金蕎麥治療膿毒癥急性肺損傷大鼠的作用機制

王叢，梁群

(1.南通市中醫院，江蘇 南通；2.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱)

0 引言

膿毒癥(Sepsis)是重癥領域死亡率極高的疾病之一，其發病率全球每年新增數百萬，其中超過1/4 的人死亡[1]。中醫將膿毒癥歸結為 “外感熱病”、“溫毒”、“疔瘡走黃”、“疽毒內陷”的范疇。膿毒癥的發病機制是十分復雜的過程，與多種細胞因子、炎性遞質和凝血系統的激活等有著十分密切的關系，隨著現代醫學的發展，關于膿毒癥的中醫藥研究也越來越深入。因單純西藥治療存在抗生素耐藥現象，故考慮中西醫結合治療能獲得更好的治療效果。隨著中醫藥在臨床及科學研究中的廣泛應用，運用中藥實現多靶點治療膿毒癥成為研究熱點，為攻克此危重疾病提供新思路。金蕎麥合劑是南通市中醫院的院內制劑，具有清熱解毒、排膿生肌的作用。因金蕎麥中富含黃酮類、萜類、酶類及多種有效成分，在中醫學和現代醫學中都有著廣泛的應用[2]。本實驗將金蕎麥合劑作用于膿毒癥急性肺損傷大鼠，運用肺組織中炎性因子的變化證實金蕎麥治療膿毒癥急性肺損傷的作用機制，為中藥治療膿毒癥提供分子水平的理論依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF 級別SD 雄性大鼠60 只(許可證號SCXK(京) 2016-0006)，由南通市中醫院合作實驗室代為購買，體重180g-220g。普通專用飼料喂養于溫度22℃±4℃，相對濕度40%-70%，自然光線的實驗室，經過1 周的適應性飼養后進行實驗。

1.2 藥物及儀器

金蕎麥合劑(蘇藥制字Z04000162)是南通市中醫院的院內制劑，取金蕎麥單品按照中國藥典2005 版嚴格進行制作主要成分金蕎麥，主要功效：清熱解毒，排膿生肌，劑量500mL/瓶，產品批號：20190830。實驗室/檢驗科儀器：離心機型號SORVALL ST8/8R，電子稱：哈爾濱量具廠生產。ADVIA240 全自動生化分析儀(德國西門子)；CytoFLEX 流式細胞儀(美國貝克曼庫爾特)，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(Abcam公司)。

2 造模及試驗方法

2.1 動物模型制備

SPF 級SD 雄 性 大 鼠( 體 重：180-220g)60 只 隨 機 分 為空白組、模型組及實驗組，各20 只。模型組與實驗組采用于腹腔內注射LPS 10mg/kg 并在氣管內灌注 LPS 0.5mL/kg(20μg/mL)，觀察大鼠的一般狀態，稱量體重記錄大鼠呼吸頻率、豎毛、尿便情況等生命體征；建立膿毒癥急性肺損傷大鼠模型[3-4]。

2.2 實驗分組及給藥方法

SD 雄性大鼠60 只，隨機分為：空白組20 只、模型組20 只、金蕎麥組20 只。按照D2=D1×K2/K1×W1/W2，D 為藥物劑量，K 為常數 (大鼠為 9.1 人為 1.6)動物體質量1(kg)換算大鼠用藥劑量。空白組：灌胃給予0.9%生理鹽水10mL/kg，早中晚各給藥1 次，連續干預 3 d。模型組：造模后灌胃給予0.9%生理鹽水10mL/kg；早中晚各給藥1 次，連續干預 3 d。實驗組：造模后灌胃給予金蕎麥合劑10mL/kg；早中晚各給藥1 次，連續干預 3 d。

2.3 標本采集及檢測

造模后2h 待大鼠麻醉蘇醒后開始進行觀察評分記錄生命體征，記為實驗第1 天，試驗周期為3 天，3 天后腹主動脈采血進行檢測，將大鼠放在體重稱上稱重，以10%水合氯醛(0.4 mL/100 g)腹腔麻醉，無睫毛反射后大鼠仰臥操作臺，固定門齒及四肢，胸腹部備皮，沿腹部正中線切開向胸部剪開，充分暴露肺臟，用組織剪將肺組織剪成所需大小的碎塊，部分肺組織液氮凍存，部分送病理包埋分別行HE 染色、ELISA 檢測。

2.4 統計學處理

3 實驗結果

3.1 各組膿毒癥急性肺損傷HE 染色觀察肺組織病理變化

如圖1 所示為大鼠肺組織HE 染色后病理學變化情況(100×)，空白組(1-1)：病理切片均肺泡完好，視野中未見肺泡塌陷，未見水腫、充血及炎性滲出液，未見明顯肺泡壁增厚。模型組(1-2)：不同程度的肺泡塌陷，炎性滲出及出血。金蕎麥干預組(1-3)：視野中視野中肺泡明顯充盈，塌陷減輕，水腫減輕，炎性滲出少，充血情況減輕。

3.2 膿毒癥急性肺損傷大鼠各項指標的比較結果

實驗結果顯示：當模型組與空白組比較其炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10 釋放明顯增多，差異有統計學意義(P＜0.05)說明造模成功。當金蕎麥組與模型組比較其炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10 釋放明顯下降，差異有統計學意義(P＜0.05)說明金蕎麥降低膿毒癥急性肺損傷大鼠肺組織炎性因子釋放(見表1)。

圖1 小鼠的肺組織病理改變

表1 各組膿毒癥大鼠炎性因子數據進行統計學比較

4 討論

因膿毒癥的死亡率一直居高不下使得膿毒癥備受醫學界關注，關于膿毒癥發病機制及治療手段的研究越來越多，膿毒癥的急性肺損傷是常見器官損傷之一，以出現肺水腫、肺不張、呼吸衰竭、出現低氧血癥為主要表現，其起病急、病程長、預后差是急危重癥中死亡率高的疾病。近些年關于膿毒癥的研究證實其發病機制與炎癥、凝血、免疫等多方面因素相關。炎癥因子的激活不僅是膿毒癥發病機制同時是加重急性肺損傷的主要因素，有效控制急性肺損傷炎性因子的釋放，是治療膿毒癥急性肺損傷的有效手段之一[5-6]。膿毒癥治療主要以抗感染等對癥支持為主。在祖國醫學的記載中并沒有關于膿毒癥的論述，依據其疾病特點經病因病機總結為“正虛毒損，脈絡瘀阻”，總結各醫家治療膿毒癥的觀點得出膿毒癥主要從清熱解毒、活血化瘀、通腑降濁、扶正固本四個方面進行[7]。結合中醫理論中異病同治、同病異治的理論基礎，在治療上當靈活變化，辨證論治，主次分明，精準治療。

本實驗研究中運用南通市中醫院的院內制劑金蕎麥合劑干預膿毒癥急性肺損傷大鼠，觀察大鼠肺組織中炎癥因子的變化，從而證實金蕎麥治療膿毒癥急性肺損傷的作用機制。金蕎麥合劑取金蕎麥單品制成，避免了因中藥復方制劑藥味多、成分極其復雜，加上配伍比例的不同，煎煮方法和時長的不同帶來的研究困難，金蕎麥合劑方藥成分穩定，避免中藥復方的弊端。其主要性狀為紅棕色液體，具有清熱解毒、排膿生肌的作用。起初金蕎麥合劑廣泛應用于臨床治療肺癰，因其療效顯著目前臨床上用于肺膿腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管肺炎、肺炎、肺纖維化等疾病的治療，其中對治療肺膿腫有突出的療效[8-11]。隨著研究的不斷深入，人們發現金蕎麥中富含黃酮類、萜類、酶類及多種揮發性成分，在中醫學和現代醫學中都有著廣泛的應用[12]。金蕎麥中的有效成分黃酮類是在治療多種疾病時都具有積極作用，其中清除自由基抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤的作用被多方醫家所證實。本研究得出金蕎麥有效降低膿毒癥急性肺損傷大鼠炎癥反應，通過本實驗研究為中醫藥治療膿毒癥又提供了有力的依據。為中醫藥治療急危重癥提供研究基礎。