重組抗原免疫印跡法及化學(xué)免疫發(fā)光法檢測(cè)梅毒假陽(yáng)性?xún)r(jià)值比較

王揚(yáng)

梅毒的診斷往往通過(guò)血清檢測(cè)得到結(jié)果,近年來(lái)生物監(jiān)測(cè)領(lǐng)域取得了較大的進(jìn)步,因此對(duì)于梅毒診斷方法的研究也取得了一定進(jìn)展。曾經(jīng)梅毒的血清檢測(cè)通常先將活的梅毒轉(zhuǎn)種提純后得到一種蛋白,這種蛋白存在特異性,它是抗原蛋白的一種,得到這種抗原蛋白后再進(jìn)行免疫學(xué)印跡檢測(cè),但是此方法受到了成本以及難度的限制,活梅毒的保存條件要求較為苛刻,病毒轉(zhuǎn)種需要耗費(fèi)大量檢測(cè)成本,且經(jīng)過(guò)提純僅得到含量非常少的蛋白,并且配制人員在操作過(guò)程中被感染的可能性會(huì)大大提高,威脅檢測(cè)人員的生命安全。所以生物監(jiān)測(cè)中出現(xiàn)了基因工程抗原,它能夠取代天然抗原,從而對(duì)患者進(jìn)行血清的檢查。近幾年出現(xiàn)了CMIA等多種檢測(cè)梅毒的方法,但是臨床研究結(jié)果顯示基因免疫方法檢測(cè)存在假陽(yáng)性的幾率,對(duì)于無(wú)既往病史患者檢測(cè)結(jié)果的誤差會(huì)直接影響后續(xù)治療。因此RAWB用于無(wú)法進(jìn)行解釋的陽(yáng)性樣本的檢測(cè),進(jìn)一步排除假陽(yáng)性的患者。為研究RAWB 及CMIA 檢測(cè)梅毒假陽(yáng)性的價(jià)值,本文進(jìn)行了較為細(xì)致的研究,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取本院2018 年1～12 月63 份CMIA 檢測(cè)陽(yáng)性樣本,根據(jù)患者年齡不同分為A 組(患者年齡19～50 歲,35 份)、B 組(患者年齡51～70 歲,12 份)、C 組(患者年齡71～100 歲,16 份)。有明確二期梅毒臨床表現(xiàn)患者(均為A 組)14 例,血清標(biāo)本16 份(其中2 例患者包括治療前及祛梅治療后的血清)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者樣本均為無(wú)既往梅毒病史的基因免疫檢測(cè)陽(yáng)性樣本；②所有患者及家屬自愿同意并支持參加本次研究；③患者的認(rèn)知功能正常,可以正常溝通；④所有患者的肝腎功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并腫瘤；②無(wú)完整肝腎功能患者；③之前患有較為嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病患者；④視力、聽(tīng)力受損以及存在認(rèn)知障礙患者；⑤肝腎功能受損患者。

1.2 方法 對(duì)63 份樣本進(jìn)行初篩梅毒血清試驗(yàn),包括CMIA、TPPA、RPR。CMIA 檢測(cè)全自動(dòng)完成。對(duì)所有血清樣本進(jìn)行抗-TP 檢測(cè),按試劑說(shuō)明書(shū)肉眼判讀結(jié)果,反應(yīng)孔中細(xì)胞沉積在孔中央呈光滑紐扣狀為陰性,反應(yīng)孔出現(xiàn)凝集為不規(guī)則沉積則陽(yáng)性。對(duì)63 份樣本進(jìn)行RAWB、歐蒙WB 檢測(cè)。重組梅毒螺旋體基因蛋白抗原免疫試劑采用基因重組蛋白抗原制備的 NC膜。根據(jù)梅毒印跡實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行血清樣本檢測(cè),通過(guò)實(shí)驗(yàn)NC 膜條質(zhì)控條帶及各抗原條帶的顯色結(jié)果進(jìn)行結(jié)果判斷。陽(yáng)性:質(zhì)控線(xiàn)顯色正常,抗原線(xiàn)有≥2 條顯色; 可疑:抗原線(xiàn)只有 1 條顯色; 陰性:抗原線(xiàn)均不顯色; 無(wú)效:質(zhì)控線(xiàn)不顯色,或顯色明顯減弱的。對(duì) 63 份血清標(biāo)本進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn),采用說(shuō)明書(shū)中的判斷標(biāo)準(zhǔn),以WB 陽(yáng)性結(jié)果為真陽(yáng)性。

1.3 觀(guān)察指標(biāo) 觀(guān)察63 份樣本初篩梅毒血清試驗(yàn)結(jié)果；對(duì)比63 份樣本CMIA、RAWB、歐蒙WB 檢測(cè)結(jié)果,三組的RAWB 與CMIA 檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 63 份樣本初篩梅毒血清試驗(yàn)結(jié)果 A 組CMIA檢測(cè)陽(yáng)性率為94.29%,出現(xiàn)2 份弱陽(yáng)性樣本,TPPA 與RPR 檢測(cè)該2 份樣本均為陰性；B 組CMIA 檢測(cè)陽(yáng)性率為91.67%；C 組CMIA 檢測(cè)陽(yáng)性率為81.25%。見(jiàn)表1。

2.2 63 份樣本三種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 RAWB 與歐蒙WB 檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.133,P>0.05)。RAWB、歐蒙WB 檢測(cè)陽(yáng)性率均低于CMIA,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.175、16.755,P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 三組RAWB 與CMIA 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 A 組的RAWB 檢測(cè)陽(yáng)性率與CMIA 比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.729,P>0.05)；B 組、C 組的RAWB 檢測(cè)陽(yáng)性率均低于同組CMIA,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.711、10.165,P<0.05)。見(jiàn)表3。

表1 63 份樣本初篩梅毒血清試驗(yàn)結(jié)果［n(%)］

表2 63 份樣本三種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比［n(%)］

表3 三組RAWB 與CMIA 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比［n(%)］

3 討論

梅毒是人體感染了梅毒螺旋體后發(fā)作的一種傳染性較強(qiáng)的疾病,隨著吸毒人群以及同性戀數(shù)量的增加,梅毒的發(fā)病率逐漸上升。對(duì)梅毒的檢測(cè)具有一定的預(yù)防意義,因此對(duì)梅毒的有效檢測(cè)方法也一直是諸多醫(yī)學(xué)者的研究熱點(diǎn)［1,2］。目前常用檢測(cè)梅毒的方法主要有血清檢測(cè),檢測(cè)包括兩部分：非梅毒螺旋體的抗原檢測(cè)以及梅毒螺旋體的抗原檢測(cè)［3,4］,TPPA、CMIA 都能夠?qū)γ范韭菪w進(jìn)行抗原的血清檢測(cè)［5,6］,但是診斷準(zhǔn)確率受患者病史的影響較大。CMIA 對(duì)于孕婦以及中風(fēng)患者的陽(yáng)性結(jié)果無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確分析,需要WB 方法進(jìn)行協(xié)助診斷,避免假陽(yáng)性影響患者的后續(xù)治療。

本研究結(jié)果顯示：A 組CMIA 檢測(cè)陽(yáng)性率為94.29%,B 組CMIA 檢測(cè)陽(yáng)性率為91.67%；C 組CMIA檢測(cè)陽(yáng)性率為81.25%。RAWB 與歐蒙WB 檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。RAWB、歐蒙WB 檢測(cè)陽(yáng)性率均低于CMIA,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A 組的RAWB 檢測(cè)陽(yáng)性率與CMIA 比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；B 組、C 組的RAWB 檢測(cè)陽(yáng)性率均低于同組CMIA,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述,CMIA 的檢測(cè)陽(yáng)性率偏高,存在假陽(yáng)性的幾率,對(duì)于無(wú)既往病史患者如CMIA 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,采用RAWB 能夠進(jìn)行更為準(zhǔn)確的診斷,避免診斷失誤影響患者的治療。