八角精油對三黃雞生長免疫性能及腸道菌群的作用

歐瑩 熊曉妍 覃振斌 虞霖田

（廣西農業職業技術學院，廣西 南寧530007）

八角精油亦稱八角茴香油，是通過水蒸氣蒸餾法、索氏提取法及CO2超聲波等方法從植物八角（Illicium verum Hook.f.）的莖葉或果實中提取出的揮發油。經氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS）分析，其主要成分為反式茴香腦、草篙腦、檸檬烯、芳樟醇、大茴香醛等［1］。有研究報道，八角精油具有抗菌、鎮痛、抗病毒等藥理學作用［2］，能抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉等多種細菌、真菌，具有廣譜抑菌效果［3］。張赟彬等［4］在對比八角精油與各主要單體（大茴香醛、檸檬烯、反式茴香腦）對大腸桿菌抑菌效果時發現，單體檸檬烯和八角精油效果最佳。另外，八角精油具有誘導動物進食，促進腸道發育，刺激腸胃蠕動及消化液分泌，提高動物機體的抗氧化能力和免疫力，增加日食量，改善肉質等功能［5］，是替代抗生素作為動物飼料添加劑的潛在物質。

當前，八角精油主要應用于藥物、食品以及化妝品等領域，在畜牧生產領域的研究與應用較欠缺。本試驗探究八角精油對三黃雞的生長性能、免疫性能及腸道菌群的影響，旨在為八角精油在三黃雞生產上的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

八角精油（乙醇提）、八角精油（水提）皆由本實驗室通過索氏提取法，利用乙醇、水為溶劑從廣西八角果實中提取得到，同時經青島科創質量檢測有限公司進行主要成分檢測，結果詳見表1；氟苯尼考粉（主要成分氟苯尼考占比為98%）購自山東魯西獸藥有限公司；禽類免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）ELISA檢測試劑盒購自武漢基因美生物科技有限公司。

表1 八角精油主要成分含量 （單位：%）

1.2 試驗動物

21天齡三黃雞公雞，購自廣西富鳳農牧有限公司。

1.3 基礎日糧

基礎日糧為小雞配合飼料，購自南寧漓源糧油飼料有限公司，主要原料為玉米、小麥、高粱等谷物或塊根及其加工產品，以及豆粕、魚粉、磷酸氫鈣、石粉、氯化鈉、L-賴氨酸、蛋氨酸羥類似物、維生素A、維生素D3、維生素E、維生素K3、硫酸銅、硫酸亞鐵、硫酸鋅、丙酸鈣等，主要成分詳見表2。

1.4 試驗方法

1.4 .1八角精油對三黃雞生長性能的影響將150

只21天齡的三黃雞公雞，隨機分成5組，每組30只（3個重復，10只/重復）：試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組、試驗Ⅳ組和空白對照組（C）。這5組基礎日糧中分別添加八角精油（乙醇提）0.4g/kg、八角精油（水提）0.4g/kg、八角精油（水提）0.8g/kg及抗生素（氟苯尼考粉）0.06g/kg，C組僅飼喂基礎日糧。試驗期間，各組雞自由采食與飲水，連續飼喂21天。試驗開始和結束時，試驗雞禁食（自由飲水）12h后稱重，記錄初始重和末重，統計耗料量。計算各組的日增重（ADG）、日耗料（ADFI）和料重比（F/G）。

表2 基礎日糧主要成分

1.4.2 八角精油對三黃雞免疫功能的影響在飼喂后第21天，各試驗組每個重復隨機選取2只雞（共30只）采血并測定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量，測定方法嚴格按照試劑盒說明書進行實驗操作。

1.4.3 八角精油對三黃雞腸道菌群的影響在飼喂后第21天，各試驗組每個重復隨機選取1只雞（共15只）進行直腸糞便取樣，共取15個樣，每個糞樣稱取1.0 g連續梯度稀釋至10-3、10-7濃度，每個稀釋度糞樣設兩個重復，分別接種營養瓊脂培養基、麥康凱培養基、MRS固體培養基，于37℃恒溫培養箱中培養24 h后進行芽孢桿菌、大腸桿菌和乳酸菌計數。大腸桿菌在麥康凱瓊脂培養基上呈粉紅色或紫紅色圓形菌落；在營養瓊脂培養基上呈灰白色的光滑小菌落；芽孢桿菌在營養瓊脂上呈白色的圓形菌落，邊緣不規則，且表面有裂紋；乳酸桿菌在MRS瓊脂上的菌落呈圓形，中等大小，凸起，微白色，濕潤，邊緣整齊。

1.5 數據處理

利用SPSS 21.0統計軟件進行單因素方差分析，Duncan氏法進行多重比較等方法對數據進行分析處理。

2 結果與分析

2.1 八角精油對三黃雞生長性能的影響

在試驗開始前記錄各組雞的初始體重，飼喂后第21天，各組雞稱重、稱料，計算日增重量（ADG）、日耗料（ADFI）、料重比（F/G）。試驗結果顯示詳見表3，Ⅰ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了6.8%、4.3%（P＞0.05）；Ⅱ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了5.7%、3.1%（P＞0.05）；Ⅲ組F/G較Ⅳ組與C組分別降低了12.9%、10.5%（P＜0.05）且ADG略高于其他組（P＞0.05），ADFI較C組降低了9.3%（P＜0.05）。試驗結果表明八角精油能提高三黃雞的日增重，降低日耗料，提高料重比。

表3 八角精油對三黃雞生產性能的影響

2.2 八角精油對三黃雞免疫功能的影響

在試驗開始后的第21天，對各組雞采血并測定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量。試驗結果顯示，Ⅰ組IgG含量較Ⅳ組與C組分別提高了19.5%、15.2%（P＞0.05）；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IgA含量較Ⅳ組分別提高了10.7%、24.2%、29.4%（P＞0.05），Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IgA含量較C組分別提高了24.5%（P＞0.05）、36.4%（P＜0.05）、44.9%（P＜0.05）；免疫球蛋白IgM指標中，八角精油組較空白對照組并無提高，較抗生素組稍有提高，各組差異不顯著（見表4），試驗結果表明八角精油能提高三黃雞血清IgA、IgG含量，提高免疫性能。

表4 八角精油對三黃雞免疫指標的影響

2.3 八角精油對三黃雞腸道菌群的影響

在飼喂后第21天，各組雞直腸糞便細菌計數結果顯示，試驗組大腸桿菌數均較空白組低，I、II、III組較空白組分別降低48.71%、49.88%和53.23%，而抗生素組的大腸桿菌數量則降低了58.31%；試驗組芽孢桿菌數較空白組稍有提高，I、II、III組較空白組分別提高2.33%、14.82%和9.65%，而IV組芽孢桿菌的數量較其他組低；此外，各實驗組雞只糞樣中乳酸菌數差異不顯著，而IV組乳酸菌數量較其他組低（見表5）。試驗結果表明飼料中添加八角精油能降低三黃雞腸道內大腸桿菌數，且有利于芽孢桿菌數量增殖。

表5 八角精油對三黃雞腸道菌群數量的影響

3 討論及結論

本研究結果顯示八角精油水提組ADG較空白對照組均有提高，該結果與Soltan等人［6］的相似，表明八角精油對三黃雞的生長有一定的促進作用，并且呈現劑量效應。八角精油0.8g/kg水提組與抗生素氟苯尼考組相比，ADG提高8.3%（P＞0.05），ADFI降低5.5%（P＞0.05），F/G降低了12.9%（P＜0.05），這表明八角精油對雛雞促生長作用較氟苯尼考強，氟苯尼考主要是通過調節腸道菌群起到促生長作用，而八角精油除了可以調節腸道菌群外，還能提高十二指腸的絨毛高度［7］，并且八角作為芳香類植物，還具有刺激肝臟、胰腺和腸黏膜消化酶的產生來增加膽汁流量，從而促進小腸對營養物質的消化吸收的作用［8］，這說明了八角精油對三黃雞促生長性能的作用不完全是通過調節腸道細菌所引起。丁曉［9］等研究發現0.2g/kg八角精油組的雞ADFI顯著提高，其十二指腸相對重量和空腸相對長度顯著提高。于彩云［10］研究發現日糧添加八角茴香油0.2g/kg、0.4g/kg、0.6g/kg使蛋雞ADFI顯著提高。而本研究八角精油水提0.8g/kg組的ADFI顯著低于對照組，與丁曉、于彩玉等研究不同，可能是本研究水提八角精油濃度較高，影響了飼料的適口性，導致了ADFI降低，但其有效成分相對較高，對胃腸的蠕動和消化吸收有促進作用，降低料重比，提高了飼料利用率與經濟效益。另外，Osman［11］等發現肉仔雞添加八角油提取物和丁香混合物可以降低F/G。本研究結果與Osman的相似，八角精油水提0.8g/kg組F/G顯著低于抗生素組及空白對照組（P＜0.05），表明了高劑量水提八角精油降低了三黃雞料重比。本研究還發現在反式茴香腦相同的情況下，三黃雞的F/G指標中，水提八角精油組較乙醇提組明顯降低，可能與它們的其他主要成分差異有關，水提八角精油的主要成分中，芳樟醇、草蒿腦、檸檬烯、桉樹腦等單體成分均高于乙醇提八角精油，可能是以上單體物質或混合物起到了降低三黃雞F/G的作用，具體原因還需要進一步探究。

目前，八角精油在畜牧生產中的研究與應用不多，且集中在哺乳動物上，八角精油對雞甚至家禽免疫功能調節的研究尚未見報道。劉艷君［12］發現在斷奶仔豬飼料中添加八角精油，仔豬血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的濃度顯著提高；此外，學者發現八角茴香提取液能促進小鼠脾臟的發育以及鼠脾淋巴細胞增殖反應［13］。因此，當前研究表明了八角精油對哺乳動物的免疫系統具有調節作用。丁曉等［14］在雞日糧中添加八角精油（0.5g/kg）進行研究，結果發現雛雞的肝臟和血清中的超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力均顯著提高，而丙二酸（MDA）含量顯著降低，脾臟指數顯著提高；但是該研究尚未探究八角精油對雞免疫球蛋白的作用。然而，本研究結果表明了水提八角精油能顯著提升雛雞血清中IgA含量（P＜0.05），對IgG的含量有提升趨勢但不顯著，而對IgM水平無提高。

本試驗中，在雛雞21天齡時采樣檢測，結果顯示試驗組八角精油飼喂的雞腸道中的大腸桿菌數量均有所降低，其中水提八角油組下降最為明顯，然而，八角精油對雛雞腸道乳酸菌的數量并沒有提升。表明八角精油能抑制21天齡三黃雞腸道中大腸桿菌體，且水提法優于乙醇提取法。于彩云等人研究發現八角精油蛋雞組較其他組間盲腸大腸桿菌和乳酸菌數量無顯著差異（P＞0.05），但隨著日糧中八角精油含量的增加，盲腸內大腸桿菌數量呈線性降低［15］。本研究結果與于彩云研究一致，八角精油水提0.8g/kg組雛雞腸道中大腸桿菌數量較0.4g/kg組的低；八角精油對腸道中的乳酸菌數量無作用，而卻能提升雛雞腸道中枯草芽孢桿菌數量。因此，本試驗表明了八角精油對三黃雞雛雞腸道菌群具有調節作用，然而對腸道微生物的種類的調節具有選擇性，并且呈現出劑量效應。

本研究發現水提八角精油組大腸桿菌數量低于乙醇提組，表明水提八角精油對大腸桿菌的體內抑制作用比乙醇提強，這可能與兩者單體成分含量不同有關，水提八角精油中的芳樟醇和檸檬烯含量較多，可能是這兩種單體物質對雞腸道大腸桿菌的體內抑制效果較好。姜冬梅等［16］發現芳樟醇具有抗菌、抗炎、抗腫瘤等藥理活性，張赟彬等［4］發現檸檬烯的體外抑菌效果較反式茴香腦、大茴香醛等好。八角精油對雞腸道大腸桿菌有一定的抑制作用，今后可開發復方制劑，引入肉桂［17］、止痢草［18］等提取物，聯合運用以增強抑菌效果。

綜上所述，三黃雞日糧中添加濃度0.8g/kg的水提八角精油，可顯著降低日采食量和料重比（P＜0.05），顯著提高血清中免疫球蛋白IgA水平（P＜0.05），有抑制腸道大腸桿菌的作用（P＞0.05）。因此，水提八角精油可提高三黃雞生產性能，提高部分血清免疫球蛋白水平，優化腸道菌群，具有潛在的作為動物飼料添加劑價值。目前，通過水提法從八角莖、葉及果實提取的八角精油已商品化生產，該油市場價格約300元/kg，本試驗中八角精油添加劑量僅為0.1～0.8g/kg，成本低。添加八角精油組較空白對照組料重比降低了4.3%～10.5%，有效的提高了經濟效益。廣西是全國養雞的重要地區，特別是優質三黃雞的生產基地，2019年1～5月累計增長幅度達到了535.3萬噸［19］。因此，八角精油在雞飼料中的應用能夠降低雞的料重比，這將對廣西養雞業產生可觀的經濟效益。