HPVE6/E7 mRNA 檢測對宮頸病變患者的篩查價值

張曉鳳

茂名市人民醫院，廣東 茂名525000

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，好發于30～60 歲的中老年女性。陰道觸碰性流血、陰道排白色或血色液體及有腥臭味道是宮頸癌常見的臨床特征［1］。宮頸癌是較嚴重的惡性腫瘤之一，該病有一定潛伏期，大多數患者并未出現不適及其他癥狀，在日常的婦科檢查中難以發現或確認。因此，宮頸癌的發現時間在治療該疾病中占有關鍵作用。宮頸癌的主要惡化原因是人類乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HR-HPV）持續感染，致癌潛力依賴于E6/E7 癌基因的大量表達［2］。宮頸癌患者的HPV 感染原因多種多樣，最重要的感染途徑為性行為。口服避孕藥的濫用以及吸煙等都會引起惡變，同時也是高危型HPV 感染不斷擴大的最重要的原因［3］。從HPV 感染到發生癌前病變，進而發展到宮頸癌，一般需5～10 年，在這過程中可通過篩查，及早發現宮頸癌前病變，否則會錯過最佳治療時機。高危型HPV中E6/E7 基因編碼的原癌蛋白是導致子宮頸上皮癌變的重要因子，對細胞生長刺激最為重要，可引起宮頸上皮細胞的癌變，促進其惡化［4］。本研究探討HPVE6/E7mRNA 檢測對宮頸病變患者的篩查價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2018 年12 月于我院就診的宮頸病變患者168 例，年齡22～60 歲，平均年齡（36.48±6.78）歲，常見臨床癥狀均為接觸性出血、陰道異常出血、白帶異常及下腹隱痛等。

1.2 納入排除標準 納入標準：①至少有3 年以上性生活史；②均符合宮頸病變的入選標準［5］；③資料齊全，意識正常，能夠配合治療；④簽署知情同意書。排除標準：①具有子宮或宮頸切除術史的患者；②相關資料有缺失的患者；③調查期間無故退出者。

1.3 檢測方法

1.3.1 宮頸液基細胞學（TCT）檢查。樣本采集前3 天禁止性生活和藥品使用。采集時，擦除宮頸分泌物，將毛刷探入宮頸內順時針旋轉4～6 周，充分刷取宮頸管和宮頸口鱗一柱狀上皮交界處的脫落細胞并取出，將刷頭浸入細胞處理試劑中，4℃保存。制備成細胞懸液，再制成細胞薄片，乙醇固定、染色，顯微鏡下觀察分析宮頸細胞形態。TCT 結果診斷采用TBS 分級標準。見表1。

表1 TBS 分級標準

1.3.2 HPVE6/E7 mRNA 檢測。按1.3.1 方法取得宮頸脫落細胞，常規配置標本緩沖液、陽性對照液及處理后的細胞懸液，將三者混合制成反應液，加入96 孔檢測板中，孵育時間為3.5h。嚴格按高危HPVE6/E7 mRNA 試劑盒使用說明書進行操作，最后放入自動冷光儀讀板檢測結果，通過信號擴增法進行HPVE6/E7 mRNA 定量檢測。結果診斷標準：HPVE6/E7 mRNA 表達水平＞1，則診斷為HPVE6/E7 mRNA 呈陽性；反之，則診斷為HPVE6/E7 mRNA 呈陰性。

1.4 診斷標準 對TCT 檢查和HPVE6/E7 mRNA 檢測陽性者，在陰道鏡下取宮頸活組織病理學檢查，具體標準見表2。

表2 宮頸活組織病理學檢查診斷標準

1.5 觀察指標 分析TCT 檢測、HPVE6/E7 mRNA 檢測與金標準（病理學檢查）的差異性；TCT 與HPVE6/E7 mRNA 檢測對宮頸病變患者診斷價值；HPVE6/E7 mRNA 檢測陽性率與宮頸病變程度相關性。

1.6 統計學分析 采用SPSS22.0 軟件分析數據，計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPVE6/E7mRNA、TCT 檢測結果與組織病理學檢測結果比較 HPVE6/E7mRNA 檢測陽性率高于TCT檢測（P＜0.05）。見表3。

2.2 TCT 與HPVE6/E7mRNA 檢測對宮頸病變患者診斷價值分析 TCT 檢測診斷的靈敏度（73.18%）、陽性預測值（75.15%）、陰性預測值（70.28%）低于HPVE6/E7mRNA 檢測診斷為靈敏度（81.26%）、陽性預測值（79.84%）、陰性預測值（76.47%），TCT 檢測診斷的特異性（73.52%）高于HPVE6/E7mRNA 檢測診斷特異性（64.08%），但組間無顯著差異（P＞0.05）。見表4。

表3 HPVE6/E7mRNA、TCT 檢測結果與組織病理學檢測結果比較［例（%）］

表4 TCT 與HPVE6/E7mRNA 檢測的診斷價值比較（%）

2.3 HPVE6/E7mRNA 檢測陽性率與宮頸病變程度相關性 HPVE6/E7mRNA 檢測陽性率與宮頸病變有顯著關系（r=0.581，P=0.005），即HPVE6/E7 檢測陽性率越高宮頸病變越嚴重，其中，宮頸癌患者的HPVE6/E7mRNA 檢測陽性率為百分之百。見圖1。

圖1 HPVE6/E7mRNA 檢測陽性率與宮頸病變程度相關性

3 討論

宮頸癌是婦科惡性腫瘤中致病源十分明確的疾病之一，HPV16 感染是宮頸癌最常見的HR-HPV 類型，HPV18 感染率居第二位［6］。宮頸癌嚴重影響者女性的身心健康，此病在患者體內潛伏期較長，未出現不適或其他癥狀的患者半數以上，只有進行宮頸癌篩查才可能被發現或確診。因此，宮頸癌篩查至關重要。

本研究顯示，HPVE6/E7 mRNA 檢測與TCT 檢測陽性數比較差異顯著，HPVE6/E7 mRNA 檢測陽性率與宮頸病變有顯著關系，即HPVE6/E7 mRNA 陽性率越高宮頸病變越嚴重，其中，宮頸癌患者的HPVE6/E7 mRN 陽性率為百分之百，表明HPVE6/E7 mRNA 陽性率隨著宮頸病變級別進展呈逐步上升趨勢，其高表達可促進宮頸癌的發生、發展，是宮頸癌進展預測的指標。高危型HPVE6/E7 基因編碼的原癌蛋白是導致子宮頸上皮癌變的重要因子，E6 蛋白通過E6-AP 能特異性結合p53 蛋白形成復合物，促使p53 蛋白快速降解，導致細胞周期失控，其效應等同于p53 突變［7］。E7蛋白和pRb 有高親和性，使E2F 和pRb 復合物解離，G1 期進入S期所需基因如c-myc、DNA 聚合酶a 等得以轉錄，使細胞周期失控而發生永生化，發生癌變。當機體發生HPV 感染時，一般情況下機體具有自我防御功能可將HPV 清除掉，其中部分患者由于身體原因不能將HPV 清除，導致HPV 在體內處于持久性高水平狀態，病毒基因與人類基因整合，導致HPVE6/E7 復制轉錄活躍而致癌變［8］。有文獻顯示，HPVE6/E7 mRNA 高表達是宮頸癌重度惡化的主要原因，與宮頸癌的分期、分化等發展過程呈正相關［9］。E6/E7 mRNA 是HPV 基因表達的直接產物，是宮頸病變開始和進展的必要條件；E6/E7 mRNA 檢測是提示宮頸致癌基因的活動度，反映宮頸癌變的風險度。報道表明，HPVE6/E7 mRNA是宮頸細胞癌變的重要因素，故檢測HPVE6/E7 片段的表達較檢測病毒更精準、更直接［10］。研究顯示，HPVE6/E7 mRNA 檢測診斷的靈敏度、陽性預測值、陰性預測值均高于TCT，特異性與TCT 差異不大［11］。表明HPVE6/E7 mRNA 表達能很好地反映了宮頸病變的嚴重程度，作為宮頸癌篩查具有較高的診斷價值。對于宮頸癌而言，早期控制與預防最好的方法就是篩查。若在前驅病變階段發現并采取適當的治療，其治療效果明顯優于中、晚期。由此可見，廣泛采用HPVE6/E7 mRNA 檢測，及早對患者病情進行確診并及時治療，對該病的防治具有十分重要的意義［12］。研究顯示，TCT與HPVE6/E7 mRNA 檢測均具有明顯效果，能夠較準確地對宮頸病變患者做出分型，有利于后續的進一步診斷和治療，但兩種診斷方法的特異性、靈敏度存在一定差異，兩種檢測方法各有特點，后續將研究考慮兩種檢測方法聯合對宮頸病變的患者實行進一步檢測［13］。

綜上所述，HPVE6/E7 mRNA 檢測對宮頸病變患者的篩查具有重大意義，能夠通過HPVE6/E7 mRNA陽性表達來判斷宮頸病變嚴重程度，進而采取相應治療措施，更好地改善預后，值得臨床推廣應用。