P16、Ki-67免疫組化染色在宮頸上皮內瘤變分級中的診斷價值

史勉

（鞍鋼集團公司總醫院病理科，遼寧 鞍山 114000）

宮頸癌是臨床上較為常見的女性惡性腫瘤疾病，經相關數據統計，發病率僅次于結直腸癌和乳腺癌，且發病率逐年增長，已成為影響患者生活質量的疾病之一[1]。經臨床發現，宮頸人乳頭狀瘤病毒（HPV）是誘導宮頸癌發病的主要危險因素，若宮頸癌患者早期接受相關治療即可痊愈，但由于該疾病早期臨床癥狀不明顯，多數患者尚未能及時發現，一旦發現病情多發展成晚期，預后較差[2]。因此，對宮頸癌的預防及早期準確診斷尤為重要。近年來，隨著細胞學診斷技術的不斷提升，宮頸癌的發病率逐漸下降，常見的宮頸癌診斷方式包括細胞學、組織學及陰道鏡篩查等，雖有一定診斷價值，但會受主觀性的影響，導致結果存在一定偏倚[3-4]。在宮頸上皮內瘤變（CIN）的診斷中，P16、Ki-67 免疫組化染色體是近年來熱門且新型的診斷方式，由于針對CIN病理分級中的診斷價值尚未有統一定論。基于此，本研究評估P16、Ki-67 免疫組化染色體在CIN 病理分級中的表法，并分析其診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2019年6月本院接診的高度疑似為宮頸上皮內瘤變患者200 例，年齡25～46 歲，平均（34.55±7.63）歲；病程1.5～5.5 年，平均（3.13±2.43）年。患者及家屬對本研究知情并簽署知情同意書。本研究經醫院醫學倫理委員會批準同意。排除合并嚴重心、肺、腎等臟器疾病者，精神障礙且溝通困難者。

1.2 方法 免疫組化選用PV9000法，其中P16（福州邁新技術開發有限公司）、Ki-67（福州邁新技術開發有限公司）。每批切片均設置對照組進行檢測，將宮頸癌組織作為P16、Ki-67 的陽性對照，零件磷酸緩沖液作為陰性對照。免疫組化陽性結果判定標準：按照患者治療期間機體內陽性細胞占比進行分類，P16、Ki-67均分為4個等級，分別為陰性、弱陽性、陽性及強陽性，其中陰性表示陰性細胞所占比例＜6%；弱陽性表示陽性細胞所占比為6%～26%；陽性表示陽性細胞所占比為27%～49%；強陽性表示陽性細胞所占比＞49%。陽性率=（弱陽性+陽性+強陽性）/總例數×100%。全部患者均符合手術指征，術后將組織送檢，將手術病理結果作為金標準，判斷P16、Ki-67診斷宮頸上皮內瘤變的診斷效能。

1.3 統計學方法 采用SPSS 18.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，采用一致性檢驗Kappa 值評價P16、Ki-67 診斷鑒別宮頸上皮內瘤變分級與金標準的一致性（Kappa值≥0.74提示一致性好，Kappa值范圍為0.4～0.74提示一致性一般，Kappa值＜0.4提示一致性差），以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 手術病理診斷結果 200例高度疑似宮頸癌的患者經手術組織病理活檢結果顯示，炎癥反應患者16 例，占比8%；CINⅠ級76例，占比38.00%；CINⅡ級60例，占比30.00%、CINⅢ級30例，占比15.00%；宮頸癌18例，占比9.00%。

2.2 P16診斷效能分析 以病理結果為標準，P16用于炎癥反應、CINⅠ型、CINⅡ型、CIN Ⅲ型及宮頸癌診斷的符合率分別為93.75%（15/16）、92.11%（70/76）、93.33%（56/60）、86.67%（26/30）、77.78%（14/18），診斷總符合率為90.50%（181/200）。經一致性檢驗結果顯示，P16 用于宮頸上皮內瘤變分級鑒別診斷與病理結果的Kappa 值為0.883，一致性好，見表1。

表1 P16診斷結果（n）Table 1 P16 diagnosis results(n)

2.3 Ki-67診斷效能分析 以病理結果為標準，Ki-67用于炎癥反應、CINⅠ型、CINⅡ型、CIN Ⅲ型及宮頸癌診斷的符合率分別為87.50%（14/16）、94.74%（72/76）、91.67%（55/60）、90.00%（27/30）、88.89%（16/18），診斷總符合率為92.00%（184/200）。經一致性檢驗結果顯示，Ki-67 用于宮頸上皮內瘤變分級鑒別診斷與病理結果的Kappa 值為0.891，一致性好，見表2。

表2 Ki-67診斷結果（n）Table 2 Ki-67 diagnosis results(n)

3 討論

宮頸癌屬于常見的組織學類型的磷狀細胞癌，主要是由宮頸上皮內瘤變發病至侵潤性癌癥的連續過程。相關資料顯示，其具有發展緩慢且發病期間臨床癥狀不明顯等特點，已嚴重影響臨床診斷與治療[5]。因此，在宮頸癌發生病變期間需及時找到提示性病變進展的標記物，對宮頸癌的預防起到關鍵性作用，同時對該類患者早期診斷并對其病情的發展給予有效控制[6]。

本研究結果顯示，P16、Ki-67用于宮頸上皮內瘤變分級鑒別診斷與病理結果的一致性好。由此證實，P16、Ki-67與CIN 的發生、發展密切相關，兩者預測價值均較高，對臨床CIN 早發現、早診斷、早治療具有重要意義。分析其原因在于，在細胞學病理學中，CIN屬于宮頸上皮細胞組織，大部分組織可被不同的異型細胞所替換，主要特點在于：細胞核異型性，細胞核增大且深染，核分裂現象增多；異型細胞主要由基底膜向上表現延伸發展；細胞極發生紊亂后逐漸消失。目前臨床均選用CIN分級并根據患者宮頸上皮病變情況分為3級，其中Ⅰ級宮頸上皮內瘤變（輕度不典型增生）：細胞異型性呈輕度，異常增殖的細胞多表現在上皮層下1/3 處，另外中層及表層的細胞呈正常表現；Ⅱ級宮頸上皮內瘤變（中度不典型增生）：細胞異型性表現較明顯，且異常增殖的細胞表現在上皮層下的2/3 處，尚無累及表層細胞，同時基底膜顯示完整；Ⅲ級宮頸上皮內瘤變（重度不典型增生）：異型性細胞顯著，且異常增殖細胞已逐漸擴散到上皮層下的2/3，甚至可到達全層，基底膜顯示完整。在該類分級系統應用中，往往因醫生原因導致出現相同標本，同時經不同醫生的診斷得出不相同的診斷結果，故需尋找相關標記物，以輔助進行診斷[7-8]。P16 可歸結為細胞周期調節過程中較為重要的抗癌基因，主要位于9p21，包含3 個外顯子及2 個內含子，可作為在腫瘤細胞生長的過程中一種抑制的重要因子，同時與細胞周期蛋白依賴激酶有著密切的關系，且在CD K4及K6 的表達及調節中起到關鍵性作用。當P16 基因發生異常時，可直接影響P16 的表達，進而導致細胞周期素D 與CD K4 相結合，改變細胞表型，一定程度上促使細胞發生無限的繁殖或分裂，甚至喪失控制能力。因此，P16 在腫瘤的發生及發展過程中具有密切關系，若發生基因突變或損傷時，可導致其進一步發展為腫瘤，故在診斷腫瘤的良惡性中，P16 的表達可作為重要的觀察指標[9]。Ki-67 蛋白主要位于10q25，其中包含14 個內含子和15 個外顯子，分布于細胞核內，可作為細胞增殖的重要抗原體。其次，Ki-67 又稱為細胞增殖指數，均在增殖細胞內活動，在細胞發生分類后，易導致該蛋白量逐漸變少，細胞在靜止期內不表法的情況下，可準確成像細胞增殖的活性。故在臨床診斷腫瘤細胞增殖中，可作為重要的標志物，說明Ki-67 水平的高低與CIN病理嚴重程度呈正相關，對患者的健康狀態存在一定的預警作用。同時多用于診斷腫瘤的嚴重程度，易可用于分析細胞周期、腫瘤、細胞增殖的復發、轉移等行為及預后的關系中[10]。

綜上所述，P16、Ki-67 與CIN 的發生、發展密切相關，兩者的預測價值均較高，對臨床CIN早發現、早診斷、早治療具有重要意義。