丙種球蛋白聯(lián)合阿司匹林對(duì)川崎病患兒外周血Treg細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的影響

王婉霞，劉媛，梅玲華

榆林市第二醫(yī)院質(zhì)量控制科1、兒科2，陜西 榆林 719000

川崎病是一種急性出疹發(fā)熱性疾病，好發(fā)于5歲兒童，且近年來(lái)發(fā)病率逐年增長(zhǎng)[1]。川崎病發(fā)病較為復(fù)雜，患兒全身多系統(tǒng)均可受累，冠狀動(dòng)脈損傷為常見(jiàn)并發(fā)癥，隨著病情進(jìn)展甚至發(fā)生心源性猝死，嚴(yán)重威脅患兒生命健康[2-3]。因此疾病早期及時(shí)診治對(duì)于減少患兒冠狀動(dòng)脈損傷、心源性猝死具有重要意義。相關(guān)研究結(jié)果顯示，阿司匹林聯(lián)合丙種球蛋白治療川崎病可改善患兒外周血CD4+、CD25+Treg細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群比例失衡情況，改善免疫功能，減少冠狀動(dòng)脈損傷[4]。本研究旨在進(jìn)一步探究阿司匹林聯(lián)合丙種球蛋白治療川崎病的臨床效果及其對(duì)患兒外周血調(diào)節(jié)T(Treg)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2020年2月榆林市第二醫(yī)院收治的96例川崎病患兒進(jìn)行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《川崎病診斷指南》[5]者；②年齡在4個(gè)月以上，14歲以下者；③納入研究前3個(gè)月無(wú)特殊用藥史者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他免疫系統(tǒng)疾病者；②合并腎、心等臟器功能障礙者。所有患兒按照隨機(jī)數(shù)表法分成觀察組和對(duì)照組，每組48例。觀察組患兒年齡2～7歲，平均(3.25±1.28)歲；病程1～16 d，平均(6.36±1.24)d。對(duì)照組患兒年齡1～6歲，平均(3.19±1.35)歲；病程1～14 d，平均(5.25±1.72)d。兩組患兒的病程、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并征得患兒家屬同意，簽署知情同意書(shū)。

1.2 治療方法 對(duì)照組患者單獨(dú)應(yīng)用丙種球蛋白[生產(chǎn)廠商：上海生物制品研究所；批準(zhǔn)文號(hào)：S10970081；規(guī)格：3 mL(10%，0.3 g)/瓶]靜脈滴注治療：每日給藥濃度為2.5%，用藥劑量為1.0 g/kg，滴速為每小時(shí)5 mL/kg，盡量在10 h內(nèi)完成滴注，連續(xù)用藥3 d。

觀察組則聯(lián)合應(yīng)用阿司匹林(生產(chǎn)廠商：拜耳醫(yī)藥保健有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：J20130078；規(guī)格：100 mg×30片)進(jìn)行治療：劑量為每日30 mg，分三次口服。丙種球蛋白用法完全同對(duì)照組。兩組患兒均治療2個(gè)月，治療過(guò)程中嚴(yán)密監(jiān)測(cè)兩組患兒生命體征。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患兒的臨床癥狀消失時(shí)間、治療前及治療8周后外周血CD25+、CD4+Treg細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平變化情況。

1.4 檢測(cè)方法 患兒于入院次日清晨及治療8周后次日清晨，空腹分別抽取外周靜脈血2 mL，離心取血漿200 μL待檢；單個(gè)核細(xì)胞分離使用淋巴細(xì)胞分離液，計(jì)數(shù)定容至1×106/mL進(jìn)行流式標(biāo)記，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次。將抗體CD3-FITC/CD4-PE、CD4-PE/CD25-APC、CD3-FITC/CD8-PE、CD3-FITC/CD56-PE/CD 16-APC加入100 μL細(xì)胞，孵育時(shí)間為20 min，孵育環(huán)境為室溫，PBS洗滌2次棄上清后加入200 μL PBS重懸，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。分析CD25+、CD4+Treg細(xì)胞表達(dá)水平及CD4+、CD3+、CD8+、自然殺傷(NK)細(xì)胞等百分比占比。

1.5 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)[6]顯效：淋巴結(jié)腫大、皮疹、發(fā)熱、黏膜充血等完全消失，病情完全控制；有效：淋巴結(jié)腫大、皮疹、發(fā)熱、黏膜充血等明顯改善，病情有效緩解；無(wú)效：淋巴結(jié)腫大、皮疹、發(fā)熱、黏膜充血等無(wú)變化甚至加重，病情無(wú)變化甚至進(jìn)展。總有效率=(顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒的臨床治療效果比較 觀察組患兒的治療總有效率為91.67%，明顯高于對(duì)照組的75.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.800，P=0.029＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患兒的臨床治療效果比較(例)

2.2 兩組患兒的臨床癥狀消失時(shí)間比較 治療后，觀察組患兒的發(fā)熱消失時(shí)間、皮疹、淋巴結(jié)腫大及黏膜充血消退時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組患兒的臨床癥狀消失時(shí)間比較(，d)

表2 兩組患兒的臨床癥狀消失時(shí)間比較(，d)

images/BZ_50_207_1230_2273_1297.png觀察組對(duì)照組t值P值48 48 3.02±0.88 4.01±0.26 7.475 0.001 2.05±1.44 3.13±1.33 3.817 0.001 6.01±3.20 8.24±3.58 3.218 0.002 4.13±2.45 6.03±2.58 3.670 0.001

2.3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細(xì)胞表達(dá)水平比較 治療前，兩組患兒的外周血CD25+、CD4+Treg細(xì)胞表達(dá)水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后，兩組患兒的外周血CD25+、CD4+Treg細(xì)胞表達(dá)水平明顯上升，且觀察組明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較 治療前，兩組患兒的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK細(xì)胞表達(dá)水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后，兩組患兒的CD3+、CD8+、NK細(xì)胞表達(dá)水平較治療前明顯升高，且觀察組明顯高于對(duì)照組，兩組患兒的CD4+、CD4+/CD8+細(xì)胞表達(dá)水平較治療前明顯下降，且觀察組明顯低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表4。

表3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細(xì)胞表達(dá)水平比較(，%)

表3 兩組患兒治療前后的外周血Treg細(xì)胞表達(dá)水平比較(，%)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

組別 例數(shù)CD4+ CD25+觀察組對(duì)照組t值P值48 48治療前15.38±2.21 14.98±2.16 0.897 0.372治療后43.46±2.19a 36.24±2.04a 16.713＜0.05治療前14.28±2.13 15.11±2.09 1.927 0.057治療后40.35±2.98a 30.30±3.25a 15.791＜0.05

表4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較(，%)

表4 兩組患兒治療前后的外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較(，%)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

images/BZ_50_207_2404_2273_2516.png觀察組對(duì)照組t值P值48 48 65.28±8.12 65.41±7.86 0.080 0.937 79.94±11.71a 70.87±10.03a 4.076＜0.05 30.82±10.02a 35.64±10.03a 2.355 0.021 30.82±10.02a 35.64±10.03a 2.355 0.021 20.67±5.02 20.75±2.10 0.102 0.919 25.12±6.03a 22.36±5.15a 2.411 0.018 3.89±0.94 4.01±0.88 0.646 0.520 1.02±0.11a 2.67±0.42a 26.330＜0.05 6.96±0.40 6.87±0.21 1.380 0.171 14.68±0.87a 10.07±0.58a 30.546＜0.05

2.5 兩組患兒的不良反應(yīng)比較 治療后，觀察組患兒發(fā)生藥物性皮疹5例，不良反應(yīng)發(fā)生率為10.42%(5/48)，對(duì)照組發(fā)生藥物性皮疹3例，不良反應(yīng)發(fā)生率為6.25%(3/48)，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.546，P=0.460)。

3 討論

川崎病臨床主要表現(xiàn)為皮膚黏膜受損、淋巴結(jié)腫大、皮疹、發(fā)熱，屬于全身血管性病變綜合征，常并發(fā)冠狀動(dòng)脈瘤、冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張且隨著病情不斷進(jìn)展可導(dǎo)致心力衰竭、心肌梗死，嚴(yán)重影響患兒預(yù)后。因此，及時(shí)診治對(duì)于減少并發(fā)癥、死亡率十分必要。

丙種球蛋白注射使用可阻斷血管損傷、補(bǔ)充患兒抗體，從而形成被動(dòng)免疫，提高機(jī)體抗感染能力，具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用[7]，但單一使用效果卻不甚理想。阿司匹林屬于常見(jiàn)的鎮(zhèn)痛解熱類藥物，具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，在川崎病治療過(guò)程中應(yīng)用可有效抑制血栓素A2形成，阻止血栓形成[8-9]。故本研究將兩者聯(lián)合應(yīng)用于治療川崎病，以探究其臨床療效及對(duì)患兒外周血調(diào)節(jié)T(Treg)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示，單一用藥治療的患兒總有效率僅為75.00%，而聯(lián)合用藥治療的患兒總有效率達(dá)91.67%，且聯(lián)合用藥治療的患兒黏膜充血消退時(shí)間、發(fā)熱消失時(shí)間、淋巴結(jié)腫大及皮疹均顯著短于單一用藥的患兒，均證實(shí)聯(lián)合用藥效果更佳，不僅提高臨床治療效果，還能有效縮短臨床癥狀消失時(shí)間。

淋巴細(xì)胞及其亞群檢測(cè)作為判斷機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，CD4+、CD8+正常情況下處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，共同維持機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定，具有抑制自身免疫疾病、抗感染、抑制腫瘤等作用[10]。CD25+、CD4+Treg細(xì)胞主要源于胸腺，其水平變化、異常會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)高度活化，發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用，抑制NK細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等功能，避免機(jī)體過(guò)度免疫反應(yīng)。有研究顯示，CD25+、CD4+Treg細(xì)胞參與器官移植、慢性感染性、自身免疫性等疾病的發(fā)生、發(fā)展[11]。川崎病作為免疫功能顯著異常的一種疾病，其外周血CD25+、CD4+Treg細(xì)胞表達(dá)水平隨著疾病進(jìn)展而明顯下降，相關(guān)研究指出，CD25+、CD4+Treg細(xì)胞表達(dá)水平明顯下降是導(dǎo)致血管系統(tǒng)等全身各系統(tǒng)損傷的主要原因之一[12]。本研究中，患兒治療后外周血CD4+、CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)水平明顯上升，且聯(lián)合治療組明顯高于單一治療組，說(shuō)明聯(lián)合用藥可明顯提高細(xì)胞表達(dá)水平，從而提高細(xì)胞因子分泌含量，使得有效發(fā)揮免疫抑制作用的細(xì)胞數(shù)量增加，最終提高細(xì)胞免疫功能[13]。

同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，患兒經(jīng)治療后CD3+、CD8+、NK細(xì)胞表達(dá)水平較治療前明顯升高，且聯(lián)合治療組高于單一治療組；而CD4+、CD4+/CD8+細(xì)胞表達(dá)水平則較治療前明顯下降，且聯(lián)合治療組低于單一治療組，說(shuō)明NK細(xì)胞比例下降、CD8+細(xì)胞功能不足、CD4+細(xì)胞功能亢進(jìn)均參與川崎病的發(fā)病過(guò)程，而治療后相關(guān)細(xì)胞表達(dá)水平逐漸恢復(fù)，提示聯(lián)合用藥可有效恢復(fù)Treg細(xì)胞抑制作用，抑制T細(xì)胞的分化增殖，打破免疫紊亂狀態(tài)[14-15]。

綜上所述，阿司匹林聯(lián)合丙種球蛋白治療川崎病患兒可有效縮短臨床癥狀消失時(shí)間，改善患兒外周血CD4+、CD25+Treg細(xì)胞、淋巴細(xì)胞亞群比例失衡情況，從而改善細(xì)胞免疫狀況，臨床療效確切，且不良反應(yīng)較少。