虎杖苷聯(lián)合甘草汁對(duì)大鼠血清性激素作用及與多囊卵巢綜合征的研究

崔亞斌，賈云濤，鄔朋格，慕瑩瑩，李樹(shù)軍，崔琳，丁玉

（黃河科技學(xué)院，河南 鄭州 450000）

0 引言

多囊卵巢綜合征（PCOS）是一種常見(jiàn)的婦科疾病，主要表現(xiàn)為高雄性激素、排卵障礙或月經(jīng)紊亂和卵巢多囊性改變[1]。多囊卵巢的治療方式多樣，有調(diào)整患者生活方式，使用促排卵藥物CC（使用不宜超過(guò)6個(gè)周期）、使用胰島素增敏劑、使用促性腺激素、進(jìn)行手術(shù)治療和輔助生殖技術(shù)等[2]，但上述治療方法都有較大的局限性和較多的不良反應(yīng)，因此中醫(yī)藥對(duì)多囊卵巢的治療也成為了學(xué)者們研究討論的一個(gè)熱門話題[3]。本項(xiàng)目采用來(lái)曲唑建立PCOS大鼠模型來(lái)探究虎杖苷聯(lián)合甘草汁對(duì)雌性大鼠血清性激素作用及與PCOS的治療。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3周齡雌性SD大鼠SPF級(jí)50只，體重60-80g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證編號(hào)（DW2019110615），存放于黃河科技學(xué)院動(dòng)物房，光照10～12h/d，溫度10-18℃，相對(duì)濕度40%-60%，自由飲水及攝食。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品

大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒（貨號(hào)：CD30237，批號(hào)：12/2019）、大鼠天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒（貨號(hào)：CD30806，批號(hào)：12/2019）、大鼠睪酮（T）試劑盒（貨號(hào)：CD30387，批號(hào)：12/2019）、大鼠黃體生成素（LH）試劑盒（貨號(hào)：CD30447，批號(hào)：12/2019）、大鼠促卵泡激素（FSH）試劑盒（貨號(hào)：CD30274，批號(hào)：12/2019），均武漢純度生物科技有限公司。虎杖苷、甘草購(gòu)自河南張仲景大藥房股份有限公司，來(lái)曲唑片（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），二甲雙胍（山東旭晨化工科技有限公司），羧甲基纖維素鈉(CMC)（河南萬(wàn)邦實(shí)業(yè)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備

電子天平（XJ320M,上海天美儀器）、恒溫箱（UV-1902,上海奧析科學(xué)儀器有限公司）、離心機(jī)（GT16-3A，北京北利公司）、酶標(biāo)儀（SC-5A，江蘇天翎儀器有限公司）、三諾安穩(wěn)免調(diào)碼血糖儀(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：YZB/湘0043-2012，版本號(hào)：QY-PYVPU)、三諾安穩(wěn)免調(diào)碼血糖試條(批號(hào)820625)、三諾一次性使用末梢采血針(生產(chǎn)批號(hào)：180908)、移液槍、一次性使用負(fù)壓采血容器(山東省成武縣醫(yī)用制品廠，生產(chǎn)批號(hào)：20181102)、震蕩搖床、多功能酶標(biāo)儀（SpectraMaxM3，美谷分子）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠建模及分組方法

空白組10只以普通飼料喂養(yǎng)，自由飲食。實(shí)驗(yàn)組40只大鼠每日灌服來(lái)曲唑（1mg/kg）+1%羧甲基纖維素鈉（2mL/kg）[4]，自由攝食飲水，觀察并記錄各組大鼠的基本狀況。4周后，將實(shí)驗(yàn)組分為5組：模型組、甘草組、虎杖苷組、聯(lián)合組及二甲雙胍組，每組8只。空白組抽取2只，實(shí)驗(yàn)組五組各抽取1只，進(jìn)行建模檢測(cè)。每周對(duì)所有實(shí)驗(yàn)大鼠測(cè)量一次體重和身長(zhǎng)。

2.2 給藥方法

二甲雙胍組給予二甲雙胍片劑，研磨成粉，現(xiàn)配現(xiàn)用，劑量為4g/kg/d，甘草汁組1.5g/kg/d,虎杖苷組1.5g/kg/d，虎杖苷聯(lián)合甘草汁組1.5g/kg/d，灌胃干預(yù)3周[5]。

2.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

在上述條件下將各組實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)至第8周，禁食24h，測(cè)量體重和身長(zhǎng)，計(jì)算BMI。使用10%水合氯醛（2～3mL/100g）腹腔注射麻醉,取腹主動(dòng)脈血，分離血清，放置在-5℃冰箱保存；按照試劑盒說(shuō)明測(cè)其血清中的LH、FSH、T、ALT、AST含量，對(duì)比分析結(jié)果數(shù)據(jù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件，定量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)來(lái)表示，多組間比較采用單因素方差分析，若方差齊則采用Bonferroni法，若方差不齊則采用Tamhane's T2法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況的觀察

空白組大鼠體型均勻，皮毛有光澤且整齊，活躍好動(dòng)，喜啃食，進(jìn)食量較大；而模型組大鼠體型肥胖，毛發(fā)旺盛，嗜睡少動(dòng)，精神狀態(tài)不佳，不喜啃食，進(jìn)食量亦較小；經(jīng)灌胃治療3周后，聯(lián)合組大鼠一般情況明顯改善，二甲雙胍組的大鼠較其他組大鼠反抗明顯。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中虎杖苷組大鼠死亡1只，模型組大鼠死亡1只。空白組有2只存在明顯個(gè)體差異，不納入結(jié)果統(tǒng)計(jì)。

3.2 各組對(duì)PCOS模型大鼠血清FSH、LH、T、LH/FSH的影響

和空白組比較，模型組大鼠血清的LH、T的含量極顯著增加（P＜0.01），LH/FSH比值極顯著增加（P＜0.01），F(xiàn)SH的含量極顯著減少（P＜0.01）；和模型組比較，甘草組和虎杖苷組大鼠血清的LH、T的含量顯著減少（P＜0.05），LH/FSH比值顯著減少（P＜0.05），F(xiàn)SH的含量顯著增加（P＜0.05），聯(lián)合組與二甲雙胍組大鼠血清的LH、T的含量極顯著減少（P＜0.01），LH/FSH比值極顯著減少（P＜0.01），F(xiàn)SH的含量極顯著增加（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 各組對(duì)PCOS模型大鼠血清FSH、LH、T、LH/FSH的影響

3.3 各組大鼠血清ALT及AST水平比較

和空白組比較，模型組大鼠的AST、ALT含量極顯著增加（P＜0.01），二甲雙胍組大鼠的AST、ALT含量極顯著增加（P＜0.01），聯(lián)合組大鼠血清的AST、ALT含量顯著增加（P＜0.05），甘草組和虎杖苷組大鼠血清的AST、ALT含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，二甲雙胍組大鼠血清的AST、ALT含量極顯著增加（P＜0.01），聯(lián)合組大鼠ALT含量顯著增加（P＜0.05），AST含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清ALT及AST水平比較

3.4 各組大鼠肝組織BMI指數(shù)的比較

和空白組比較，模型組大鼠的BMI指數(shù)顯著增加（P＜0.05）,虎杖苷組大鼠的BMI指數(shù)顯著增加（P＜0.05），聯(lián)合組、甘草組、二甲雙胍組大鼠的BMI指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，甘草組、虎杖苷組、聯(lián)合組、二甲雙胍組大鼠的BMI指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠BMI指數(shù)比較

3.5 各組大鼠OGTT結(jié)果比較

與空白組比較，模型組和各組給藥組血糖較高，胰島β細(xì)胞功能降低；與模型組比較，各組給藥組血糖較低，胰島β細(xì)胞功能有一定程度改善，且二甲雙胍組和聯(lián)合組優(yōu)于甘草組和虎杖苷組,見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠OGTT結(jié)果比較

3.6 各組大鼠卵巢形態(tài)觀察

與空白組比較，模型組外觀蒼白，體積大，可見(jiàn)較多囊狀擴(kuò)張卵泡。聯(lián)合組和二甲雙胍組大鼠卵巢體積較模型組小，肉眼觀察有差異，顏色淡紅，可見(jiàn)成熟卵泡，甘草組和虎杖苷組大鼠卵巢體積較模型組體積差異不大。各組大鼠卵巢體積與實(shí)驗(yàn)時(shí)間、個(gè)體差異有關(guān)。

4 討論

多囊卵巢對(duì)患者的生育和健康有很大影響。PCOS患者體內(nèi)高水平的LH促進(jìn)雄激素的合成，致雄激素的水平升高，高雄激素血癥常表現(xiàn)為多毛、痤瘡、脂溢性皮炎和雄激素性脫發(fā)[6]。多囊卵巢的發(fā)病機(jī)制暫不明確，大量臨床研究證明中藥治療PCOS的有效性[7]，但在收集、分析中藥治療PCOS的文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)關(guān)于中藥治療PCOS的具體作用機(jī)制及相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑尚不十分清楚，僅僅小部分研究從單味中藥的藥理出發(fā)闡述中藥治療PCOS的機(jī)理。相關(guān)資料顯示虎杖苷和甘草分別對(duì)于多囊卵巢的治療有一定積極作用。甘草可以減小卵巢質(zhì)量，一定程度上的恢復(fù)卵巢組織形態(tài)，降低血清中促黃體生成素和睪酮水平、升高雌二醇水平、促進(jìn)卵巢內(nèi)雄激素轉(zhuǎn)化向雌激素[8-10]。虎杖苷可以降低小鼠胰島素水平，緩解胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)；降低血清睪酮水平，減輕血清高雄激素狀態(tài)；同時(shí)可以促進(jìn)卵泡發(fā)育和成熟，減少初級(jí)卵泡，增加高級(jí)卵泡數(shù)量，同時(shí)抑制卵泡發(fā)生閉鎖[11]。本實(shí)驗(yàn)探究虎杖苷聯(lián)合甘草汁對(duì)大鼠血清性激素作用及與多囊卵巢綜合征的關(guān)系，為以后臨床用藥開(kāi)創(chuàng)新思路。

經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)，各給藥組對(duì)PCOS大鼠相關(guān)指標(biāo)影響程度不同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組比較，甘草組和虎杖苷組大鼠血清的LH、T的含量顯著減少（P＜0.05），LH/FSH比值顯著減少（P＜0.05），F(xiàn)SH的含量顯著增加（P＜0.05），聯(lián)合組大鼠血清的LH、T的含量極顯著減少（P＜0.01），LH/FSH比值極顯著減少（P＜0.01），F(xiàn)SH的含量極顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組大鼠血清的AST、ALT含量極顯著增加（P＜0.01），聯(lián)合組大鼠ALT含量顯著增加（P＜0.05），AST含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，甘草組、虎杖苷組、聯(lián)合組、二甲雙胍組大鼠的BMI指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，各組給藥組血糖較低，胰島β細(xì)胞功能有一定程度改善，且二甲雙胍組和聯(lián)合組優(yōu)于單一給藥。

本實(shí)驗(yàn)表明，虎杖苷聯(lián)合甘草汁具有降低血清性激素水平的作用，并能提高葡萄糖耐受程度，改善PCOS大鼠相關(guān)癥狀，臨床治療可作為參考。