硝苯地平緩釋片（Ⅱ）的制備工藝及其對釋放度的影響

趙先亮 劉茜英 許俊博 張 娜▲

1.華潤雙鶴利民藥業（濟南）有限公司質量技術部，山東濟南 250200；2.華潤雙鶴藥業股份有限公司產品發展中心，北京 100102

硝苯地平臨床適用于預防和治療冠心病心絞痛、高血壓，對頑固性、重度高血壓也有較好治療效果[1-7]。硝苯地平緩釋片由德國拜耳首次研發應用于臨床，相對于普通片，緩釋片可使患者的血藥濃度保持穩定，同時減少了服藥頻率，增加順應性[8]；相對于控釋片，緩釋片的性價比更高[9]。但由于硝苯地平原料的難溶性、高滲透性和光不穩定性[10]，造成該產品生產過程質量不穩定的因素較多，體外溶出曲線的研究可以為口服固體制劑在體內作用的一致性提供評價依據，并可為產品處方工藝的改進提高提供支持和幫助[11-12]。使該產品與德國拜耳原研制劑Adalat-L 具有一致的溶出行為是保證其質量與療效一致性的關鍵，如何參照原研制劑處方工藝，進行篩選優化，生產過程中如何控制影響其釋放度的因素，從而保證質量及療效與原研制劑一致，是仿制藥企業面對的難題。目前，國內仿制藥體內外的等效性不盡如人意[13-14]。本研究通過對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）處方工藝中影響制劑釋放度的各種因素進行考察，得出了用于指導生產的關鍵參數。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GZP-55 高速旋轉式壓片機（上海天和制藥機械有限公司）；BGB-150D 高效包衣機（浙江小倫制藥機械有限公司）；安捷倫1100 型高效液相色譜儀，包括G1322A 型真空脫氣機、G1312A 兩元泵、G1329A 型自動進樣器、G1316A 型柱溫箱和G1315B 型紫外檢測器（安捷倫科技有限公司）；ZRS-8G 智能溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）；FADT-1206 自動取樣溶出系統（上海富科思分析儀器有限公司）；XS105DU型電子天平（瑞士Mettler 公司）；KQ-600DV 型數控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試藥

乙腈（色譜純，美國天地）；甲醇（色譜純，美國天地）；吐溫-80（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；磷酸（分析純，萊陽康德化工有限公司）；異丙醇（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；原研制劑Adalat-L（規格：20 mg，批號：JPS0089，日本BAYER）；硝苯地平對照品（純度為99.8%，批號：100338-201605，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平雜質Ⅰ對照品（純度為100%，批號：100339-201604，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平雜質Ⅱ對照品（純度為100%，批號：100340-201604，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平原料（批號：02-20180304，上海玉瑞生物科技有限公司）；玉米淀粉（山東聊城阿華制藥股份有限公司）；硬脂酸鎂（山東聊城阿華制藥股份有限公司）；乳糖（江蘇道寧藥業有限公司）；微晶纖維素（江西益普生藥業有限公司）；薄膜包衣預混劑（上海卡樂康包衣技術有限公司）。

2 方法與結果

2.1 硝苯地平緩釋片（Ⅱ）的制備

參照硝苯地平緩釋片原研專利處方工藝[15]，處方中原輔料經預處理、混合后，濕法制粒、壓片，然后進行包衣。

2.2 溶出曲線的繪制

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（4.6×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.01 mol/L 磷酸氫二鈉溶液（11∶9，磷酸調節pH 值至6.1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：40℃；進樣量：50 μL。理論塔板數按硝苯地平峰計算不低于4000。

2.2.2 釋放度測定 查閱相關文獻發現，已經報道的該類品種釋放度測定方法不少，使用的釋放介質有0.1 mol/L氯化氫溶液[16]、磷酸鹽緩沖溶液[17]、蒸餾水[18]、0.5%十二烷基硫酸鈉（SDS）水溶液[19]、0.25% SDS 水溶液[20]、0.4%吐溫-80 磷酸鹽緩沖液[21]、0.5%吐溫-80 氯化鈣溶液[22]等。本研究采用日本橙皮書[23]中硝苯地平緩釋片的釋放度測定方法（同原研制劑一致），以0.3%吐溫80 水溶液900 mL 為溶出介質。測定全程避光，取樣品6 片，照溶出度與釋放度測定法（《中華人民共和國藥典》[24]2015 年版四部通則0931 第二法） 漿法，將片劑同時放入溶出杯內，轉速為75 r/min，溫度37℃，依法操作，分別于0.5、1、2、4、8、12 h 取溶液10 mL，濾過，棄去初濾液5 mL，并即時補充相同溫度、相同體積的溶出介質，取續濾液作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品約15 mg，精密稱定，置10 mL 量瓶中，加甲醇適量超聲使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用溶出介質定量稀釋制成每1 mL約含硝苯地平20 μg 的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（《中華人民共和國藥典》[25]2015 版三部通則0512），精密量取供試品溶液和對照品溶液各50 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積分別計算每片溶出量，并計算相應時間的藥物累積釋放度。

以取樣時間為橫坐標、以累計溶出量為縱坐標繪制溶出曲線，并采用相似性f2因子法評價不同供試品與參比制劑溶出曲線的相似性，如果f2≥50，則表示兩種制劑在所評價的時間內溶出度相似[26]。

2.3 方法學驗證

按照《中華人民共和國藥典》[24]2015 年版“藥品質量標準分析方法驗證指導原則”對該方法進行了全面的驗證，驗證項目及結果見表1，結果顯示分析方法準確可靠。

2.4 影響因素考察

硝苯地平緩釋片釋藥機制是利用硝苯地平幾乎不溶于水的特點，對硝苯地平原料進行微粉化處理，使其粒徑成微細分布，在介質中緩慢逐步溶解，達到緩釋的結果[13]。原研制劑專利處方選用的輔料包括乳糖、微晶纖維素、淀粉、吐溫-80 及硬脂酸鎂等，均為口服固體制劑常用輔料。基于硝苯地平緩釋片制劑釋放機制分析，影響藥物釋放行為的主要因素有原料粒徑、填充劑、黏合劑、表面活性劑、包衣層用量等處方及其工藝參數。

2.4.1 原料粒徑 硝苯地平緩釋片原研專利[15]中，限定了硝苯地平的比表面積范圍（0.5～6 m2/g），提示硝苯地平的粒徑D90會影響藥物的釋放曲線。因此，需考察不同粒徑硝苯地平原料對緩釋片釋放度的影響。本研究使用三種不同粒徑原料：原料1（D90：65 μm）、原料2（D90：35 μm）、原料3（D90：5 μm）分別制備硝苯地平緩釋片。體外釋放度測定結果見表2 及圖1A。結果顯示，原料粒度越小，體外釋放速度越快，與緩釋機制相吻合。當硝苯地平原料粒徑D90達到35 μm 時，制劑體外釋放曲線與原研制劑一致。

2.4.2 填充劑 原研制劑Adalat-L 采用了乳糖和微晶纖維素兩種填充劑，乳糖為水溶性填充劑，微晶纖維素不溶于水兼具有崩解劑的作用，這兩種輔料用量比可能對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）的體外釋放有影響。因此，對兩種輔料的用量進行了研究，乳糖∶微晶纖維素用量分別為1∶2、1∶1 和2∶1。體外釋放度測定結果見表2及圖1B。結果顯示，乳糖的比例增加對硝苯地平釋放有一定的促進作用，這可能與親水性輔料乳糖在一定程度上減小了疏水性藥物的接觸角，改善了硝苯地平的潤濕性有關。當乳糖用量與微晶纖維素用量比例相等或低于微晶纖維素比例用量時，制劑體外釋放曲線與原研制劑一致。

2.4.3 黏合劑 硝苯地平緩釋片（Ⅱ）依靠原料在水中難溶特性實現緩釋，加入黏合劑后制得顆粒硬度及崩解性能對該品的釋放有較大影響。因此，考察不同濃度的淀粉漿對其釋放度和穩定性的影響，淀粉漿濃度分別為8%、10%、15%。體外釋放度測定結果見表2及圖1C。結果顯示，黏合劑濃度增加，制劑釋放速率減慢，黏合劑的濃度是影響制劑釋放速率的關鍵因素之一。

2.4.4 表面活性劑 吐溫80 作為一種表面活性劑，可以增加難溶性原料藥的釋放速率。因此，考察不同吐溫80 加入量對緩釋制劑釋放速率和穩定性的影響，吐溫80 的用量分別為0.5%、1%、1.5%時，制劑釋放度測定結果見表2 及圖1D。結果顯示，吐溫80 的用量在0.5%～1.5%范圍內，對制劑釋放速率相近。這可能與表面活性劑加入量少，在固體制劑中僅起到增加藥物潤濕性的作用，而不是增溶的作用有關。

2.4.5 包衣層 硝苯地平是高光敏感藥物，遇光易發生化學歧化作用，降解為雜質Ⅰ及雜質Ⅱ[27-28]，所以具有遮光作用的薄膜衣將對該產品的質量穩定性具有較大影響。薄膜包衣不僅避免了制劑有關物質的增加，也會影響藥物的釋放，因此，考察不同包衣增重對其釋放速率的影響。包衣增重分別為1%、3%、5%。體外釋放度測定結果見表2 及圖1E。結果顯示，一定范圍內的包衣厚度對本品體外釋放度相近。

表2 各影響因素對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）釋放度的影響

3 討論

目前我國硝苯地平緩釋制劑多為骨架型緩釋片，采用親水硅膠材料如羥丙甲纖維素及羥丙纖維素等為骨架材料，存在緩釋骨架溶散過快或崩塌導致突釋現象弊端[13]，而且該基質緩釋系統釋藥速度與外部環境變量有較大關系，易受如pH、溶出介質及攪拌速率的影響[29]，很難做到與原研制劑釋放行為完全一致[11-12，30]。本研究參照原研制劑處方工藝，研究制劑的緩釋作用機制與原研制劑相同，避免了大量高分子骨架輔料導致的人體代謝負擔，通過研究最終確定控制硝苯地平緩釋片（Ⅱ）釋放度的關鍵處方工藝參數包括原料粒徑D90：10～40 μm，乳糖與微晶纖維素用量比例相等，淀粉漿濃度為10%，吐溫80 的用量為0.5%，包衣增重為3%。

圖1 各種影響因素下溶出曲線（n=6）

研究過程中發現原輔料的質量波動是影響該產品批量生產質量穩定性的重要因素。原料D90限度制定應基于原料粒徑的正態分布，這對原料的粉碎及混合提出了更加嚴苛的要求，應對原料制定粒度內控標準，保證不同批次硝苯地平原料粒徑分布的一致性是保障制劑釋放行為一致性的關鍵；國產玉米淀粉、乳糖及微晶纖維素批間差異較大，未從分子聚集狀態、粒徑等方面進行細化分型，特定型號的輔料使用是保障所生產制劑質量穩定的關鍵因素，需要生產企業密切關注原輔料生產企業的處方工藝穩定性，并研究制訂適當的入廠內控標準防控質量波動。

因硝苯地平具有光敏性，為保證產品的質量，生產和儲存過程中應采用適當的避光措施，產品增加了薄膜包衣在一定程度上降低了其見光降解速度，為進一步保證產品穩定性，應采用避光的上市包裝。