高爾基體蛋白73與肝癌診療相關研究進展

曾 灝 翚 纓 張林芝

廣西壯族自治區(qū)貴港市人民醫(yī)院檢驗科，廣西貴港 537100

[關鍵字]肝癌；GP73；診療；研究進展

血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）的出現(xiàn)，使得AFP一度被認為是肝癌診斷的首選腫瘤標志物，但其在早期診斷中存在一定的局限性，有部分肝癌患者其血清AFP呈現(xiàn)出較高的假陰性率（可高達40%）或者低值，在明確確診為肝癌后卻多為肝癌晚期，此時已經(jīng)錯過了最有效的治療時間，限制了AFP在肝癌診斷中的普遍應用[1]。因此，國內外臨床方面一直致力于尋求一種能早期發(fā)現(xiàn)肝細胞肝癌更有效的腫瘤標志物。過去幾十年，臨床研究從單個蛋白到組合蛋白，再到蛋白組學及腫瘤自身抗體等，其研究結果均未能盡如人意。

1 GP73的發(fā)現(xiàn)

直到2000年，研究成人巨細胞肝炎的美國學者Kladney等[2]在構建患者的肝臟cDNA文庫時，應用正常肝細胞cDNA文庫的32P標記探針進行差異顯示雜交，從中發(fā)現(xiàn)在成人巨大細胞肝炎患者的肝臟內，其cDNA可與新城疫病毒發(fā)生反應，后利用5’cDNA快速擴增技術和雙向測序，得出該cDNA為編碼相對分子量為73 kD糖蛋白的基因，即高爾基體蛋 白73（golgi transmembrane glycoprotein73，GP73）基因。經(jīng)進一步研究發(fā)現(xiàn)，GP73基因位于9號染色體，全長3042 bp，根據(jù)其基因序列推測其編碼的蛋白質分子約為4.5×104個，但由于GP73基因在體內經(jīng)過大量糖基化處理后，含有較多的酸性氨基酸，使其實際分子量只有73 kD。在一般情況下，GP73能通過多種上皮細胞表現(xiàn)出來，肺部是通過纖毛柱狀上皮細胞將GP73表達出來，腎臟是通過遠曲小管和集合管上皮細胞表達GP73，前列腺是通過前列腺上皮細胞表達，而肝臟則是由膽管上皮細胞表達，但特殊的是，正常的肝細胞是不表達或者表達量極少的。

2 GP73在肝癌診斷中的臨床價值

Kladney等[3]在研究慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝硬化以及正常肝組織GP73表達時發(fā)現(xiàn)，肝病患者肝組織中GP73表達量與正常受檢組相比較高，且是正常受檢組的70倍左右，而對各組肝病患者進行GP73表達量之間對比時，發(fā)現(xiàn)無明顯差異。在2004年，Maitra等[4]研究發(fā)現(xiàn)，可以在血清中檢測到GP73，并認為GP73可以作為肝臟疾病的標志物。在2005年，英國Block[5]在對美洲旱獺HCC血清GP73含量進行檢測時發(fā)現(xiàn)，GP73水平與HCC之間關系密切；在同年，Marerero等[6]對352名患者進行研究的時候，發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清GP73含量與肝硬化患者相比明顯升高，并以10個相對單位為臨界值，GP73診斷HCC的敏感性和特異性分別為69%和75%，其診斷效果明顯優(yōu)于AFP。Schwegler等[7]的研究結果與Marerero研究結果相似，但其結果顯示GP73診斷肝癌的敏感性和特異性都比Marerero的研究結果高，由此認為，GP73可作為早期診斷肝癌的腫瘤標志物之一。

近幾年來，我國有較多的學者對GP73在肝癌診斷中的應用進行了研究。崔琦等[8]通過對血清中的AFP、GP73、血清鐵蛋白（serum ferritin，SF）及異常凝血酶原（des-gamma-carboxy prothrombin，DCP）單獨和聯(lián)合檢測來探討這四個標志物在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價值，研究結果顯示，四個標志物聯(lián)合檢測均優(yōu)于各指標單獨檢測，可提高原發(fā)性肝癌的陽性診斷率，對原發(fā)性肝癌的早期診斷具有重要的臨床價值。國世星[9]通過回顧性分析研究AFP、DCP、甲胎蛋白異質體（alpha-fetoprotein variant-L3，AFP-L3）和GP73在早期原發(fā)性肝癌組、肝硬化組、肝炎組、健康對照組中的血清濃度水平時，也證實了GP73聯(lián)合檢測在早期原發(fā)性肝癌診斷中具有診斷意義，同時還發(fā)現(xiàn)其可用于評估肝臟受損程度。此外，研究表明，在對原發(fā)性肝癌的早期診斷中，血清GP73與SF、AFP聯(lián)合應用能夠提高診斷敏感性[10]。

黃風玲等[11]對肝癌患者的肝癌組織及配對癌旁組織進行研究，發(fā)現(xiàn)GP73在肝癌組織中多呈陽性表達，在不同分化程度、不同TNM分期、有無血管侵犯患者的肝癌組織中，GP73表達水平差異均有統(tǒng)計學意義，揭示其可能參與肝癌的發(fā)生與發(fā)展。劉麗萍等[12]通過細胞轉染、基因敲除等實驗也發(fā)現(xiàn)GP73的表達可能與肝腫瘤侵襲、增殖和轉移有關。Liu等[13]通過對29例健康受檢者和69例經(jīng)導管動脈化療栓塞術（TACE）治療的肝癌患者進行血清GP73的ELISA檢測與對比，結果顯示，GP73可作為肝癌標志物來評價經(jīng)導管動脈化療栓塞治療后的預后情況。趙睿等[13]與Ai等[14]的研究結果相似，同時發(fā)現(xiàn)血清GP73可以作為原發(fā)性肝癌患者TACE術療效判斷的指標，尤其是在AFP較低或AFP陰性時，GP73作為療效的評價指標比AFP更有優(yōu)勢。唐輝等[15]研究發(fā)現(xiàn)GP73聯(lián)合診斷除了對原發(fā)性肝癌具有一定診斷價值外，同時也對TACE術后預后具有評估價值。

GP73臨床價值的研究，也存在爭議。MAO等[16]的研究顯示，肝細胞癌患者血清中GP73水平遠高于無肝硬化或者慢性肝病患者，但與肝硬化患者相比，差異無統(tǒng)計學意義，提示血清GP73檢測無法鑒別肝硬化和肝癌，因此血清GP73對肝癌的診斷無價值，同時血清GP73用作HCC診斷的ROC曲線下面積過小，診斷效能不足。區(qū)別于血清AFP水平在術后的立即明顯下降，血清GP73水平卻在肝癌組織切除后濃度基本一致，進一步提示血清GP73水平與肝癌是否存在沒有相關性[17]，并且血清GP73水平與腫瘤細胞的GP73表達水平無相關性[18]。肝癌臨床相關資料的分析結果也證實了腫瘤大小、分化程度、TNM分期等臨床特征與血清GP73水平無關。故不推薦血清GP73用于原發(fā)性肝癌的實驗室診斷。與此相反的是，血清GP73在肝纖維化、肝硬化的診斷及預后評估中，表現(xiàn)出值得預期的診斷價值。隨著肝纖維化程度加深以及肝硬化逐步進展，血清GP73水平也隨之提高，從而將進展期肝纖維化、早期肝硬化與慢性肝病區(qū)分開來，提示其對肝硬化的診斷有較高的價值。

綜上，GP73在肝癌的臨床診斷價值還有待通過進一步大量臨床數(shù)據(jù)地驗證和研究，方可下定論，但血清GP73在肝纖維化、肝硬化的臨床診斷價值已得到拓展。

3 GP73與肝癌的臨床治療

3.1 GP73與索拉菲尼

索拉菲尼是一種新型多靶向性的治療腫瘤的口服藥物，用于治療對標準療法無響應或不能耐受的胃腸道基質腫瘤和轉移性腎細胞癌，能選擇性地靶向某些蛋白的受體。近幾年來，臨床方面對索拉菲尼的研究主要集中在腫瘤缺氧微環(huán)境、炎癥纖維化、轉運蛋白以及索拉菲尼的藥物動力學等方面，但索拉菲尼對肝癌治療中的耐藥性尚且無明確的結論。楊歡等[19]通過研究發(fā)現(xiàn)GP73在肝癌索拉菲尼耐藥細胞株中呈高表達，HepG2細胞通過表達GP73能夠降低細胞對索拉菲尼的敏感性，耐藥細胞株中降低GP73之后能夠升高細胞對索拉菲尼的敏感性，從而得到GP73的高表達能夠降低HepG2細胞對索拉菲尼的敏感性的結論。楊穎等[20]的研究證實了楊歡的結論，在進一步的研究中，還發(fā)現(xiàn)耐藥細胞中，GP73、PI3K及p-Akt蛋白表達增加，從而得知PI3K/Akt信號通路的激活以及GP73表達上調，促進上皮細胞-間充質轉化可能是肝癌細胞對索拉非尼的耐藥機制。因此對GP73做進一步深入研究，能為肝癌靶向藥物的耐藥研究提供更多的思路。

3.2 GP73與雷帕霉素

雷帕霉素是新型大環(huán)內酯的抗排斥藥物，同時也是一種哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的特異性抑制劑，能通過不同的細胞因子受體阻斷信號的傳導，阻斷T淋巴細胞及其他細胞由G1期至S期的進程，從而發(fā)揮免疫抑制效應[21]。雷帕霉素是目前世界上最新的強效免疫抑制劑，臨床上用于器官移植的抗排斥反應和自身免疫性疾病的治療，在抗腫瘤治療中也具有明顯療效。但目前，臨床上對于雷帕霉素在肝癌臨床治療中機制尚且不太明確，Wang等[22]通過對細胞水平與動物水平的相關研究發(fā)現(xiàn)，mTORC1通路能促使GP73上調，并進一步促進肝癌細胞增殖、遷移、侵襲，而在應用雷帕霉素之后，GP73表達水平能夠大幅度降低，從而對肝癌的發(fā)生及發(fā)展形成抑制作用，由此可表明，mTOR抑制劑雷帕霉素或將成為肝癌治療的新靶點。

4 結語

自2000年GP73被首次發(fā)現(xiàn)以來，就被認為是最具有潛力的肝癌腫瘤標志物，關于GP73的研究一直沒有停止。對GP73血清學的檢查技術，已由最初手工的酶聯(lián)免疫檢測技術，發(fā)展到現(xiàn)在自動化的化學發(fā)光檢測技術，其檢測的可靠性得到進一步地提升，所以越來越多的實驗室將GP73檢測納入其檢測范圍。眾所周知，GP73在肝癌診斷中的臨床效能還需要更多的臨床數(shù)據(jù)來支持才能得出結論，特別是其對肝癌的早期診斷價值。而GP73檢測的臨床應用，不應該局限于肝癌，在其他疾病方面的應用，也應該是廣大醫(yī)學工作者關注方向，如GP73對肝纖維化和肝硬化的診斷效能，在此研究方向，已經(jīng)有一定的研究數(shù)據(jù)來支持。還要特別注意的是，目前檢測的腫瘤標志物只是相關抗原，不僅在某些腫瘤人群中有所表達，在某些非腫瘤患者中也會存在有一定的假陽性率，這會使得單項指標檢測的診斷準確率較低，因此，肝癌的檢測不應該局限于GP73單項檢測，聯(lián)合其他血清標志物的檢測，也是一個重要的發(fā)展方向，這樣能提高診斷的準確率。

目前針對GP73與肝癌臨床治療的相關研究數(shù)據(jù)量較少，主要停留在基礎研究方面，仍需大數(shù)據(jù)支持才能應用于臨床。但GP73與治療相關的潛力已得到展現(xiàn)，如上述未提到的GP73中和抗體，其在動物水平上的應用，能夠抑制肝臟腫瘤的生長，從而延長了動物的存活期。相信以后會有更多研究發(fā)現(xiàn)GP73在治療方面的價值。

綜上所述，隨著更多、更深層次研究地進行，GP73的臨床價值和治療作用會得到更廣闊的發(fā)展和體現(xiàn)。