實時PCR 檢測在妊娠晚期B 族鏈球菌篩查診斷中的應用價值觀察

張 敏 季姍姍 李文然

（河南省三門峽市中心醫院產科，河南三門峽472000）

B 族鏈球菌（GBS）為革蘭陽性球菌，一般寄生于人體下消化道和泌尿生殖道，20 世紀30年代，Fry 等報道了GBS 能夠引發產后心內膜炎而導致患者死亡，故而證明該細菌為人類致病菌[1]。隨著人們對GBS 的認識加深，眾多研究顯示，GBS 可以導致新生兒感染，如肺炎、腦膜炎等，對新生兒生命安全危害較大[2-3]。而對于GBS 陽性孕婦而言，其容易發生胎膜早破、子宮內膜炎等，危害其健康[4]。準確篩查GBS 陽性孕婦，對指導GBS 防治具有重要意義。實時聚合酶鏈反應（PCR）是GBS 診斷的方法之一，檢測所需時間短，本研究探討實時PCR 在妊娠晚期GBS 篩查診斷中的應用價值，并分析GBS 陽性孕婦不良妊娠結局。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2017年5月至2019年4月于本院進行GBS 篩查的917例妊娠晚期孕婦為研究對象，孕婦年齡21～40 歲，平均年齡（28.60±3.94）歲；初產婦683例，經產婦234例；孕周28～38 周，平均孕周（34.19±2.67）周。本研究取材均通過孕婦同意，其無自身免疫性疾病、無嚴重生殖道畸形、無嚴重內外科疾病、近期內無性生活和使用抗生素情況。

1.2 方法：根據2002年美國疾病控制中心（CDC）推薦的取材方法，對妊娠晚期孕婦進行陰道取材，擦拭外陰分泌物，向陰道內置入2 根無菌陰道棉簽，順時針旋轉采集分泌物，之后向肛門內置入2 根棉拭子，于肛門括約肌2 指位置順時針旋轉，采集直腸分泌物。2 根無菌陰道棉簽和2 根棉拭子均分為2 份，各用于細菌培養和實時PCR 檢測。細菌培養：將標本接種于COBA 平板及改良TH 肉湯中，在35℃環境下，置于5%CO2培養箱中培養24h，觀察是否有GBS 生長菌落（粉紅色或白灰色），發現疑似GBS 菌落后采用B 群鏈球菌鑒定方法予以鑒定。若經標準48h 培養后未發現GBS 菌群生長，則判斷為無GBS 生長；若經標準48h 培養后發現有GBS 菌群生長，則判斷為GBS 陽性。實時PCR 檢測：取樣后的陰道棉簽和直腸棉拭子均置于2mL 標本運輸液中，24h 內予以檢測。振蕩標本運輸液，吸取50μL 進行離心，除去離心后的上清液，以50μLTE緩沖液重懸，加入10μL 內參照，振蕩5min，95℃環境中加熱2min，冰浴備用。向PCR 反應管中加入處理后的待測標本4μl，并設置陰性對照和陽性對照，離心，將待測PCR 反應管予以PCR 擴增檢測。

1.3 統計學分析：運用SPSS19.0 統計軟件包分析數據，計數資料以n（%）表示，采用卡方檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細菌培養及實時PCR 診斷結果：細菌培養顯示GBS 陽性者38例，所占比例為4.14%；實時PCR檢測顯示GBS 陽性者96例，所占比例為10.47%。

2.2 實時PCR 鑒別診斷GBS 陽性的價值：細菌培養顯示GBS 陽性的38例孕婦實時PCR 檢測均為陽性；其他實時PCR 檢測顯示為GBS 陽性而細菌培養顯示陰性的58例孕婦，擴增測序證實有54例為GBS 陽性，4例為GBS 陰性。實時PCR 診斷妊娠晚期GBS 陽性的敏感度、特異度和準確度分別為100%、99.52%和99.56%，詳見表1。

表1 實時PCR 鑒別診斷GBS 陽性的結果

2.3 GBS 陽性和GBS 陰性孕婦不良妊娠結局比較：GBS 陽性組胎膜早破、宮內感染、胎兒窘迫和新生兒感染發生率均高于GBS 陰性組（P＜0.05），詳見表2。

表2 GBS 陽性和GBS 陰性孕婦不良妊娠結局比較 [n（%）]

3 討論

GBS 為條件致病菌，正常情況下不會引起感染，當女性懷孕時，體內性激素和糖原水平升高，陰道pH 值也發生改變，加之機體免疫功能降低，促進了GBS 增殖，可造成孕婦、新生兒感染，是新生兒死亡重要原因之一[5]。研究表示，10%～30%GBS 菌落集中在孕婦陰道、直腸中，1%～2%嬰兒可發展為早發型GBS 感染（即出生后首周內發生感染），另有部分嬰兒為晚發型GBS 感染（多在出生后1 周至3個月內發生感染），而GBS 引起的新生兒死亡率較高。早期人們對GBS 致病的認知并不深，忽視了孕婦GBS 篩查。美國CDC 于1996年提出圍產期GBS疾病預防指南后，預防GBS 感染開始引起人們注意。2002年，美國CDC 指出，對妊娠晚期孕婦進行GBS 培養篩查，是預防GBS 感染的有效方法。

細菌培養是診斷孕婦生殖道GBS 陽性的金標準，準確直觀，但由于該方法耗時較長，加之孕婦生殖道細菌種類較多，容易影響GBS 培養，漏診可能性較大[6]。本研究結果顯示，細菌培養診斷GBS 陽性者僅38例，所占比例為4.14%。實時PCR 檢測對比細菌培養所需時間短，診斷敏感度高，能較好反映孕婦臨產前GBS 帶菌情況，減少抗生素濫用或漏用。但該方法也存在假陽性情況。本結果中，實時PCR 檢測顯示GBS 陽性者96例，對比細菌培養陽性率明顯較高。分析實時PCR 診斷效能，顯示其診斷妊娠晚期GBS 陽性的敏感度、特異度和準確度分別為100%、99.52%和99.56%，可見實時PCR 檢測在妊娠晚期GBS 診斷中的應用價值較高。少數實時PCR 診斷為GBS 陽性的孕婦，通過擴增測序證實為陰性，提示可憑借再次擴增后測序來降低假陽性發生。本研究還分析了妊娠晚期孕婦GBS 陽性對妊娠結局的影響，顯示GBS 陽性組胎膜早破、宮內感染、胎兒窘迫和新生兒感染發生率均高于GBS 陰性組。

綜上所述，對妊娠晚期孕婦采用實時PCR 技術進行GBS 篩查，用時短且診斷價值高，妊娠晚期GBS 感染會增加不良妊娠結局發生率，需及時診斷并采取相關措施干預，以改善預后。