肺炎克雷伯菌高毒力莢膜血清型的構(gòu)成及毒力和耐藥性研究

黃海峰

（鹽城市射陽縣婦幼保健院，江蘇 鹽城）

0 引言

莢膜屬于肺炎克雷伯菌的主要構(gòu)成的毒力因子之一[1]。傳統(tǒng)的觀念，認(rèn)為高毒力莢膜血清型肺炎克雷伯菌的耐藥率較低，但是通過本次探討以及近期我們的研究發(fā)現(xiàn)，其耐藥性正在逐漸上升。篩選出的110株高毒力莢膜血清型肺炎克雷伯菌進(jìn)行探究分析，對(duì)其的毒力以及耐藥性等情況做了進(jìn)一步的探究。

1 信息及方法

1.1 常規(guī)資料

抽取2108年2月至2019年2月在鹽城市第一人民醫(yī)院進(jìn)行治療的100例肺炎克雷伯菌病人給予研究，包括41株非重復(fù)肺炎克雷伯菌。按照病史分成肝膽疾病組（79例）與無肝膽疾病組（31例）。入院要求：皆確診肺炎克雷伯菌感染，經(jīng)過血、尿，化驗(yàn)均檢出；穿刺培養(yǎng)證實(shí)肺炎克雷伯菌；排除要求：精神疾病；家族遺傳史；慢性肝炎與傳染病。

1.2 方法

1.2.1 微生物學(xué)特點(diǎn)

a黏液絲試驗(yàn)，在37 ℃下對(duì)肺炎克雷伯菌培養(yǎng)16～18 h，將菌落挑起，若黏液長(zhǎng)度大于5 mm，則證明實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為陽性，如果沒有挑起超過5 mm的長(zhǎng)度是陰性；b毒力基因檢測(cè)和莢膜種類，選擇PCR擴(kuò)增法檢查毒力基因，將已培養(yǎng)好肺炎克雷伯菌放在400 μL去離子水里加熱100 ℃后保持5 min的離心，然后DNA模板，最后選擇特定引物序列生成氣桿菌素（底物：wcaGF，wcaGR）以及rmpA（底物：rmpAF、rmpAR）和 K1、K2、K5、K54、K57引物，并且相同反應(yīng)條件中實(shí)施基因的擴(kuò)增，再于100 V電壓和1%瓊脂糖凝膠電泳反應(yīng)產(chǎn)物，對(duì)產(chǎn)物成像。

1.2.2 藥敏試驗(yàn)

應(yīng)用MH瓊脂粉與單藥藥敏紙片；使用經(jīng)過升級(jí)Hodge試驗(yàn)法對(duì)碳青霉烯酶的情況進(jìn)行判斷；選擇雙紙片法（克拉維酸藥敏紙片/克拉維酸和頭孢他啶/北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的含酶抑制劑的頭孢噻肟）對(duì)超廣譜β內(nèi)酰胺酶的生成情況進(jìn)行確認(rèn)；質(zhì)控菌株ATCC25922抑菌環(huán)直徑作為藥敏作用的評(píng)價(jià)準(zhǔn)則，直徑內(nèi)為有效。

1.3 數(shù)據(jù)分析

選擇SPSS 23.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用χ2檢驗(yàn)，若P<0.05則表示存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組肺炎克雷伯菌微生物學(xué)特征對(duì)比

86.36% 高黏液表型（95/110），81.82%（90/110）菌株存在rmpA基因，88.18%（97/110）菌株存在氣桿菌素。對(duì)比發(fā)現(xiàn)無其他肝膽疾病組顯著大于有肝膽疾病組，具有較大差異（P<0.05），見表 1。

表1 兩組肺炎克雷伯菌微生物學(xué)特征比較[n(%)]

2.2 肺炎克雷伯菌耐藥情況

非重復(fù)肺炎克雷伯菌存在敏感性，對(duì)12種常見抗菌藥物的敏感性超過85%，包括4株中介耐藥；2株產(chǎn)碳青霉烯酶，屬于非高黏液，未分型菌株；1株產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶，屬于非高黏液，未分型菌株；1株產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶，屬于高黏液K2型菌株，見表2。

表2 肺炎克雷伯菌的耐藥情況[n(%)]

3 討論

革蘭陰性菌屬于主要的致病菌，2/3的大腸埃希桿菌[2]，然后是糞鏈球菌與變形桿菌；目前，肺炎克雷伯菌患病率約66%[3]，研究表明：肺炎克雷伯菌已逐漸成為細(xì)菌性最主要的病原菌[4-5]。約80.00%的肺炎克雷伯菌發(fā)生于肝右葉，且多為單發(fā)，大部分患者白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞百分比明顯升高。與本次探討結(jié)果大致相同[6-7]。在本次探究中，50%肺炎克雷伯菌病人存在糖尿病。主要是由于糖尿病病人身體免疫水平較低，極易感染其他疾病[8]。近幾年，B超與CT是檢查肺炎克雷伯菌的常用方法，能夠評(píng)價(jià)膿腫的大小、位置、性狀等情況，為臨床治療提供診斷價(jià)值。Law等[9]報(bào)道若判定細(xì)菌性患者的膿腫內(nèi)具有一定的氣體，既可初步判斷其致病菌屬于肺炎克雷伯菌。在本次報(bào)告中，110例病人經(jīng)過抗菌藥治療與穿刺后，106例疾病獲得顯著的減輕。發(fā)熱表現(xiàn)基本消退，白細(xì)胞計(jì)數(shù)慢慢恢復(fù)正常，膿腫變小，4例敗血癥死亡。說明治療效果理想，然而敗血癥必須臨床高度重視預(yù)防。高毒力肺炎克雷伯菌存在高黏液、攜帶毒力基因rmpA和氣桿菌素的特征，而莢膜多糖屬于這種類型的最關(guān)鍵決定因子。徐麗等[10]發(fā)現(xiàn)79個(gè)莢膜分型，K1和K2血清型毒力最強(qiáng)，最常見莢膜分型。有資料顯示，83%分離自患者的肺炎克雷伯菌的莢膜分型為K1和K2血清型。該報(bào)道結(jié)果說明86.36%的肺炎克雷伯菌表型為K1和K2血清型，提示高毒力肺炎克雷伯菌是細(xì)菌性主要病原菌。研究表明肺炎克雷伯菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥性不斷的增強(qiáng)，特別碳青霉烯類抗菌藥物。研究稱氣桿菌素與菌落的黏液性相關(guān)，可增強(qiáng)肺炎克雷伯菌的毒性，所以攜帶rmpA與氣桿菌素的肺炎克雷伯菌存在高毒力。該報(bào)告結(jié)果中，無肝膽疾病患者rmpA與氣桿菌素檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于有肝膽疾病患者，主要是因?yàn)楦叨玖Ψ窝卓死撞拘栽斐稍l(fā)感染，然而常規(guī)菌株毒力較小，膽囊炎或肝膽手術(shù)后誘發(fā)感染。高毒力肺炎克雷伯菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率較低，然而1株高黏液K2血清型菌株對(duì)超廣譜β內(nèi)酰胺類藥物耐藥，說明預(yù)防高毒力高耐藥的肺炎克雷伯菌株。

綜上所述，肺炎克雷伯菌主要高發(fā)中老年男性，攜帶毒力基因rmpA以及氣桿菌素的高毒屬于其主要病原菌，對(duì)常見抗菌藥物的耐藥率較低。