1型糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞電重塑及AGE對(duì)其的影響

鄭丹琳，劉沛明，張 利，周夢(mèng)園，曾 鵬，李穗敏，秦曉玥，梁海丹，鄺素娟，楊 慧，饒 芳，鄧春玉,3,4

(1. 華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640； 2. 廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)醫(yī)學(xué)研究部臨床藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510080；3. 華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510640；4. 廣東省心血管病研究所心血管內(nèi)科，廣東 廣州 510080)

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是胰島素抵抗或胰島素分泌絕對(duì)不足引起的慢性代謝疾病，常伴有多飲、多食、多尿、體重減輕以及視力模糊等臨床特征。由于久坐、壓力、高脂飲食等不良生活方式，全世界約有1.4億人患糖尿病，預(yù)計(jì)到2025年，糖尿病人數(shù)將達(dá)3億[1]。目前研究成果主要基于2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制及其并發(fā)癥的研究，對(duì)1型糖尿病研究較少。1型糖尿病是由于胰腺β細(xì)胞丟失，胰島素分泌不足，導(dǎo)致低胰島素血癥和高血糖，是青少年中最常見(jiàn)的糖尿病類(lèi)型，約占全球糖尿病人口的10%，且比例逐年增加[2]。

糖尿病是心肌梗死、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化等各種心血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素，與心血管疾病發(fā)生率和死亡率增加有關(guān)。心房顫動(dòng)是臨床上糖尿病患者最常并發(fā)的心律失常之一，比例逐年升高，但其具體機(jī)制尚不清楚，臨床防治亟待解決[3]。目前研究表明，心房顫動(dòng)的發(fā)生機(jī)制主要是心房電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)導(dǎo)致的。心房電重構(gòu)在房顫發(fā)生和維持中起著重要作用，主要特征包括心房有效不應(yīng)期縮短，離散度增加以及頻率適應(yīng)性喪失，傳導(dǎo)延遲[4]。已有研究報(bào)道，糖尿病會(huì)影響心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程及復(fù)極時(shí)間，并伴隨著多種離子通道電流改變，促進(jìn)心律失常和心房顫動(dòng)的發(fā)生，但對(duì)糖尿病源性心房顫動(dòng)的具體機(jī)制尚未完全闡明[5-6]。HL-1細(xì)胞來(lái)源AT-1小鼠心房粘液瘤組織，一種具有保持分化的心臟表型的同時(shí)持續(xù)分裂和自發(fā)收縮的心肌細(xì)胞系，目前已被廣泛用于研究正常或病理狀態(tài)下的心房肌細(xì)胞功能[7]。晚期糖基化終末產(chǎn)物(advance glycation end products，AGE)是糖尿病患者代謝異常中產(chǎn)生的重要代謝產(chǎn)物，參與糖尿病的病理生理過(guò)程。本研究以1型糖尿病小鼠和HL-1細(xì)胞為研究對(duì)象，探討1型糖尿病小鼠心房肌動(dòng)作電位時(shí)程(action potential duration，APD)和L型鈣通道(L-type calcium channel，ICa,L)、瞬時(shí)外向鉀離子通道(transient outward K+channel，Ito)、超快速延遲整流鉀通道(ultra-rapid delayed rectifier K+channel，Ikur)電流的變化，以及AGE參與HL-1心房肌細(xì)胞電重塑機(jī)制研究。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)，7-8周齡♂ C57BL/6 小鼠，共30只，購(gòu)自江蘇集萃藥康生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(蘇)2018-0008，飼養(yǎng)于華南理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，恒溫(22±2)℃，恒濕(55±5)%，人工光照明暗各12 h·d-1，噪聲<50 dB，24 h自由取食和飲水。本研究所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已通過(guò)廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查(No.GDREC201208A)。

1.2 試劑與儀器Advatage血糖儀和血糖檢測(cè)試紙(德國(guó)Roche公司)；Langendorff恒流灌流裝置；倒置顯微鏡(德國(guó)AXIO公司)；MultiClamp700B膜片鉗放大器、Digidata 1440A數(shù)模轉(zhuǎn)換器、pCLAMP 10.2數(shù)據(jù)采集分析軟件(美國(guó)AXON公司)；MP-285型微電動(dòng)操縱器、P97型玻璃微電極拉制儀(美國(guó)Sutter公司)；蛋白電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(北京市六一儀器廠)；AGEs-BSA(Biovision公司,5F24L22210)；Anti-RAGE(Abcam公司，GR3221250-8)；兔抗AGE抗體、兔抗Kv1.5抗體、兔抗Kv4.3抗體、兔抗Cav1.2抗體(Cell Signaling Technology公司)；抗GAPDH鼠多克隆抗體(Proteintech公司)；CLAYCOMB培養(yǎng)基、胎牛血清(Bioscience公司)；HEPES-Na(SLBT 3849)、MEM(SLBZ3996)、膠原酶Ⅱ(V900892-1G)、鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，100 M1227V)(Sigma公司)。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)溶液無(wú)鈣灌流液(mg·L-1)：1 MEM，2.6 HEPES-Na，0.9 NaHCO3，用NaOH將PH調(diào)至7.35；酶解消化液(g·L-1)：1 BSA，0.5膠原酶Ⅱ(使用時(shí)用無(wú)鈣灌流液配置)。

動(dòng)作電位細(xì)胞外液包含(mmol·L-1)：145 NaCl，4 KCl，1 MgCl2，1.8 CaCl2，10 HEPES，用NaOH將pH調(diào)至7.4；電極內(nèi)液包含(mmol·L-1)：140 KCl；1 MgCl2·6H2O；10 HEPES；5 EGTA；5 Na2-ATP，用KOH將pH調(diào)至7.2。

記錄Ito電流時(shí)，細(xì)胞外液(mmol·L-1)包含：140 NaCl，4 KCl，1 MgCl2，10 HEPES，2 CaCl2，10葡萄糖，0.5 CdCl2，用NaOH使pH調(diào)至7.4；電極內(nèi)液(mmol·L-1)包含：140 KCl，1 MgCl2·6H2O，10 HEPES，5 EGTA，5 Na2-ATP，用KOH將pH調(diào)至7.2。

記錄ICa,L電流時(shí)，細(xì)胞外液成份為(mmol·L-1)：140 TEA-Cl，5 CaCl2，2 MgCl2，10 HEPES，10葡萄糖，用CsOH將pH調(diào)至7.4；電極內(nèi)液使用高Cs溶液(mmol·L-1)：100 CsCl，20 TEA-Cl，5 Na2ATP，0.4 Na2GTP，10 EGTA，10 HEPES，用Tris將pH調(diào)至7.2。

記錄Ikur電流時(shí)，細(xì)胞外液(mmol·L-1)包含：5.4 KCl,1 MgCl2·6H2O，136 NaCl，0.33 NaH2PO4，10 HEPES，2 CaCl2·2H2O，10 葡萄糖·H2O，0.3 CdCl2，0.5 BaCl2，用NaOH將pH調(diào)至7.4；電極內(nèi)液(mmol·L-1)包含：140 KCl，1 MgCl2·6H2O，10 HEPES，5 EGTA，5 Na2-ATP，用KOH將調(diào)節(jié)pH至7.2。

KB液成份為(mmol·L-1)：50 K-谷氨酸，20 KOH，40 KCl，20 KH2PO4，20牛磺酸，10葡萄糖·H2O，3 MgCl2·6H2O，0.5 EGTA，10 HEPES，20 KOH，用NaOH將pH調(diào)至7.4，分裝至50 mL離心管，- 80 ℃冰箱保存。

2 方法

2.1 1型糖尿病動(dòng)物模型的構(gòu)建9周齡小鼠連續(xù)5 d腹腔注射STZ溶液(50 mg·kg-1體質(zhì)量)，同時(shí)對(duì)照組注射等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH值4.2-4.5)。1周后測(cè)定隨機(jī)血糖≥16.7 mmol·L-1，確定1型糖尿病模型建立成功[8]。10周后，分離心房肌細(xì)胞，記錄動(dòng)作電位及離子通道電流密度；部分動(dòng)物留取心房肌組織檢測(cè)AGE、RAGE及離子通道蛋白表達(dá)，比較對(duì)照組和糖尿病組小鼠的差異。

2.2 HL-1心房肌細(xì)胞的培養(yǎng)HL-1細(xì)胞(小鼠心房肌細(xì)胞株)是從路易斯安那州立大學(xué)健康科學(xué)中心的William Claycomb教授實(shí)驗(yàn)室獲得的。細(xì)胞在Claycomb培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加10%胎牛血清、2 mmol·L-1谷氨酰胺、100 μmol·L-1去甲腎上腺素，在預(yù)先涂有纖維連接蛋白和0.2 g·L-1明膠的培養(yǎng)瓶上培養(yǎng)，然后在37 ℃，5 % CO2的培養(yǎng)箱下孵育。每48 h換液1次。當(dāng)細(xì)胞密度長(zhǎng)到60 %時(shí)，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行加藥處理。

2.3 Western blot技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)頸椎脫臼處死小鼠，剪開(kāi)胸腔并且用PBS溶液清洗心臟后，留取左右心耳組織，儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱。提取組織時(shí)從冰箱取出心房肌組織，放進(jìn)冰上加入適量含有蛋白酶抑制劑的中性裂解液，UP200S超聲粉碎儀在冰上對(duì)組織進(jìn)行超聲粉碎30 s后，4 ℃ 12 000 r·min-1離心15 min，上清即為組織蛋白。BCA法測(cè)定蛋白濃度。利用中性裂解液及上樣緩沖液(4X loading buffer)調(diào)至蛋白濃度相等，100 ℃變性10 min，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜，5 %脫脂牛奶封閉1 h，一抗(1 ∶1 000)4 ℃ 搖床孵育過(guò)夜；常溫?fù)u床孵育二抗(以1 ∶10 000的比例稀釋于5%脫脂奶粉的TBST)1 h。最后用ECL試劑盒顯影蛋白條帶，ImageJ圖像分析軟件分析目的蛋白及內(nèi)參蛋白的灰度值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.4 小鼠心房肌細(xì)胞全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)小鼠用頸椎脫臼法處死，迅速開(kāi)胸取出心臟，在體視顯微鏡下，行主動(dòng)脈逆行插管，固定在Langendorff恒流灌流裝置上，對(duì)離體心臟進(jìn)行逆行灌流，采用酶解法分離小鼠單個(gè)心房肌細(xì)胞。37 ℃預(yù)溫灌流液和含酶消化液，先用灌流液灌流心臟約10 min，而后用含酶消化液灌流30 min左右，直到組織結(jié)構(gòu)變疏松，滴出的液體呈拉絲狀，剪取左右心耳組織，置于KB液中剪碎，毛細(xì)吸管輕柔吹打至細(xì)胞分散，室溫靜置10 min, 棄上清，用KB液重懸，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

采用MultiClamp 700B放大器的全細(xì)胞膜片鉗記錄單個(gè)心房肌細(xì)胞的相關(guān)指標(biāo)。顯微鏡下選取橫紋清晰、貼壁良好的單個(gè)心肌細(xì)胞，使用MP-285三維操縱器使電極進(jìn)入細(xì)胞外液，測(cè)試電極電阻為2～5 MΩ為合格，可繼續(xù)用于實(shí)驗(yàn)。電極接觸細(xì)胞后，輕吸細(xì)胞膜形成GΩ封接破膜。電流幅度穩(wěn)定后進(jìn)行補(bǔ)償，按照參數(shù)設(shè)置分別記錄各電流。使用Digidata 1440A數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)，用MultiClamp 700B放大器記錄電流信號(hào)并存儲(chǔ)在計(jì)算機(jī)上。GraphPad Prism 8用于離子通道電流密度、復(fù)活曲線、失活曲線、APD曲線擬合，計(jì)算動(dòng)作電位振幅(APA)、復(fù)極50%、90%電位時(shí)程(APD50、APD90)。

3 結(jié)果

3.1 1型糖尿病小鼠模型的構(gòu)建對(duì)照組和模型組小鼠分別注射等量溶劑及STZ一周后，與對(duì)照組小鼠(5.18±1.55 mmol·L-1，n=15)相比，糖尿病小鼠血糖值(27.61±4.55 mmol·L-1，n=14)均明顯上升(P<0.01)，成模率93.33 %，提示糖尿病模型構(gòu)建成功。繼續(xù)觀察飼養(yǎng)至20周，糖尿病小鼠出現(xiàn)“多飲、多食、多尿”體征，隨機(jī)血糖水平(26.76±6.0 mmol·L-1，n=13)明顯升高(P<0.01)。

3.2 糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程的變化與對(duì)照組小鼠相比，糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD)明顯延長(zhǎng)，APA(88.42±11.09 mVvs91.80±2.28 mV，n=7)無(wú)明顯變化(P>0.05)(見(jiàn)Fig 1A、B)；APD50(15.39±5.54 msvs36.60±11.74 ms)、APD90(59.45±12.41 msvs130.83±21.52 ms)均明顯增加(n=8，P<0.01)(見(jiàn)Fig 1C、D)。

3.3 糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ito及心房組織Kv4.3蛋白表達(dá)的變化與對(duì)照組相比，糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ito電流密度明顯低于對(duì)照組(在+60 mV時(shí)，分別為(11.54±3.19) pA/pFvs(5.54±1.91) pA/pF，n=7～10)(P<0.01)(見(jiàn)Fig 2A)。如Fig 2B、Fig 2C激活/失活及復(fù)活曲線所示，Ito的激活及復(fù)活動(dòng)力學(xué)無(wú)明顯差異(激活曲線V0.5分別為(21.10±11.44) mVvs(21.84±9.86) mV；Slope值為(21.68±7.29) mVvs(18.81±5.10) mV，復(fù)活曲線τ值分別為(31.98±14.89) msvs(29.09±10.43) ms，n=8～11)(P>0.05)，但失活加快(失活曲線Slope值分別為(-4.40±1.04) mVvs(-9.32±2.78) mV，n=9～10)(P<0.01)。與對(duì)照組相比，糖尿病心房組織中Kv4.3蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)(0.88±0.17vs0.38±0.27，n=6)(P<0.01，見(jiàn)Fig 2D)。

3.4 糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ikur及心房組織Kv1.5蛋白表達(dá)的變化糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ikur電流密度與對(duì)照組相比明顯降低(在+60 mV時(shí)，分別為(8.48±2.32) pA/pFvs(5.28 ±1.39) pA/pF，n=7～8)(P<0.01)(見(jiàn)Fig 3A)。與對(duì)照組相比，糖尿病心房肌組織中Ikur主要的編碼蛋白Kv1.5表達(dá)水平明顯降低(0.79±0.11vs0.33±0.21，n=6)(P<0.01，見(jiàn)Fig 3B)。

Fig 1 APD of atrial myocytes isolated from control and diabetic groups

Fig 2 Effect of Ito and related protein expression of atrial myocytes in atriums of diabetic mice

Fig 3 Effect of IKur and related protein expression of atrial myocytes in atriums of diabetic mice

3.5 糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞ICa,L及心房組織Cav1.2蛋白表達(dá)的變化糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞ICa,L電流密度明顯低于對(duì)照組(在+10 mV時(shí)，對(duì)照及糖尿病小鼠ICa,L分別為(-1.87±0.26) pA/pFvs(-1.26±0.24) pA/pF，n=9～10)(P<0.01)，其激活電位、鋒電位、翻轉(zhuǎn)電位無(wú)明顯影響(見(jiàn)Fig 4A)。如Fig 4B、C激活/失活及復(fù)活曲線所示,ICa,L的激活及復(fù)活動(dòng)力學(xué)無(wú)明顯差異(激活曲線V0.5分別為(-12.64±5.16) mVvs(-14.06±6.64) mV；激活曲線Slope值為(8.28±2.15) mVvs(9.55±3.67) mV；復(fù)活曲線τ值分別為(65.48±13.87) msvs(78.85±3.79) ms；n=5～16)(P>0.05)，但失活加快(失活曲線V0.5分別為(-36.17±4.08) mVvs(-41.72±4.27) mV；Slope值為(-6.28±1.88) mVvs(-8.22±1.77) mV，n=15)(P<0.01)。與對(duì)照組相比，糖尿病小鼠心房肌組織中Cav1.2蛋白的表達(dá)水平明顯降低(0.97±0.06vs0.40±0.11，n=6)(P<0.01，見(jiàn)Fig 4D)。

3.6 T1DM心房肌組織AGE、RAGE蛋白表達(dá)變化以及AGE對(duì)HL-1細(xì)胞通道蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組小鼠相比，糖尿病小鼠心房肌組織晚期糖基化終末產(chǎn)物及其受體(AGE及RAGE)蛋白表達(dá)明顯積累(0.64±0.20vs0.95±0.23；0.87±0.12vs1.08±0.19，n=6/7)(P<0.05，見(jiàn)Fig 5A)。與BSA組相比，AGE ( 0.4 g·L-1)處理HL-1細(xì)胞能明顯降低離子通道蛋白Cav1.2、Kv4.3及Kv1.5的表達(dá)水平(分別為0.67±0.11vs0.37±0.14，0.85±0.03vs0.43±0.09，0.84±0.13vs0.56±0.10，n=3)(P<0.05)；與AGE組相比，Anti-RAGE(2 mg·L-1)預(yù)處理HL-1細(xì)胞明顯上調(diào)離子通道蛋白表達(dá)(分別為0.37±0.14vs0.86±0.09，0.43±0.09vs0.60±0.01，0.56±0.10vs0.77±0.08，n=3)(P<0.05)(見(jiàn)Fig 5B)，提示晚期糖基化終末產(chǎn)物與其受體相互作用，參與糖尿病心房肌細(xì)胞電重塑。

4 討論

心房電重構(gòu)在房顫發(fā)生和維持起著重要作用，糖尿病病變損傷引起的離子通道電流的變化，進(jìn)而影響心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程。臨床研究表明，糖尿病患者心房傳導(dǎo)減慢，傳導(dǎo)異質(zhì)性改變，動(dòng)作電位時(shí)程明顯延長(zhǎng)[4]。目前糖尿病相關(guān)的電生理改變大多集中于心室肌的研究，對(duì)心房肌的研究相關(guān)報(bào)道極少。本研究結(jié)果顯示，STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病小鼠動(dòng)作電位時(shí)程延長(zhǎng)，APD50，APD90與對(duì)照組相比明顯延長(zhǎng)，動(dòng)作電位振幅(APA)則未見(jiàn)明顯差異，這是多種離子通道電流相互作用的結(jié)果，糖尿病心房肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程的延長(zhǎng)導(dǎo)致糖尿病相關(guān)的心房顫動(dòng)發(fā)生。

ICa,L電流是動(dòng)作電位平臺(tái)期的主要復(fù)極內(nèi)向電流，參與心肌細(xì)胞的收縮。臨床研究發(fā)現(xiàn)，與竇性心律患者相比，慢性房顫患者心房肌細(xì)胞ICa,L電流和Cav1.2蛋白表達(dá)均降低，ICa,L通道數(shù)量減少可能是慢性房顫患者心房電重構(gòu)的基礎(chǔ)[9]。以往研究發(fā)現(xiàn)，藥物或轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)的不同種屬的糖尿病動(dòng)物心房肌細(xì)胞傳導(dǎo)減慢，心房肌細(xì)胞的Ca2+調(diào)節(jié)受損，但I(xiàn)Ca,L通道電流變化研究報(bào)道不一[10-11]。本研究結(jié)果提示，STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞ICa,L電流密度明顯降低，編碼蛋白Cav1.2表達(dá)水平明顯下調(diào)；其激活、復(fù)活曲線動(dòng)力學(xué)無(wú)明顯差異，但失活加快，提示糖尿病小鼠在通道動(dòng)力學(xué)功能方面也有部分改變，參與糖尿病小鼠心房顫動(dòng)。

Fig 4 Effect of ICa,L and related protein expression of atrial myocytes in atriums of diabetic mice

Fig 5 Expression of AGE and RAGE proteins in diabetic mice and channel proteins in HL-1 cells induced by AGE/Anti-RAGE

Ito是心房肌細(xì)胞早期復(fù)極的主要離子流，在動(dòng)作電位1相及2相復(fù)極中起作用。糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞離子通道的研究主要集中在小電導(dǎo)鈣激活鉀通道及鈉通道電流[12-13]，對(duì)心房肌細(xì)胞主要的復(fù)極電流Ito的研究較少。本研究結(jié)果提示，糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ito電流密度明顯降低，相關(guān)蛋白Kv4.3表達(dá)明顯低于對(duì)照組；其激活及復(fù)活曲線無(wú)明顯變化，但失活加快。

IKur在大多數(shù)物種中僅出現(xiàn)于心房肌細(xì)胞中，是一種心房特異性電流，也是治療房性心律不齊的主要靶標(biāo)[14]。目前，Ikur與房顫相關(guān)的研究逐漸引起廣泛關(guān)注，但關(guān)于房顫與Ikur重塑的研究結(jié)果不一。與竇律患者相比，慢性房顫患者Ikur電流及Kv1.5蛋白表達(dá)均降低；然而，也有研究表明Ikur及Kv1.5蛋白表達(dá)在房顫過(guò)程中并未改變[15-16]。本研究結(jié)果提示，糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞Ikur電流密度與對(duì)照組相比明顯降低，主要的編碼蛋白Kv1.5表達(dá)明顯低于對(duì)照組。

然而，糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞離子通道的改變機(jī)制還不清楚。晚期糖基化終末產(chǎn)物AGE及其受體RAGE蛋白表達(dá)水平在糖尿病患者體內(nèi)明顯積累，參與心律失常并發(fā)癥的發(fā)生[17]；既往研究表明，高糖能誘導(dǎo)HL-1心房肌細(xì)胞AGE和ROS的生成，以及動(dòng)作電位時(shí)程延長(zhǎng)[18]，但目前關(guān)于AGE與HL-1細(xì)胞主要通道蛋白作用機(jī)制尚不明確。本研究結(jié)果表明，1型糖尿病小鼠心房肌組織AGE、RAGE蛋白表達(dá)水平明顯增加。隨后，在細(xì)胞層面上，采用Anti-RAGE預(yù)處理HL-1細(xì)胞結(jié)果提示，糖尿病可通過(guò)晚期糖基化終末產(chǎn)物及其受體直接作用于細(xì)胞導(dǎo)致心房肌細(xì)胞通道相關(guān)編碼蛋白Cav1.2、Kv4.3及Kv1.5表達(dá)水平出現(xiàn)改變，這為臨床上治療糖尿病心房顫動(dòng)提供了潛在治療靶點(diǎn)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病小鼠心房肌細(xì)胞晚期糖基化終末產(chǎn)物及其受體明顯積累，動(dòng)作電位時(shí)程明顯延長(zhǎng)，ICa,L、Ito及Ikur電流密度明顯下調(diào)，Ito、ICa,L失活動(dòng)力學(xué)加快，同時(shí)伴通道編碼蛋白Cav1.2、Kv4.3、Kv1.5表達(dá)降低；另外，RAGE拮抗劑預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)AGE誘導(dǎo)HL-1細(xì)胞離子通道蛋白表達(dá)下調(diào)。但在動(dòng)物模型上，糖尿病是否能通過(guò)AGE導(dǎo)致離子通道電流發(fā)生改變，有待進(jìn)一步闡明。闡明上述相關(guān)機(jī)制將進(jìn)一步明確AGE/RAGE與糖尿病心房顫動(dòng)的關(guān)系，為預(yù)防和治療糖尿病心房顫動(dòng)的發(fā)生發(fā)展提供了新的理論依據(jù)。