尿液病毒載量檢測對先天性巨細(xì)胞病毒感染診斷及病情評估的價值分析

邱銳琴，吳小波，杜志云，曹沐琳，喬 木，姚文秀

(1.秦皇島市第一醫(yī)院 新生兒科,河北 秦皇島066000；2.秦皇島市第一醫(yī)院 兒一科,河北 秦皇島066000)

人巨細(xì)胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)的感染性非常強(qiáng)，特別在免疫力下降的人群中，該病毒的感染率更強(qiáng)[1]。嬰幼兒一旦感染HCMV，可引起全身多臟器的損害，表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩、小頭畸形、智力低下、黃疸、肝脾腫大、聽力及視力障礙等。嚴(yán)重者甚至肝衰竭而死亡。多數(shù) HCMV感染者沒有特異性的臨床癥狀而成為潛在 感染狀態(tài)，須結(jié)合實驗室才能確診。對于大多數(shù)先天性HCMV感染的嬰幼兒患者，語言表達(dá)困難，在很大程度上使得患兒臨床診斷難度增加。基于臨床特征聯(lián)合實驗室檢驗指標(biāo)輔助檢查，對病情評估以及臨床轉(zhuǎn)歸情況預(yù)測等均具有積極的促進(jìn)作用。尿液病毒載量檢測，能夠?qū)CMV患兒的感染情況進(jìn)行準(zhǔn)確、靈敏地予以反映，可早期提示患兒病情的程度[3]。本研究主要探討了尿液病毒載量在先天性HCMV感染診斷及病情評估中的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年6月至2019年6月期間秦皇島市第一醫(yī)院收治的82例HCMV感染患兒作為研究對象。利用 ELISA或其他改良技術(shù)測患兒血清中抗 CMV-IgG和抗 CMV-IgM。其結(jié)果判斷如下[2]:①抗 CMV-IgG(+),表明有CMV感染,但6個月內(nèi)的嬰兒需排除胎傳抗體。如從陰性轉(zhuǎn)為陽性則表明原發(fā)感染,雙份血清抗體滴度≥4倍表明活動性感染,嚴(yán)重免疫缺 陷可出現(xiàn)假陰性；②抗CMV-IgM(+)表明活動性感染。按照HCMV病毒載量檢測結(jié)果中位數(shù)(1.13×104copy/mL)，將其分為高病毒載量組(n=38)與低病毒載量組(n=44)。高病毒載量組38例患兒中，男23例，女15例；月齡2-3個月，平均(2.25±0.20)個月；HCMV載量平均值：(2.33±0.40)×105copy/mL。低病毒載量組44例患兒中，男27例，女17例；月齡2-3個月，平均(2.31±0.22)個月；HCMV載量平均值：(6.09±0.43)×103copy/mL。兩組嬰兒在性別及月齡方面的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肺炎支原體、腺病毒、風(fēng)疹病毒以及腸道病毒71型、柯薩奇病毒等病毒感染患兒；②排除血液系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)疾病患兒；③除外外耳、中耳畸形、急性中耳炎、家族耳聾病史、耳毒性藥物用藥史以及其他可致聽力損失的因素；④除外膽道閉鎖等；⑤臨床資料不完整患兒。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，參與者對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

取5.0 ml患者尿液標(biāo)本，使用PCR儀(9700型)對尿液中的HCMV病毒DNA載量進(jìn)行檢測分析。具體方法如下：HCMV核酸定量PCR由本院檢驗科完成。核酸擴(kuò)增儀采用美國PE 公司的ABI7300 實時熒光定量PCR 儀。采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供的HCMV熒光PCR定量試劑；采集嬰兒晨尿尿樣3 ml，尿液標(biāo)本12 000 r/min離心5 min，沉淀加50 μl DNA 提取液打勻;100℃恒溫處理10 min(誤差不超過1min)，12 000 r/min離心5 min，取上清液(含病毒DNA)2 μl做PCR擴(kuò)增。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1高、低病毒載量組患兒臨床特征發(fā)生情況對比 比較高、低病毒載量組患兒咳嗽、黃疸、肝臟腫大及脾臟腫大膽汁淤積及聽力損失的發(fā)生率。

1.3.2高、低病毒載量組患兒生化指標(biāo)水平對比 采用全自動生化分析儀(日本HITACHI7020型)對患兒尿液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)、總膽汁酸(Total Bile Acid，TBA)、乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase，LD)、乳酸脫氫酶同工酶(Lactate Dehydrogenase Isoenzyme，LDH)、肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme，CK-MB)以及C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)水平。嚴(yán)格按照試劑盒上的說明書進(jìn)行操作。

1.3.3高、低病毒載量組患兒臨床轉(zhuǎn)歸情況對比 包括：兩組患兒聽力損失及熱退時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 高、低病毒載量組患兒臨床特征發(fā)生情況對比高、低病毒載量組患兒咳嗽、黃疸、肝臟腫大及脾臟腫大發(fā)生率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，高病毒載量組膽汁淤積及聽力損失發(fā)生率均分別顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)，見表1。

表1 高、低病毒載量組患兒臨床特征發(fā)生情況比較[n(%)]

2.2 高、低病毒載量組患兒生化指標(biāo)水平對比兩組患兒除了ALT、AST及CRP水平差異均無顯著統(tǒng)計學(xué)意義外，其余各項指標(biāo)(TBA、LD、LDH及CK-MB)水平，高病毒載量組顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)，見表2。

表2 高、低病毒載量組患兒生化指標(biāo)水平比較

2.3 高、低病毒載量組患兒臨床轉(zhuǎn)歸情況對比高病毒載量組聽力損失及住院時間均分別顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)，見表3。

表3 高、低病毒載量組患兒臨床轉(zhuǎn)歸情況比較

3 討論

目前，HCMV病毒感染后嬰幼兒最為常見的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，疾病發(fā)病程度輕重不一，病情評估難度較大。對于HCMV病毒感染的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，一般需要滿足咳嗽、眼瞼水腫、肝臟腫大及脾臟腫大等方面的臨床癥狀，另外還需要開展實驗室相關(guān)指標(biāo)作為輔助檢查依據(jù)。當(dāng)前，臨床上有很多方法對HCMV感染疾病進(jìn)行檢查與診斷，然而這些方法檢測率均偏低，且假陽性發(fā)生率高[4,5]。牟文鳳[6]研究結(jié)果顯示：尿液HCMV病毒載量陽性檢測率較高，其能夠更好地適合疑似HCMV感染的嬰幼兒診斷之中。由此可以得知，應(yīng)該選擇一種有效的檢測方法，從而提高HCMV感染嬰幼兒的診斷率。

熒光定量PCR技術(shù)是臨床檢測HCMV病毒載量最為可靠以及靈敏度最高的檢測技術(shù)，可以對嬰幼兒受感染情況加以反映，結(jié)合HCMV病毒載量水平的高低，能夠?qū)κ芨腥镜膵胗變旱牟∏檫M(jìn)行準(zhǔn)確地評估[7-9]。本研究方案中，主要采用向尿液中加入乙二胺四乙酸二鉀(Dipotassium ethylenediaminetetraacetate，EDTA-K2)，將熒光定量PCR法用于尿液病毒載量檢測之中。HCMV病毒感染嬰幼兒常存在咳嗽、肝臟腫大及脾臟腫大等臨床特征[10]。本研究結(jié)果表明：高、低病毒載量組患兒咳嗽、黃疸、肝臟腫大及脾臟腫大發(fā)生率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，高病毒載量組膽汁淤積及聽力損失發(fā)生率均分別顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)。上述結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報道結(jié)果相符[11-13]。徐福勝等[14]研究結(jié)果顯示：患兒存在異型淋巴細(xì)胞數(shù)量攀升等情況，表明患兒存在HCMV病毒感染的可能性。隨著HCMV病毒載量水平升高，患兒的臨床癥狀也變得更為顯著，其能夠在尿液中加以體現(xiàn)。患兒在感染HCMV病毒之后，病毒會對相關(guān)臟器具有浸潤效果，從而使得全身臟器出現(xiàn)病理學(xué)變化，進(jìn)而使得相關(guān)臨床癥狀以及實驗室指標(biāo)出現(xiàn)改變[15,16]。本研究結(jié)果顯示：兩組患兒除了ALT、AST及CRP水平差異均無顯著統(tǒng)計學(xué)意義外，其余各項指標(biāo)(TBA、LD、LDH及CK-MB)水平，高病毒載量組顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)。此結(jié)果提示：隨著HCMV病毒載量地逐漸增大，表征患兒肝功能以及心臟功能的相關(guān)生化指標(biāo)水平也隨之而上升。本研究結(jié)果還顯示：高病毒載量組聽力損失及住院時間均分別顯著高于低病毒載量組(P均<0.05)，上述結(jié)果提示：HCMV病毒載量水平會對患兒臨床轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生重要影響。