蒲黃的過篩凈制研究

劉亞萍 高明亮 陳佩東 周桂生

1.南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥學部，江蘇南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學藥學院，江蘇南京 210046

蒲黃為香蒲科植物水燭香蒲（Typha angustifolia L.）或同屬植物的干燥花粉。每年6～7 月份，采集蒲棒頂部黃色雄花序，制備成草蒲黃。草蒲黃進一步經過碾軋和篩取等工藝去除雜質制備成蒲黃[1]。我國的蒲黃資源非常豐富，全國各地都有分布[2]。蒲黃始載于神農本草經，在中醫(yī)臨床中有著廣泛的應用，有炒蒲黃和蒲黃炭等不同炮制品，是化瘀止血的重要藥物[3-4]。生蒲黃飲片常用于淤血所致的經閉痛經、脘腹疼痛等，而炒蒲黃和蒲黃炭飲片則主要用于各類出血病癥[5]。

蒲黃中主要含有黃酮類、甾體類、有機酸類及腦苷和多糖等成分[6-9]。現(xiàn)代研究表明，蒲黃中的黃酮類化合物具有化瘀、抗氧化[10-11]作用、蒲黃具有抗動脈硬化，保護內皮細胞的功效[12]以及干預凝血系統(tǒng)作用[13-14]。為了保證蒲黃的質量，控制飲片中非花粉的數量，《中國藥典》[1]規(guī)定蒲黃中香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量要大于0.5%。但是目前市售蒲黃飲片摻偽現(xiàn)象依然嚴重，導致產品質量參差不齊[15-16]。因此本研究對蒲黃飲片凈制方法進行探討，對篩制后的花粉粒及雜質中香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量進行測定，為蒲黃飲片的質量控制研究提供依據。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（美國Agilent1290）；日立S-4800 型掃描電鏡（日本東京）；MS-105DU 型電子天平（Mettler Toledo，萬分之一）。紗篩購自浙江上虞市道墟張興紗篩廠。

1.2 試藥

蒲黃樣品采集于南京棲霞區(qū)廟山湖南側（118°58′14.39″E，32°04′52.69″N），經南京中醫(yī)藥大學鑒定教研室張瑜副教授鑒定為水燭香蒲。香蒲新苷（Y14S 8H43976）和異鼠李素-3-O-新橙皮苷（H30M3X1）對照品購自源葉生物科技有限公司。乙腈（默克公司，SHBK5734）、甲醇（江蘇漢邦科技有限公司，180975）及磷酸（阿拉丁，C1801089）均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 蒲黃過篩樣品制備

取蒲黃樣品過篩并稱重，花粉過6～8 號篩平均得率分別為98.30%、95.13%和91.57%。

2.2 蒲黃掃描電鏡觀察

蒲黃用FAA 固定液脫水處理后用掃描電鏡檢查，可見蒲黃中混有纖維、植物碎屑以及一些極小的微粒。見圖1。

圖1 蒲黃樣品掃描電鏡

2.3 對照品和供試品溶液的制備

對照品溶液制備方法：分別稱取香蒲新苷及異鼠李素-3-O-新橙皮苷對照品約10 mg，精密稱定后置10 mL 棕色量瓶中，加甲醇定容，既得。供試品溶液制備方法：分別稱取樣品約0.5 g，精密稱定后置于具塞錐形瓶中。精密量取甲醇50 mL 并稱定重量，先冷浸12 h，再加熱回流1 h，放冷后再稱定重量。以甲醇補足缺失的重量，搖勻后過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 蒲黃花粉粒與雜屑中黃酮化合物的含量測定

2.4.1 色譜條件 采用PRAZIS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈（A）-0.05%磷酸（B）為流動相梯度洗脫。梯度設置為0～5 min，5.0%～14.0%A；5～10 min，14.0%～32.0%A；10～15 min，31.5%A；15～40 min，31.5%～45.0%A；40～43 min，45.0%～5.0%A；43～46 min，5.0%A。流速設置為1.0 mL/min，柱溫設置為30℃，進樣量為10 μL。

2.4.2 系統(tǒng)適用性試驗 分別吸取對照品溶液及供試品溶液按以上“2.4.1”中色譜條件進行測定。實驗結果表明在供試品溶液的色譜圖中，出現(xiàn)與對照品相同位置的峰，且組分之間分離較好。見圖2。測試的供試品溶液理論塔板數按異鼠李素-3-O-新橙皮苷計不低于5000。

2.4.3 線性關系考察 精密稱取各對照品，分別制備成濃度為48.10、30.96 μg/mL 的香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷母液。再分別吸取以上各母液25、50、100、200、400 μL 至2 mL 容量瓶中，加甲醇溶液至刻度定容。密塞，搖勻后按“2.4.1”中色譜條件進行測定。各對照品濃度設為橫坐標X，將峰面積設為縱坐標Y得出標準曲線。香蒲新苷的回歸方程為Y=11.665X-3.0371，r=0.9998；異鼠李素-3-O-新橙皮苷回歸方程為Y=14.729X-2.4082，r=0.9998。香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷分別在0.7516～48.1000 μg/mL和0.4338～30.9600 μg/mL 濃度范圍內與其峰面積呈現(xiàn)出較好的線性關系。

圖2 蒲黃及過篩雜質的高效液相色譜圖

2.4.4 精密度試驗 取同一蒲黃供試品溶液，按上述“2.4.1”中色譜條件測定6 次，分別計算香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面積，結果以上2 種成分的RSD 分別為0.71%和0.75%，表明儀器精密度良好。對照品的檢測限分別為0.1259 μg/mL 和0.3788 μg/mL；定量限分別為0.3223 μg/mL 和0.0252 μg/mL。

2.4.5 重復性試驗 取同一批蒲黃按上述供試品溶液制備的方法制備。吸取樣品，重復測定6 次，計算其中香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面積。結果香蒲新苷平均含量為3.72 mg/g，RSD 為0.82%，異鼠李素-3-O-新橙皮苷為2.99 mg/g，RSD 為1.07%，表明此方法重復性較好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗 在室溫條件下，按上述色譜條件對蒲黃樣品進行測定，分別于0、2、4、6、12 h 計算香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面積，結果RSD分別為0.64%和0.59%，表明蒲黃樣品溶液在12 h 內穩(wěn)定性良好。

2.4.7 加樣回收率試驗 精密稱取蒲黃同一批次樣品6 份，每份取樣量約為0.25 g，按前述供試品溶液制備的方法，分別精密加入已知量的對照品，進行加樣回收實驗。見表1。

表1 加樣回收測定結果

2.4.8 樣品含量測定 精密稱取三批樣品按照“2.3”中供試品溶液的制備方法以及上述“2.4.1”中色譜條件測定，每批樣品測定3 次，計算其中所含香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量。見表2。

2.3 討論

蒲黃在采收、制備時會混有雌花序、花蕊等雜質，常有細小雜質[17]。目前飲片市場中的蒲黃飲片，常混有花絲及纖維的混合物，存在著不合格產品[18-19]。由于蒲黃飲片中參入雜質較多，影響了顏色，有些飲片又參入了一些染色劑[20-21]。在本實驗中，所檢測樣品中除花粉粒外，還有纖維導管及花絲、苞片等植物碎片。在這些碎片上，還可以觀察到黏附的一些微小顆粒狀物質。由于6～8 號篩的孔徑遠大于花粉粒直徑，可篩除花粉粒中混雜的植物碎片。從含量測定結果可以看出，樣品過篩后，黃酮類化合物含量顯著增高。其中，過7 號篩后香蒲新苷等化合物的含量最高，原因可能是在過8 號篩時，有一部分花粉粒黏附到雜質上，造成損失。同時，本研究對過篩后的雜質進行了含量測定，結果表明，雜質中也含有一些黃酮類成分。

表2 過篩后花粉粒及雜質中黃酮化合物含量（n=3）

研究表明，蒲黃飲片造假主要是添加非藥用部位，一般通過7 號篩能去除絕大部分雜質[22]。評價蒲黃飲片及其復方制劑品質的方法主要是測定其中的黃酮苷類化合物[23-24]。在蒲黃炒炭的加熱炮制的過程中，可以通過熱力動力學對炮制工藝進行設定[25]。但是由于花粉壁與植物纖維等組成不同，受熱分解的溫度有差異，所以蒲黃中的非藥用部位對炮制也有影響，造成炮制品質量不穩(wěn)定。

本研究結果表明，所測定樣品中黃酮類成分符合藥典的規(guī)定。但是，經過進一步過篩凈制，黃酮化合物含量顯著增加。所以，過篩對蒲黃飲片質量控制具有重要意義。