兒童急性白血病中整合素αvβ3 的表達及預后分析

高暉

（大連市兒童醫院，遼寧 大連）

0 引言

急性白血病是一種起源于造血干細胞的惡性克隆性疾病。與成人相比，兒童患急性髓性白血病的預后較差，易發生髓外浸潤，嚴重影響患兒的臨床療效及預后[1,2]。整合素（Integrins）為細胞黏附分子家族的重要成員，由α 和β亞基以非共價鍵結合而形成的跨膜異源二聚體糖蛋白。主要參與介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質（extracellular matrix, ECM）之間的相互粘附，并介導細胞與ECM 之間的雙向信號傳導，對細胞的粘附、增殖、分化、轉移、凋亡、代謝起著重要的調控作用[3,4]。整合素αv 與β3 在實體腫瘤細胞膜表面形成αvβ3 異源二聚體，介導腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移。有關研究報道，在白血病細胞中整合素β 能夠與整合素連接激酶相互作用，激活下游PI3K/Akt/ GSK3β信號通路，促進β-catenin 的活化，導致細胞的活力增加和過度增殖[5]，因此有必要探索和研究整合素αvβ3 在兒童急性髓系白血病細胞表面的表達，為兒童急性髓系白血病的診斷和治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 基本資料

隨機從本院2017 年8 月至2019 年7 月收治的急性髓系白血病患者中選取50 例，其中男29 例，女21 例，平均年齡5.62 歲，另外選擇同時住院治療的急性淋巴細胞白血病50 例，其中男32 例，女18 例，平均年齡 8.29 歲。兩組患者一般資料無統計學差異（P＞0.05），具有可比性。研究對象均為自由參與。

1.2 方法

采集實驗對象的骨髓標本，利用Ficoll 密度梯度離心的方法分離骨髓單個核細胞，制成單細胞懸液[6-8]。按照以下配色方案在單細胞懸液中加入熒光標記的流式抗 體。 第1 管： FITC-ISO, PE-ISO, APC-ISO；第2 管：FITC-CD45, PE-ISO；第3 管：PE-Integrin αvβ3, FITCISO；第4 管：7-AAD, FITC-ISO, PE-ISO，第5 管：FITCCD45, PE-ISO, 7-AAD, APC-CD34；第6 管：FITC-CD45,PE-Integrin αvβ3, 7-AAD, APC-CD34。室溫、避光染色15min，用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）洗去未結合的抗體，上流式細胞儀cytoflex（貝克曼庫爾特）檢測整合素αvβ3 的表達。

1.3 觀察指標

本研究的觀察指標包括：（1）兩組樣本中的原始細胞比例；（2）兩組樣本中的整合素αvβ3+的原始細胞比例[9,10]。

1.4 統計學方法

使用SPSS20.0 進行數據處理，計量資料用平均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05 表示差異具有統計學意義[11]。

2 結果

2.1 兩組患者CD34+原始細胞比例對比

急性髓系白血病組CD34+ 原始細胞比例為36.05±28.68%，急性淋巴細胞白血病組CD34+原始細胞比例為0.15±0.06%。急性髓系白血病組的CD34+原始細胞比例顯著高于急性淋巴細胞白血病組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 兩組患者整合素αvβ3+、CD34+細胞比例對比

急性髓系白血病組的整合素αvβ3+、CD34+細胞比例為3.21±1.32%，急性淋巴白血病組的整合素αvβ3+、CD34+細胞比例為0.07±0.02%。急性髓系白血病組的αvβ3+、CD34+細胞比例顯著高于急性淋巴白血病組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

急性白血病是造血系統的原始細胞克隆性惡性增殖性疾病，是一個具有高度異質性的疾病群，其中急性髓系白血病可以由正常髓系細胞分化發育過程中不同階段的造血祖細胞惡性變轉化[4]，其在兒童白血病中的發病率約占25%。隨著化療、骨髓移植、維持療法和危險分層的優化，兒童急性髓系白血病的治療效果得到了明顯改善，長期生存患者達到70%，但仍然需要進步和改善。兒童急性髓系白血病的臨床以感染、出血、貧血和髓外組織器官浸潤為主要表現。急性髓系白血病的髓外浸潤發生在各個亞型，常常是首發的表現，主要侵犯皮膚、口腔、肝、脾、淋巴結、骨、中樞神經系統和眼等組織和器官。白血病細胞的髓外浸潤是白血病細胞與浸潤部位微環境相互作用的結果。

Integrins 是一組廣泛分布于細胞表面的跨膜糖蛋白受體，由α 和β 亞基以非共價鍵結合而形成。迄今已發現18 種不同的α 亞單位和8 種β 亞單位，組成至少24 種的整合素。整合素作為細胞黏附分子家族的重要成員，通過與細胞外基質的相互作用促進細胞的增殖和轉移等生物學行為。αvβ3 是由αv 亞基（CD51，150kD）和β3 亞基（CD61，105kD）形成的跨膜異源二聚體糖蛋白。腫瘤細胞通過細胞膜表面的整合素αvβ3 與基質中的配體分子基序精-甘-天冬（arg-gly-asp，RGD）相互結合介導腫瘤的增殖、侵襲和轉移。此次研究發現整合素αvβ3 在兒童急性髓系白血病中顯著高表達，同時與白血病干細胞表面標志CD34 存在共表達，提示整合素αvβ3 可能在白血病的發生發展中發揮關鍵作用。目前的研究報道，整合素αvβ3 單克隆抗體LM609 能夠抑制細胞與細胞外基質的粘附[12]，因此靶向抑制整合素αvβ3 與細胞外基質的相互作用為阻斷兒童急性髓系白血病的髓外浸潤提供了可能。

綜上所述，此次研究為未來臨床評估整合素αvβ3 的表達在兒童白血病中的早期診斷、危險度分層，以及選擇與優化臨床治療方案提供了重要依據，為闡明兒童急性髓系白血病的發生機制奠定理論基礎，為兒童急性髓系白血病的治療提供潛在的治療新靶標，同時可進一步探索整合素αvβ3 的表達與兒童急性髓系白血病預后的相關性。