RNAH19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及對侵襲的影響

李新秋，舍 勇，陳 軍

（仁懷市人民醫院肝膽外科，貴州 仁懷 564500）

甲狀腺乳頭狀癌（PTC）具有惡性程度低、生長緩慢的特征，經手術治療后預后較好，但仍有部分患者因癌細胞侵襲而導致預后較差。因此，尋求PTC腫瘤標志物對于該疾病的早期診斷和治療具有重要價值。長鏈非編碼RNA(lncRNA)具有穩定性高、組織及疾病特異性，可在腫瘤患者外周循環中檢測出該物質[1]。目前，lncRNA逐漸用于PTC診斷中，研究發現H19在甲狀腺腫瘤組織中表達下調，與患者預后密切相關，但對于lncRNA H19與PTC的關系仍處于探究階段。為進一步尋求更準確的PTC診斷方式，本研究旨在探究lncRNA H19在PTC中的表達及對侵襲的影響。具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1月～2019年12月于我院行手術治療的50例發生腫瘤侵犯周圍組織PTC患者資料，納入觀察組，并選同期50例腫瘤未侵犯周圍組織的PTC患者資料作為對照組。對照組男16例，女34例；年齡23～55歲，平均（35.24±5.80）歲。觀察組男17例，女33例；年齡24～56歲，平均（35.60±5.85）歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），研究有可對比性。

1.2 方法

（1）標本采集：空腹無菌采取5mLEDTA抗凝血，靜置30min后1200g離心10 min，取上清液于4℃下1200 g再離心10 min，取250 μl血漿加入750 μl TRIzol? LS試劑后-80℃保存。收集患者手術時新鮮腫瘤組織，于-80 ℃下凍存直至RNA提取。（2）總RNA提?。簢栏癜碩RIzol? LS試劑（美國Invitrogen公司）說明書進行總RNA、腫瘤組織提取，溶于DEPC處理的水中。（3）實時定量PCR檢測：根據Genebank中H19及內參GAPDH的序列，利用Primer 5.0軟件設計引物，由上海生工生物技術科技有限公司合成引物。利用SYBR? Advantage? qPCR Premix（大連TaKaRa公司）進行PCR擴增擴增結束后得到Ct值，采用 2-△△Ct法計算H19的表達水平。

1.3 評價指標

比較兩組患者的lncRNA H19表達水平，并繪制受試工作者曲線（ROC）檢驗lncRNA H19表達水平預測PTC預后的價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據處理，以“±s”表示計量資料，組間用獨立樣本t檢驗，繪制ROC曲線得到lncRNA H19表達水平預測PTC預后的曲線下面積（AUC），AUC＞0.7預測價值高，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 lncRNA H19表達水平

觀察組的lncRNA H19表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者lncRNA H19表達水平對比（±s）

表1 兩組患者lncRNA H19表達水平對比（±s）

組別 lncRNA H19對照組(n=50) 3.05±0.61觀察組(n=50) 4.03±0.82 t 6.780 P 0.000

2.2 lncRNA H19表達水平預測PTC預后的價值分析

將lnc RNA H19表達水平作為檢驗變量，將PTC預后狀態作為狀態變量，將預后良好設為1，將預后不良設為2，繪制ROC曲線（見圖1）得到lnc RNA H19表達預測PTC預后的AUC為0.910，最佳截斷值為3.59，95%置信區間0.854-0.966，P＜0.001，敏感度為83.3%，特異度為62.50%。提示ncRNA H19表達水平預測PTC預后的價值較理想。

圖1 lncRNA H19表達水平預測PTC預后的ROC曲線分析

3 討 論

PCT患者經甲狀腺切除術治療后病死率較低。但PTC腫瘤細胞侵襲會影響預后，需對PTC患者進行早期準確的診斷。而選擇有效的腫瘤標志物對于提高早期診斷準確性具有重要價值。目前，已有報道顯示lncRNA H19在膀胱癌、乳腺癌中有促進腫瘤增殖作用，但有關其在PTC中的作用報道較少，因此，本研究探究lncRNA H19與PTC的侵襲的關系。

本研究結果顯示，觀察組的lncRNA H19表達水平高于對照組，說明lncRNA H19在侵襲性PTC癌組織中呈高表達。繪制ROC曲線得到lnc RNA H19表達診斷PTC的AUC為0.910，敏感度較高，提示ncRNA H19表達水平預測PTC預后的價值較理想。分析原因在于，lncRNA為轉錄本長度常規200nt的RNA分子，以RNA的形式對基因表達水平進行調控，其存在于轉錄調控、轉錄后調控、表觀遺傳調控等多種層面上，在胚胎發育調節、亞細胞結構分布、干細胞定向分化等方面具有重要作用[2]。因此，lncRNA表達異常會導致疾病發生。而H19長度為2300bp，位于染色體11p15.5上，可與胰島素樣生在因子2相互作用，對生長控制具有重要作用，且可在胚胎發育過程中表現父系印記的lncRNA分子。lncRNA H19在腫瘤細胞的增殖、分化、侵襲過程中具有重要作用，其表達上調提示了致癌屬性。劉娜等[3]相關研究顯示lncRNA H19在甲狀腺癌中呈高表達，其表達水平會影響甲狀腺癌的預后，有望成為抗腫瘤治療的新靶點，與本研究結果相似。不同之處在于該研究也對miRNA let7表達與甲狀腺癌的病理特征關系進行探究，而本研究主要分析lncRNA H19表達與PTC的關系。本研究因樣本量較少，研究結果可能存在誤差，不足之處有待未來擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，lncRNA H19在侵襲性PTC癌組織中呈高表達，可能與PTC細胞的增殖和侵襲密切相關，且預測PTC預后的價值較理想，可作為侵襲性腫瘤的標記物。