乳粉中泛酸檢測(cè)

方芳

摘 要：目的：探索乳粉中泛酸的檢測(cè)。方法：應(yīng)用高效液相色譜法和微生物試劑盒法，分析嬰幼兒配方羊乳粉及其原料的檢測(cè)數(shù)據(jù)。結(jié)果：利用高效液相色譜法檢測(cè)配方羊奶粉時(shí)會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)不穩(wěn)定的現(xiàn)象，且該現(xiàn)象的發(fā)生與原料具有一定的關(guān)聯(lián)性;微生物試劑盒法檢測(cè)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。結(jié)論：微生物法更適用于檢測(cè)配方羊奶粉。

關(guān)鍵詞：泛酸;嬰幼兒配方乳粉;高效液相色譜法;微生物法

Detection of Pantothenic Acid in Milk Powder

FANG fang

（AusNuotore Nutrition Co.， Ltd.， Jiujiang 332000， China）

Abstract： Objective： To explore the determination of pantothenic acid in milk powder. Methods： The determination data of infant formula sheep milk powder and its raw materials were analyzed by HPLC and microbe kit method .Results： When using HPLC to detect the formula sheep milk powder， there will be a phenomenon of instability， and the occurrence of this phenomenon and the raw materials have a certain correlation; Microbial Kit Method Data Stability. Conclusions： Microbial method is more suitable for the detection of sheep milk powder formula.

Keywords： pantothenic acid; infant formula; high performance liquid chromatography; microbial method

泛酸也稱(chēng)作維生素B5、遍多酸，是人體必需的13種維生素之一，是一種水溶性維生素，其性質(zhì)偏酸性并廣泛存于多種食物中，故而得名。其功能是在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成輔酶A或?；d體蛋白的形式參與能量代謝和一些生物合成?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中泛酸的測(cè)定》（GB 5009.210—2016）中泛酸的測(cè)定，其中將微生物法作為泛酸檢測(cè)的第一法，微生物法由于具有較高靈敏度和可靠性得到國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。本研究中采用第二法-高效液相色譜法，同時(shí)參考AOAC的方法，使用泛酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行嬰幼兒配方乳粉及原料中泛酸的測(cè)定，分析嬰幼兒配方羊奶粉及原料的檢測(cè)數(shù)據(jù)，并考察原料與成品之間的關(guān)聯(lián)性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

泛酸試劑盒;泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品;鹽酸（AR）;磷酸（AR）;磷酸二氫鉀（AR）;七水合硫酸鋅（AR）;乙腈（HPLC）;一級(jí)水。

1.2 儀器設(shè)備

培養(yǎng)箱（37±1）℃;恒溫水浴鍋;酶標(biāo)儀（620 nm）;超凈工作臺(tái);微量可調(diào)移液器;LC-20AT高效液相色譜儀（配SPD檢測(cè)器）;BSA224S分析天平（感量0.1 mg）;PHS-3C雷磁pH計(jì);QYYS-10A純水儀;TG16-WS離心機(jī);KQ5200DB超聲波清洗器。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 液相法

液相色譜法的參數(shù)如下。色譜柱：C18色譜柱（Welch，粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm）;流動(dòng)相：0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液+乙腈=95+5;流速：1.0 mL/min;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm;柱溫：（28 ±0.5 ）℃;進(jìn)樣量：10 μL。

準(zhǔn)確稱(chēng)取適量試樣，精確至0.001 g，一般固體試樣約5 g，置于100 mL錐形瓶中，加入40～50 ℃溫水至30 mL。直接超聲提取20 min。取出試樣液，冷卻至室溫，用0.1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5.0±0.1，加入5 mL 0.5 mol/L硫酸鋅溶液，充分混合。轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，用水定容至刻度并充分混勻后，轉(zhuǎn)入離心管3 000 r/min離心5～10 min，取上清液過(guò)0.45 μm濾膜，濾液待上機(jī)測(cè)定。

1.3.2 微生物法

稱(chēng)取1 g（精確至0.000 1 g）均質(zhì)樣品至50 mL無(wú)菌離心管中，加入約30 mL無(wú)菌蒸餾水，搖勻，加蒸餾水至40 mL。在95 ℃水浴中提取30 min，期間振蕩至少5次，確保離心管緊閉。迅速冷卻至30 ℃以下。然后離心（轉(zhuǎn)速≥8 000 r/min），根據(jù)樣品標(biāo)示濃度對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。

取出需要數(shù)量的微孔板條并在板架上固定，移取150 μL培養(yǎng)基至微孔中，然后移取150 μL標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋的樣品至指定的微孔中。取出粘合箔并除去上面的保護(hù)層，將其平放在微孔板條上，用手將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條。在（37±1） ℃黑暗條件下孵育20～24 h。將微孔板旋渦混勻，用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)620 nm條件下讀取濁度。使用軟件RIDA SOFT Win_NET Version1.98進(jìn)行計(jì)算（4P法）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

由圖1、圖2可知，泛酸微生物法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)為0.999 5，滿(mǎn)足《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）附錄F F.2校準(zhǔn)曲線(xiàn)不低于0.99的要求，線(xiàn)性良好。高效液相色譜法相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，表明在1.0～32.0 μg/mL范圍內(nèi)，無(wú)基質(zhì)干擾法線(xiàn)性良好。

2.2 重復(fù)性與回收率

取同一批樣品，按1.3.2項(xiàng)下方法制備6批待測(cè)樣品進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行低、中、高3種濃度的加標(biāo)回收率試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。由表1和表2可知，測(cè)得樣品中泛酸平均含量為3 303 μg/100 g，RSD為0.5%，回收率在93.9%～101.9%，平均回收率為98.2%，回收率較高，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，重復(fù)性較好，此方法適用性較好。

2.3 液相色譜法與微生物法數(shù)據(jù)比對(duì)

2.3.1 配方羊奶粉數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

取配方羊奶粉樣品，分別按1.3.1、1.3.2項(xiàng)方法制備6批待測(cè)樣品進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，高效液相色譜法、微生物法兩種方法的檢測(cè)數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差、RSD值、CV值統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表3所示。由表3可知，嬰幼兒配方羊奶粉的微生物法與高效液相色譜法數(shù)值相比，計(jì)算CV值均超出10%，存在明顯差異。

2.3.2 羊乳清粉數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

選取羊乳清粉，分別按1.3.1、1.3.2項(xiàng)方法制備6批待測(cè)樣品進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，將高效液相色譜法、微生物法兩種方法的檢測(cè)數(shù)值進(jìn)行匯總比較。標(biāo)準(zhǔn)偏差、RSD值、CV值統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表4所示。由表4可知，高油脫鹽羊乳清粉的高效液相色譜法數(shù)值與微生物法數(shù)值相比，計(jì)算CV值在均超出10%，存在明顯的差異。

2.3.3 泛酸檢測(cè)圖譜對(duì)比

如圖3、圖4所示，嬰幼兒配方羊奶粉與其原料高油脫鹽羊乳清粉泛酸的出峰情況基本一致：目標(biāo)峰出峰情況較差、分離效果不佳、雜質(zhì)峰相對(duì)較多且干擾較大。

3 結(jié)論與討論

綜上，在用高效液相色譜法進(jìn)行乳粉中泛酸檢測(cè)時(shí)會(huì)存在檢測(cè)不穩(wěn)定的現(xiàn)象，且這種不穩(wěn)定現(xiàn)象可追溯至原料，并與原料存在一定的關(guān)聯(lián)性。

食品中泛酸的含量檢測(cè)一般以微生物法為主，其適用范圍廣，靈敏度較高，經(jīng)濟(jì)適用，但局限性在于操作復(fù)雜，且要求較高，不適用于批量樣品的檢測(cè)。而高效液相色譜法操作簡(jiǎn)單，可用于批量檢測(cè)，但對(duì)于某些基質(zhì)復(fù)雜的樣品無(wú)法準(zhǔn)確定量。因此，在檢測(cè)食品中泛酸時(shí)，需根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。

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