，紅細(xì)胞在用藥之后恢復(fù)到正常水平。血液中的細(xì)胞數(shù)在連續(xù)給藥12周趨于正常范圍。

表4 患貓用藥后每周、月血常規(guī)檢查報告

續(xù)表 患貓用藥后每周、月血常規(guī)檢查報告

連續(xù)給藥后，每次復(fù)查血液生化的結(jié)果，由表5可見，主要可見白球比逐漸從0.5上升至正常水平，其它指標(biāo)均在正常范圍。

表5 患貓用藥后每周、月血液生化檢查報告

3.2.3 患貓每次復(fù)查B超檢查結(jié)果

從表6結(jié)果可見，患貓腹水逐漸減少，腹膜回聲逐漸恢復(fù)正常，淋巴結(jié)腫大恢復(fù)正常。

表6 患貓每月B超檢查結(jié)果

4 討論

貓患有傳染性腹膜炎時，常有2種類型，干性和濕性，患有干性傳染性腹膜炎的貓在診斷上較濕性困難，實驗室檢測只能采取患貓的糞便進行PCR檢測，但這樣的檢測結(jié)果準(zhǔn)確率只有5%可能性，確診干性FIP的貓，臨床特征表現(xiàn)為前期暴瘦，食欲并不減退，嗜睡，但體重仍然沒有增加，腹腔沒有積液，血液檢查會出現(xiàn)高球蛋白癥，淋巴數(shù)和粒細(xì)胞數(shù)減少，可能存在氮質(zhì)血癥(在沒有積液的貓中更常見)或肝臟酶活性增加[10]。患有濕性FIP的貓，主要特征腹圍增大，食欲不振，嗜睡，血液常伴有貧血，白球比<0.8，低白蛋白血癥(在有積液的貓中更常見)、高膽紅素血癥(在有積液的貓中更常見)，以及根據(jù)器官受累情況，RT-PCR顯示陽性，李凡他實驗顯示陽性[11]。在本次病例中，患貓沒有表現(xiàn)出高膽紅素癥，肝臟指標(biāo)正常，其它指標(biāo)均表現(xiàn)出患有濕性腹膜炎的風(fēng)險，確診為貓傳染性腹膜炎。

在之前很長一段時間對于這種疾病并無任何藥物可以緩解并救治，文獻中通常為如何確診、如何檢查，對于治療無任何效果，近2a出現(xiàn)2種藥物，3C類蛋白酶抑制劑GC376和核苷類似物GS-441524在治療貓傳染性腹膜炎中有顯著療效[12-14]。國外學(xué)者研究利用GS-441524藥物治療貓傳染性腹膜炎的顯示有神經(jīng)癥狀的療效[15]，對4例神經(jīng)FIP的研究采用5mg·kg-1的劑量治療，治療時間和隨后的劑量根據(jù)臨床反應(yīng)增加。劑量為5mg·kg-1，SC，1次/d，持續(xù)12～14周，足以治療2例受影響較輕的神經(jīng)FIP病例。但在臨床受影響最嚴(yán)重的貓中，以5mg·kg-1劑量重復(fù)療程只會改善臨床癥狀，一旦停止治療，臨床癥狀就會迅速消退。這種治療失敗促使病例4的劑量從5mg·kg-1逐步上升到10mg·kg-1。體外50%有效濃度(EC50)的GS-441524，以防止病毒細(xì)胞病變的作用，在0.8μM，完全抑制病毒復(fù)制在10μM和部分抑制在1μM[15]。可見GS-441524這種藥物臨床上還是可以應(yīng)用，這將在治療FIP中邁出重大一步。

本病例在這12周里，只有在前4d進行營養(yǎng)液補充輸液，除維持肝臟指標(biāo)的口服藥物之外未使用其它任何生物制劑，只注射了GS-441524，在第2周就明顯控制住貧血，腹水減少，各項指標(biāo)趨于正常，平日飲食也是高蛋白食物，此次效果明顯可見，但用藥時長以及停藥之后如何護理避免復(fù)發(fā)還有待進一步研究。