免疫法隱血試驗在檢測胃出血中的應用

梁華英，黃勝

(湛江中心人民醫院檢驗科，廣東 湛江)

0 引言

檢測消化道出血的隱血試驗目前有化學法和免疫法兩種，化學法因易出現假陽性而逐漸被免疫法代替。消化性出血疾病的致病因素較為復雜，易受到患者飲食、藥物等方面的影響[1]，免疫法隱血試驗一般又分為血紅蛋白及轉鐵蛋白免疫法，這兩種方法檢現在醫院得到廣泛使用，免疫法與傳統的化學法比較其特異性及敏感性都有很大的提高。上消化道出血包括胃出血，而檢測胃出血的胃液隱血試驗對早期發現上消化道出血及腫瘤具有重要參考價值，是臨床診斷的一個參考指標，下面我們對胃液隱血試驗免疫法的使用情況進行一些總結，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 標本來源

50 例胃液標本來自本院2019 年9 月至2020 年8 月的胃鏡證實有胃出血的患者，男32 例，女18 例，年齡16-81 歲；36 例正常對照胃液來自經胃鏡檢查證實沒有胃出血的健康人員，男19 例，女11 例，年齡20-65 歲。

1.2 試劑

萬華牌血紅蛋白便隱血膠體金檢測試紙和萬華牌轉鐵蛋白便隱血膠體金檢測試紙，均由萬華普曼生物工程有限公司生產。血紅蛋白法檢測范圍：0.2～2000ug/mL，轉鐵蛋白法檢測范圍：10～40ug/mL。

1.3 方法

檢測原理：采用雙抗體夾心法，分別在硝酸纖維素膜上的檢測區包被轉鐵蛋白抗體(或血紅蛋白抗體)和在控制區包被羊抗鼠IgG。檢測時，樣品中的轉鐵蛋白抗原(或血紅蛋白抗原)可與包被在試劑前端的膠體金—抗體結合，形成免疫復合物，由于層析作用復合物沿膜帶移動。如為陽性樣品，則可分別在檢測區及控制區各形成一條色帶；如為陰性樣品，則只在控制區形成一條色帶。

操作：條型：撕開鋁箔袋，取出檢測試紙條(請勿觸摸到試紙條中段白色部分)；將試紙標有MAX 箭頭的一端插入待測胃液樣本中(如胃液太粘稠，用蒸餾水稀釋)，待測樣本界面不得超過MAX 線；待試紙浸入液體后2-5 分鐘判讀結果，5 分鐘后顯示結果無效。

結果判讀：陽性：反應線(T)與控制線(C)同時出現一條色帶；

陰性：只在控制線(C)出現一條色帶，而反應線(T)無色帶出現。

無效：控制線(C)和反應線(T)均無色帶出現或只在反應線(T)出現一條色帶，表明試驗無效，應重新測試。

2 結果

2.1 50 例胃液免疫法隱血試驗結果見表1。

表1 50 例胃液免疫法隱血試驗陽性例數

2.2 檢測結果中8 例胃液樣本血紅蛋白和轉鐵蛋白隱血試驗均陰性，29 例血紅蛋白隱血試驗陰性樣本中轉鐵蛋白陽性21 例，4 例血紅蛋白隱血試驗陽性而轉鐵蛋白隱血試驗陰性。

3 討論

隱血試驗臨床上廣泛應用在慢性胃腸道出血、消化道惡性腫瘤早期輔助診斷等方面，不同的檢測方法它的影響因素也不同，測定結果也擦差異，以前的化學法隱血試驗采用過氧化物酶法，該法受干擾因素較多，例如檢測前吃過動物血、肉類等可造成假陽性[2]。隨著醫學技術的發展，免疫膠體金法出現并得到廣泛的應用，該法的敏感性、特異性和準確性較化學法都有明顯提高，試紙條上包被的抗體針對的是人類抗原，具有高度專一性，其利用下端的吸水材料吸收水和抗原(胃液的血紅蛋白或轉鐵蛋白)后，利用毛細血管現象向上擴散，溶解了膠體金標志的抗人血紅蛋白抗體或抗人轉鐵蛋白抗體，并兩者結合，利用毛細血管現象向上與測試區的固相血紅蛋白抗體或轉鐵蛋白抗體結合，此時膠體金聚集呈紅色線條。

轉鐵蛋白主要存在于血漿中，在健康人的消化道中幾乎不存在，當消化道出血時，轉鐵蛋白隨著消化道出血進入消化道中而導致在糞便中被檢測到，即轉鐵蛋白檢測呈陽性。由于血紅蛋白易被胃酸、細菌降解消化，而轉鐵蛋白在腸道內的自身穩定性及抗菌能力都強于血紅蛋白[3,4]，轉鐵蛋白不易被胃酸、消化酶、消化道細菌等分解破壞，相對于血紅蛋白而言，轉鐵蛋白在腸道中的穩定性強，尤其適宜檢測上消化道出血。血紅蛋白法出現假陰性的原因主要有幾點，如血紅蛋白或紅細胞經過胃、胰、腸等不同pH 消化液和腸道細菌蛋白酶等的作用而消化殆盡，已經不具有原來的活性或抗原變性或消失而導致假陰性；過量血紅蛋白導致反應體系中的抗原過剩出現前滯現象；患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配。實驗結果顯示胃液的血紅蛋白法陽性率42%(21/50)，轉鐵蛋白法陽性率76%(38/50)，證實了轉鐵蛋白法優于血紅蛋白法。原因是由于血紅蛋白易被胃酸、細菌降解消化，失去原有的免疫原性和反應原性，從而出現假陰性結果，而轉鐵蛋白在腸道內的自身穩定性及抗菌能力都強于血紅蛋白。轉鐵蛋白在糞便中的穩定性高于血紅蛋白，經56℃30min 處理，抗原活性無變化，而血紅蛋白活性大部分喪失，37℃4 小時轉鐵蛋白抗原活性無明顯變化，Hb 蛋白抗原活性喪失65%[5,6]。

實驗結果顯示正常組有1 例胃液標本兩種方法都陽性，后來經仔細檢查，發現該樣本來自一位牙齦有出血的人員，牙齦出血吞到胃里造成胃液隱血試驗陽性。

實驗結果顯示8 例胃液樣本血紅蛋白和轉鐵蛋白隱血試驗均陰性，原因可能有幾種：如果標本中混有甲醛(大于0.5%)或高濃度維生素C 可導致膠體金免疫法結果假陽性[7]；取樣本不合格；轉鐵蛋白量低于檢測限；抗原抗體不匹配等。

結果顯示29 例血紅蛋白隱血試驗陰性樣本中轉鐵蛋白陽性21 例，證實了轉鐵蛋白法敏感性及特異性高于血紅蛋白法。部分樣本也有可能血紅蛋白含量過大，引起后帶反應導致假陰性[8]，后來其中有4 例樣本稀釋后復查陽性也證實這一點。

實驗結果還顯示4 例血紅蛋白隱血試驗陽性而轉鐵蛋白隱血試驗陰性，可能是胃液中的轉鐵蛋白量含量低，檢測不出，有文獻報道10%的病例呈現轉鐵蛋白含量較低的現象[9]。另一方面，轉鐵蛋白為負向急性蛋白，在各種以炎性反應為主的疾病中，如創傷、感染、手術、心肌梗塞，轉鐵蛋白濃度降低，導致轉鐵蛋白試驗假陰性，還有遺傳性無轉鐵蛋白血癥患者轉鐵蛋白患者，此時轉鐵蛋白試驗出現陰性[10]。

胃液隱血試驗具有非創傷特點，是輔助診斷包括胃出血等上消化道出血的簡便方法及指標，單克隆抗體免疫法是采用雙抗體夾心法特異地檢測人血紅蛋白抗原，基本可以排除食物、藥物等因素的干擾，特異性強，靈敏度高，標本中的微量血紅蛋白能被檢測，目前已被認可為大便隱血試驗的確認方法[11]。但該方法不足的是正常的牛理性失血時，某些健康者特別是服用刺激胃腸道的藥物后可造成假陽性；該方法仍然基于抗原抗體反應，當兩者比例不當或不匹配或血紅蛋白抗原因為理化因素變性或消失等的影響易出現假陰性結果。轉鐵蛋白檢測消化道出血具有高特異性和不易被細菌分解的特點，克服了血紅蛋白因變性產生假陰性的缺點，為檢測消化道出血的良好指標[12]。

綜上所說，免疫法隱血試驗特異性強、靈敏度高，操作簡便，不受飲食的干擾，轉鐵蛋白法測定胃液樣本靈敏度及特異性都優于血紅蛋白法，兩者結合檢測，可提高檢測陽性率。但該法不能對胃腸道出血性病變做結論性的診斷，只能作為篩查或輔助診斷用，而不能代替臨床內窺鏡、X 線和其他檢查，對于陽性結果，應結合臨床做進一步檢查。