IL-8基因多態性對α-2b干擾素治療毛細支氣管炎療效的影響

徐 杰，吳建祥，陳 偉，吳嘉晟，芮 強

0 引言

毛細支氣管炎是嬰幼兒時期高發的呼吸系統疾病，研究發現[1]，呼吸道合胞病毒誘發的毛細支氣管炎患兒血清白細胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)水平異常升高，且其可促進中性粒細胞在呼吸道黏膜聚集，激活中性粒細胞釋放溶酶體酶及超氧化物酶，誘發炎性反應。研究顯示，機體IL-8水平由IL-8基因決定，且IL-8基因變異與疾病的發生、治療效果有關[2]。部分多態性位點基因型可通過調控基因表達影響疾病發生與進展[3]，由此可推測呼吸道合胞病毒誘發的毛細支氣管炎的發展和治療效果可能也與IL-8基因部分多態性位點基因型有關。本研究以136例毛細支氣管炎患兒為例，探討IL-8基因多態性對α-2b干擾素治療效果的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2018年6月至2020年6月收治的136例毛細支氣管炎患兒作為研究對象，男72例、女64例;年齡1～3歲，平均(1.76±0.29)歲;病程1～4 d，平均(2.85±0.68)d。納入標準：符合《實用兒科學》[4]中毛細支氣管炎診斷標準；發病至就診時間≤96 h；既往無哮喘病史；患兒監護人簽署知情同意書。

排除標準：入組前有相關藥物治療史者；伴血液和免疫系統疾病者；伴先天肺疾病者；伴嚴重肝腎疾病、全身感染者；伴心臟病、腫瘤者；對治療藥物過敏者；治療依從性差者；治療期間使用其他抗病毒藥物者；早產兒。

在本院同期進行健康體檢的健康兒童中隨機抽取136例作為對照，男76例、女60例;年齡1～3歲，平均(1.85±0.36)歲。近2周內無上呼吸道感染史和喘息史。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 病例組患兒均給予止咳、祛痰、平喘、抗感染、抗病毒等常規治療，采用0.5 mg布地奈德混懸液(瑞典阿斯利康制藥，規格2 ml∶1 mg)、0.1 ml異丙托溴銨溶液(法國Laboratoire Unither，規格：250 μg∶2 ml)進行霧化治療，2次/d;同時霧化吸入1.2 ml重組人干擾素α-2b
注射液(北京凱因科技，規格：3 mIU/0.3 ml)，2次/d，治療時間7 d。

1.2.2 IL-8基因多態性檢測 采用限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)測定IL-8基因多態性位點基因型：入院后采集患兒1 ml外周靜脈血，抗凝后用基因組DNA提取試劑盒(美國Promega)提取白細胞基因組DNA，操作方法按試劑盒要求進行。-251A/T啟動子PCR反應條件：正向引物：TGATTGGCTGGCTTATCTTCA;反向引物：GAGGAAATTCCACGATTTGC。94 ℃下3 min，94 ℃下30 s，59 ℃下30 s，72 ℃下60 s，30個循環;72 ℃下7 min。

1.3 觀察指標

1.3.1 療效標準[4]①控制：患兒治療5 d后體溫轉歸，咳嗽、喘息、哮鳴音等癥狀基本消失;②顯效：治療5 d后體溫有所下降，相關癥狀明顯緩解;③好轉：治療5 d后體溫有所下降但仍存在反復發熱，相關癥狀減輕，偶有喘息發生;④無效：治療5 d后發熱，咳嗽、喘息等癥狀無改善或加重。總有效率=(控制+顯效+好轉)/總例數×100%。

1.3.2 癥狀消失時間 記錄不同基因型患兒的咳嗽消失時間、喘息消失時間、哮鳴音消失時間、體溫恢復正常時間、住院時間。

1.3.3 炎癥相關介質 于治療前、治療7 d后采集3 ml肘靜脈血，3 000 r/min離心15 min，采用ELISA法測定血清人嗜酸粒細胞陽離子蛋白(ECP)、白細胞介素-4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)水平，檢測試劑盒購自森貝伽(南京)生物。

1.3.4 不良反應 患兒治療期間定期觀察生命體征(體溫、心率、呼吸頻率)、血尿常規、肝腎功能、心電圖和胸部X光檢查，記錄患兒新發癥狀、體征或新發主訴不適，計算不良反應發生率。

2 結果

2.1 兩組IL-8基因多態性檢測結果 病例組中AA基因型占比、A等位基因頻率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不同基因型患兒的療效比較 136例患兒中控制64例、顯效30例、好轉16例，總有效率80.88%(110/136)。AA、AT、TT基因型患兒總有效率比較，差異有統計學意義(χ2=7.051,P=0.029)。進一步兩兩比較顯示，AT、TT基因型患兒的總有效率明顯高于AA患兒(P<0.05)，AT和TT基因型患兒比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 不同基因型患兒的癥狀緩解情況 不同基因型患兒的各癥狀緩解時間的整體差異均有統計學意義(P<0.05)。AT和TT患兒的咳嗽消失時間、喘息消失時間、哮鳴音消失時間、體溫恢復正常時間、住院時間明顯短于AA患兒，同時TT患兒短于AT患兒，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.4 不同基因型患兒的炎癥相關介質 不同基因型患兒治療前的血清ECP、IL-4、IFN-γ差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，不同基因型患兒的血清ECP、IL-4均較治療前降低、血清IFN-γ較治療前升高(均P<0.05)。AT和TT患兒治療后的血清ECP、IL-4低于AA患兒，同時TT患兒低于AT患兒;AT和TT患兒治療后的血清IFN-γ高于AA患兒，同時TT患兒高于AT患兒(P<0.05)。見表4。

表1 兩組患兒IL-8基因多態性檢測結果比較[例(%)]

表2 不同基因型患兒的總有效率比較[例(%)]

表3 不同基因型患兒的癥狀緩解情況比較(d)

表4 不同基因型患兒炎癥相關介質比較

2.5 不良反應 治療期間患兒均未見嚴重不良反應，治療未受影響。136例患兒中新發4例發熱、5例腹瀉、3例乏力、4例頭痛、3例肌肉或關節酸痛，不良反應發生率13.97%(19/136)。AA、AT、TT基因型患兒不良反應發生率的差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 不同基因型患兒的不良反應比較(例，%)

3 討論

嬰幼兒呼吸道黏膜抵抗力差，毛細支氣管炎發病率高[5-6]。病毒多由呼吸道黏膜或肺侵入機體，呼吸道黏膜表皮細胞、上皮細胞、肺組織均含豐富Ⅰ型干擾素受體，這是機體對病毒入侵的防御機制[7-8]。基于此，有研究推測，霧化吸入干擾素α可有效抵抗呼吸道病毒感染[9]。

本研究采用α-2b干擾素治療毛細支氣管炎患兒取得了較好的療效，與相關報道結果相符[10]。干擾素α是廣譜抗病毒藥，可與靶細胞膜上受體結合，促使細胞分泌抗病毒蛋白，起到抗病毒效果。研究證實，干擾素α幾乎可抑制及殺滅所有病毒，尤其是RNA病毒[11]。α-2b干擾素屬于干擾素α的一種亞型，具有較高的抗病毒活性，其產生的抗病毒蛋白水平高于其他亞型。有報道，吸入干擾素α-2b霧化液的大鼠肺中含抗病毒活性，給藥24～48 h后干擾素濃度逐漸降低并消失[12]。動物實驗發現，一次性霧化吸入3萬IU的重組干擾素α時，血清抗病毒蛋白濃度大幅升高，可起到直接抗病毒作用[13]。重組干擾素α-2b主要從以下幾個途徑對毛細支氣管炎進行治療：①阻斷病毒活動通路，延緩病毒內基因表達及病毒外殼吸附，激活巨噬細胞、自然殺傷細胞對免疫功能的調控;②阻礙細胞免疫，降低氣道反應性;③與布地奈德發揮協同作用，阻斷相關炎癥介質的分泌[14-15]。研究顯示，重組干擾素α-2b主要成分是糖蛋白，是病毒誘導宿主細胞產生的反應物，會局部作用于病變部位，使病變部位及鄰近細胞對病毒進行抵抗[16]，與本研究結論一致。

IL-8主要由單核細胞、巨噬細胞分泌，可趨化中性粒細胞。毛細支氣管炎的發生與嗜酸性粒細胞浸潤為主的多種炎性遞質的參與有關，包括IL-8的產生和分泌，這是IL-8基因多態性影響疾病進展和治療效果的理論基礎[17-18]。研究顯示，在IL-8基因啟動子及編碼區存在多個單核苷酸多態性位點，影響某些疾病的發病過程和進展，受到臨床關注[19]。研究發現，人IL-8基因位于染色體4q12-q21，IL-8基因啟動子-251位點的基因多態性可通過對炎癥因子的合成過程中轉錄等環節的調控影響支氣管炎相關炎性因子合成和表達，從而影響疾病進展和療效[20]。

本研究對136例患兒IL-8-251位點的基因多態性進行檢測，與健康對照組相比，支氣管炎患兒的基因型頻率中AA基因型的占比和A等位基因頻率分別達和23.53%和52.94%，高于對照組7.35%和33.82%，表明IL-8-251位點的基因多態性與呼吸道合胞病毒誘發的毛細支氣管炎的發生有關，考慮與基因多態性會影響遺傳易感性有關，AA基因型兒童的遺傳易感性更高，因此發病風險更高。此外，不同基因型患兒的療效也有較大差異，具體表現為AA基因型患兒的總有效率最低，咳嗽、喘息、哮鳴音等癥狀的消失時間、體溫恢復正常時間及住院時間相對延長，同時治療后的血清ECP、IL-4、IFN-γ的變化幅度也更小。ECP、IL-4和IFN-γ均為炎癥相關介質，與呼吸道炎癥，喘息、氣促等相關。血清ECP是具有細胞毒性的炎性介質，可誘發或加重喘息、氣促等;IL-4具有活化B細胞，趨化、募集、浸潤嗜酸性粒細胞等作用;IFN-γ是Ⅱ型干擾素，主要由Th1細胞產生，具有病毒清除作用[21-22]。研究顯示，啟動子區-251位點由T基因突變為A基因后會造成內含子區域的改變，從而影響真核基因剪接信號，使內含子以隱外顯子方式在真核RNA中存在，最終編碼的蛋白質活性降低或失活，治療后相關炎性因子如ECP、IL-4、IFN-γ分泌的調控作用也受到影響，其中TT基因型患兒由于編碼的蛋白質活性相對AT、AA基因型患兒更高[23]，因此，對ECP、IL-4分泌的抑制作用、IFN-γ分泌的促進作用更強，疾病獲得更明顯緩解，總有效率更高。

136例患兒不良反應總發生率為13.97%(19/136)，不同基因型患兒不良反應總發生率比較，差異無統計學意義，說明IL-8-251位點的基因多態性會影響重組干擾素α-2b霧化治療的效果，但不會影響藥物不良反應。本研究不足之處：IL-8基因存在較多的位點，除-251位點外，還有781位點等，但本研究僅分析了-251位點的基因型多態性對疾病治療效果的影響，未能全面分析-781等其他位點基因多態性的影響，有待后續補充。

綜上所述，重組干擾素α-2b霧化治療毛細支氣管炎可有效抑制炎癥介質分泌，且安全性高。患兒治療效果會受到IL-8基因多態性影響，攜帶A基因對治療效果有不利影響。