β-連接蛋白在浸潤(rùn)性小葉癌和浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌鑒別診斷中的價(jià)值研究

白璐

ILC 為臨床上常見的乳腺惡性上皮性腫瘤,發(fā)病率僅低于IDC,在浸潤(rùn)性乳腺癌樣本總量中所占比例為5.0%～15.0%。與IDC 比較,ILC 患者臨床癥狀、影像學(xué)檢查表征缺乏特異性,盡管IDC 患者很少出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移,但容易向肺、骨、子宮等處轉(zhuǎn)移。臨床早期、準(zhǔn)確診斷ILC,是擬定臨床治療方案的重要基礎(chǔ)。但在組織學(xué)形態(tài)上部分IDC 與ILC 易混淆,故而選擇適宜的化學(xué)標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),是臨床鑒別診斷IDC 與ILC的關(guān)鍵［1］。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、P120 均是當(dāng)前臨床上常用的輔助鑒別指標(biāo),在IDC 內(nèi)兩者均表達(dá),但在ILC 內(nèi)前者表達(dá)缺失,后者多表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中。但約有10%的ILC 患者會(huì)出現(xiàn)E-cadherin 表達(dá),部分時(shí)P120 定位難度高的情況,故而繼續(xù)利用新標(biāo)記物輔助鑒別診斷IDC 與ILC。現(xiàn)已證實(shí),多種細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移過程中均有Wnt 信號(hào)通路的參與,β-連接蛋白為Wnt 通路內(nèi)的重要調(diào)控因子之一,在調(diào)整細(xì)胞間粘附性方面發(fā)揮重要作用［2］。本文主要探究其在IDC與ILC 內(nèi)的表達(dá)情況,解讀其診斷價(jià)值,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2018 年4 月～2019 年8 月行手術(shù)切除術(shù)的60 例乳腺癌患者作為研究對(duì)象,均為女性,均因發(fā)現(xiàn)乳腺腫塊就診入組。結(jié)合浸潤(rùn)性不同分為IDC組(35 例)、ILC 組(16 例)和IDC+ILC 組(9 例)。IDC組年齡31～64 歲,平均年齡(44.7±6.5)歲。ILC 組年齡30～62 歲,平均年齡(45.1±5.7)歲。IDC+ILC 組年齡31～65 歲,平均年齡(45.7±6.5)歲。三組患者的一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。本次研究通過醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批,患者及家屬知情同意。

1.2方法 采集所有研究對(duì)象的組織標(biāo)本,使用10.0%福爾馬林溶液予以常規(guī)固定,石蠟包裹厚度為4 μm 的切片。免疫組化技術(shù)采用EnVision 兩步法,嚴(yán)格依照說明書對(duì)標(biāo)本做染色處理。β-連接蛋白、E-cadherin、P120 均來源于兔抗人多克隆,水浴枸櫞酸對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)處理,陽(yáng)性對(duì)照均選定為乳腺正常導(dǎo)管上皮細(xì)胞。

1.3觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 分析比較β-連接蛋白在正常乳腺組織與IDC 內(nèi)的表達(dá)情況,β-連接蛋白于ILC 內(nèi)的表達(dá)情況,并分析β-連接蛋白與E-cadherin及P120 表達(dá)情況的相關(guān)性。判斷染色結(jié)果：正常機(jī)體中,β-連接蛋白于細(xì)胞膜上表達(dá),當(dāng)觀察到細(xì)胞膜呈現(xiàn)出黃或棕黃染色時(shí)被判定為陽(yáng)性細(xì)胞；β-連接蛋白異常表達(dá)的場(chǎng)所有細(xì)胞質(zhì)及核內(nèi),將質(zhì)與核顯黃或棕黃染色時(shí)判定為陽(yáng)性。E-cadherin、P120 均表達(dá)在細(xì)胞膜或質(zhì)內(nèi),陽(yáng)性時(shí)細(xì)胞膜或質(zhì)呈黃或者為棕黃色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman 分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1β-連接蛋白在正常乳腺組織與IDC 內(nèi)的表達(dá)情況 60 例患者癌旁與瘤體內(nèi)殘存的正常乳腺組織中,β-連接蛋白在上皮細(xì)胞膜上表現(xiàn)出連貫的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為100.0%(60/60)。IDC 組中,22 例患者的β-連接蛋白在細(xì)胞膜上呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為62.9%(22/35),其他13 例表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)與核內(nèi)棕黃色染色的異常表達(dá),陽(yáng)性率為37.1%(13/35)。IDC+ILC 組中,5 例患者的β-連接蛋白在細(xì)胞膜上呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為55.6%(5/9),其他4 例患者表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)與核內(nèi)棕黃色染色的異常表達(dá),陽(yáng)性率為44.4%(4/9)。IDC 組和IDC+ILC 組的β-連接蛋白表達(dá)情況比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2β-連接蛋白于ILC 內(nèi)的表達(dá)情況 采用免疫組化檢測(cè)ILC 組與IDC+ILC 組患者ILC 內(nèi)β-連接蛋白的表達(dá)情況,ILC 組16 例患者β-連接蛋白均表達(dá)為陰性,即提示該類免疫組織標(biāo)記物的陽(yáng)性表達(dá)缺失,陰性率為100.0%(16/16)。但是與IDC+ILC 組9 例患者的ILC 成分內(nèi)和IDC 及生理狀態(tài)正常乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞相比較,β-連接蛋白表達(dá)顯著缺失,陰性率為100.0%。ILC 組與IDC+ILC 組ILC 成分內(nèi)β-連接蛋白表達(dá)情況比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。IDC 組細(xì)胞質(zhì)/核異常表達(dá)率為37.1%(13/35),IDC 組和ILC組的β-連接蛋白表達(dá)情況比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.3β-連接蛋白與E-cadherin 及P120 表達(dá)情況的相關(guān)性分析 60 例患者乳腺癌癌旁與殘存的健康乳腺組織上皮內(nèi),E-cadherin 與P120 均呈現(xiàn)出連貫的細(xì)胞膜染色強(qiáng)陽(yáng)性,陽(yáng)性率均為100.0%(60/60)；在IDC 組35 例與IDC+ILC 組9 例患者IDC 成分內(nèi),E-cadherin與P120 都表現(xiàn)為連續(xù)性的細(xì)胞膜染色強(qiáng)陽(yáng)性,陽(yáng)性率均為100.0%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn),E-cadherin、P120 與β-連接蛋白表達(dá)程度呈正相關(guān)(r=0.994、0.872,P＜0.05)。但是在ILC 組16 例與IDC+ILC 組9 例患者ILC 成分內(nèi),E-cadherin 的表達(dá)程度均有不斷弱化趨勢(shì),甚至出現(xiàn)缺失,與β-連接蛋白缺失表達(dá)程度呈正相關(guān)(r=0.987、0.925,P＜0.05)。但是與在IDC 及正常乳腺上皮細(xì)胞上的表達(dá)形式不同,在ILD 與混合型癌并發(fā)的病例內(nèi)P120 均呈現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)棕黃色染色,β-連接蛋白表達(dá)缺失,兩種標(biāo)記物的表達(dá)情況比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1 β-連接蛋白在IDC 組和ILC 組的表達(dá)情況比較［n(%)］

表2 不同標(biāo)記蛋白在ILC 與混合型癌ILC 成分內(nèi)表達(dá)情況比較［n(%),n=25］

3 討論

ILC 是僅次于IDC 的第二個(gè)常見病理學(xué)類型,IDC、ILC 在分子表型、細(xì)胞學(xué)形態(tài)與生物學(xué)屬性方面均存在差異,故而患者預(yù)后固然有別。腫瘤細(xì)胞失去粘附力、呈印度列兵樣或環(huán)繞導(dǎo)管靶環(huán)樣羅列生長(zhǎng)及缺乏顯著管腔等是ILC 的主要病理改變［3］。在臨床上,乳腺癌是一個(gè)異質(zhì)性腫瘤,同類或同一患者的乳腺癌組織形態(tài)也可能存在較明顯區(qū)別,臨床實(shí)踐中不乏一些有小葉表征的IDC,其在組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞樣態(tài)等諸多方面均表現(xiàn)出較高相似性,該類IDC 腺癌瘤體偏大,可促成微小型的巢團(tuán),但依然會(huì)表現(xiàn)出喪失粘附性的細(xì)胞樣態(tài),和經(jīng)典的ILC 精確區(qū)分難度較大［4］。

E-cadherin 表達(dá)缺失為ILC 的特異性表征,E-cadherin 水平下降會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞之間粘附性銜接降低、極性弱化,細(xì)胞由上皮樣轉(zhuǎn)型成間質(zhì)樣,以上改變?yōu)樯掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的一種重要標(biāo)識(shí)［5］。E-cadherin 下調(diào)所誘導(dǎo)的EMT 對(duì)細(xì)胞遷徙過程有促進(jìn)作用,強(qiáng)化細(xì)胞的遷徙能力,誘發(fā)轉(zhuǎn)移過程。相比之下,ILC 根容易朝遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,并且常見的轉(zhuǎn)移位置和IDC 存在差異,以骨、胃腸道、卵巢等較為常見。當(dāng)下臨床多結(jié)合E-cadherin 與P120 表達(dá)情況辨識(shí)IDC 與ILC,在IDC內(nèi)以上兩種標(biāo)記蛋白均呈現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)著色,但在現(xiàn)實(shí)操作中很難準(zhǔn)確判斷E-cadherin 的表達(dá)程度,并且在人工操作因素干擾下很難能區(qū)分P120 在細(xì)胞膜或質(zhì)上的著色狀況［6］。鑒于以上情況,國(guó)內(nèi)外諸多臨床學(xué)者均在尋覓一個(gè)新標(biāo)記物鑒別診斷腺癌。

β-連接蛋白為Wnt 通路內(nèi)一種重要的活化因子,現(xiàn)已證實(shí)該因子參與胚胎發(fā)育、器官生長(zhǎng)及腫瘤發(fā)生發(fā)展諸多過程,并發(fā)揮重要作用。當(dāng)Wnt 通路被活化時(shí),β-連接蛋白無法降解并被整合至細(xì)胞核內(nèi),和轉(zhuǎn)錄因子互為作用并驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程,對(duì)部分基因表達(dá)過程起到一定調(diào)控作用,同時(shí)誘導(dǎo)腫瘤疾病的發(fā)生過程。β-連接蛋白也是機(jī)體內(nèi)一種粘附因子,在E-cadherin與catenin 蛋白銜接過程發(fā)揮重要的協(xié)同作用,對(duì)組織結(jié)構(gòu)完整度與極性均起到一定維護(hù)作用［7］。本次研究中,在健康乳腺組織內(nèi)β-連接蛋白均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),于IDC 內(nèi)雖然所有病例均表現(xiàn)β-連接蛋白陽(yáng)性表達(dá),但DC 內(nèi)細(xì)胞質(zhì)/核異常表達(dá)率為37.1%,提示乳腺癌疾病發(fā)生、發(fā)展過程中均可能有Wnt 通路的參與作用。ILC 組與IDC+ILC 組ILC 成分內(nèi)β-連接蛋白整體表達(dá)為陰性,且E-cadherin 表達(dá)缺失合并P120 細(xì)胞質(zhì)表達(dá),原因可能是E-cadherin 突變進(jìn)而喪失和β-連接蛋白的銜接能力導(dǎo)致的,相關(guān)分子機(jī)制需深入探究［8］。

綜上所述,在乳腺IDC、ILC 內(nèi)β-連接蛋白表達(dá)水平有別,可以作為臨床鑒別診斷的依據(jù)之一。