化學發光微粒子免疫檢測法在梅毒血清學檢測中的應用

祝 賀

（商丘市中心醫院輸血科，河南 商丘 476000）

梅毒是由于梅毒螺旋體（Treponemia pallidum,TP）感染所導致的慢性、系統性的性傳播疾病，可導致患者出現硬下疳、淋巴結腫大等臨床表現。相關研究顯示，2003年至2013年，梅毒發病率年均增長13.37%，嚴重威脅人們的健康安全[1]。因此快速診斷梅毒，給予相應治療，對提升治療效果，控制疾病進展，降低傳播風險有積極意義。目前臨床對于梅毒主要依據病史、臨床表現、血清學檢測進行診斷，其中血清學檢測是診斷梅毒的重要方式，檢測方法不同，對于梅毒的診斷效能也存在差異。因此選擇有效的檢測方式，對提升梅毒診斷效能有重要意義。梅毒螺旋體特性抗體（Treponema pallidum antibody,TPAb）檢測試驗，通過檢測TP抗體，反映患者TP感染情況[4]。目前臨床通常采用的TP-Ab檢測試驗包括梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（Treponema pallidum particle assay,TPPA）、梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體檢測法（TP-IgM）、（Treponema Pallidum Enzyme Linked Immune Sorbent Assay,TP-ELISA）、化學發光微粒子免疫檢測法（Chemiluminescence microparticle immunoassays,CMIA）等血清檢測方式，其中TPPA是目前血清學檢測結果的金標準，能夠有效診斷梅毒，但TPPA檢查依賴肉眼對結果進行判斷，對于操作人員要求較高[2]。TP-ELISA可通過檢測IgM達到檢測TP感染的目的，同時TP-ELISA可批量檢測，節省檢測時間[3]。但TP-ELIS易受其他非TP感染、抗體滴度等因素影響，影響診斷結果。CMIA可通過將重組Tpn15、47、17作為固相抗原，通過其與TP結合，觸發化學發光，從而診斷梅毒。據相關研究顯示，CMIA在檢測人類免疫缺陷病毒抗體中取得較好成效[5]。由此推測CMIA可能在梅毒TP-Ab血清學檢測中取得相似成效。鑒于此，本研究著重分析CMIA在梅毒TP-Ab血清學檢測中的應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究方案經本院醫學倫理委員會批準，采取前瞻性研究，選擇2018年1月至2021年1月商丘市中心醫院收治的60 例高度疑似梅毒患者作為研究對象。患者中男38例，女22例；年齡（20～42）歲，平均年齡（30.80±3.64）歲；體重指數（18～26） kg·m-2，平均體重指數（21.90±1.18）kg·m-2。

1.2 入選標準 納入標準：① 臨床表現為無痛性淋巴結腫大合并生殖器潰瘍、硬下疳等癥狀；② 無嚴重肝腎功能障礙；③ 簽署知情同意書。排除標準：① 合并其他性傳播疾病；② 合并其他皮膚疾病；③ 入院前接受抗梅毒治療。

1.3 方法 TPPA：取患者入院次日清晨空腹靜脈血5 ml，使用臺式低速離心機TDZ5-WS（湘長械備20140072號，湖南湘智）離心（轉速3 000 r·min-1，離心半徑10cm，離心15min）取血清。使用TPPA試劑盒（梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗）進行檢查。CMIA：使用化學發光分析儀BA-G2000 BA-G2000 Pumping Machine及TP-Ab測定試劑盒（化學發光微粒子免疫檢測法）對患者梅毒TP-Ab進行檢測，從檢測到結果判讀均由儀器完成。TP-IgM：使用IgM測定試劑盒（膠體金法）進行檢查。TP-ELISA：使用TP-ELISA（酶聯免疫吸附試驗）進行檢查。上述試劑盒均來自美艾利爾（中國）醫療器械有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.4 評價指標 TPPA判斷標準：選取本院2名5年及以上工作經驗輸血科醫師對結果分別進行判讀，如存在差異則協商統一意見。陰性：反應孔中細胞沉淀在孔中央并呈光滑紐扣狀；陽性：反應孔出現凝集呈不規則沉淀；當滴度≥1∶80時判讀為陽性，對于弱陽性患者則重復測量2次，如兩次均為陰性則為陰性，否則為陽性。CMIA：以檢測樣本的吸光度值（Signal to cut-off，S/CO）＞1.0為陽性。TP-IgM：若質控線和檢測線均出現，則判定為陽性，如只出現1條質控線則為陰性。TP-ELISA：用酶標儀判讀，當滴度≥1∶80時為陽性，對于弱陽性標本需重復測定2次，如兩次均為陰性則為陰TP-ELISA，否則為陽性。

1.5 統計學方法 采用SPSS 23.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，以K值評價CMIA與TPPA檢測結果的一致性（K≥0.74提示一致性好，K值范圍為0.4～0.74提示一致性一般，K＜0.4提示一致性差）。

2 結果

2.1 梅毒TP-Ab血清學檢測結果 60例高度疑似梅毒感染患者，經TPPA檢測，陽性46例（76.67%），陰性 14 例（23.33%）。

2.1 CMIA、TP-IgM、TP-ELISA檢測結果 與TPPA作為參比，CMIA對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為95.65%，特異度為92.86 %，準確度為95.00%，一致性較好； TP-IgM對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為76.09%，特異度為71.43%，準確度為75.00%，一致性一般； TP-ELISA對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為78.26%，特異度為85.71%，準確度為80.00%，一致性一般。見表1。

表1 CMIA檢測結果

表2 TP-IgM檢查結果

表3 TP-ELISA檢查結果

2.2 診斷效能 CMIA診斷TP-Ab敏感度、準確度高于TP-IgM、TP-ELISA，三組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 CMIA、TP-IgM及TP-ELISA診斷效能比較[n（%）]

3 討論

梅毒傳播途徑較多，如性接觸、母嬰、血液等傳播形式，傳播速度較快，累及器官多，臨床表現多樣，潛伏期及病程較長，臨床對于梅毒的診斷較為困難。因此有效診斷梅毒對梅毒患者治療及梅毒傳播控制有重要意義。TP潛伏期患者臨床癥狀不明顯，診斷較為困難，但（2～4）周后，機體便可產生特異性TP-Ab，如免疫球蛋白M、免疫球蛋白G等，因此針對梅毒TP-Ab進行檢測，利于梅毒早期診斷與治療。

目前臨床對于梅毒主要采取血清學進行診斷，TPPA是血清學診斷梅毒的金標準，使用明膠將梅毒特異性抗原進行包被與患者血清中特異性抗體產生凝集反應，并通過肉眼對結果進行判讀，能夠有效診斷梅毒。但TPPA操作較為復雜、耗時較長，同時對于結果的判讀過于依賴檢測者經驗與主觀判斷，導致臨床適用性較差。IgM是機體受限產生的特異性抗體，可在感染兩周后測出，治療后可轉陰，再發感染后可再次轉為陽性，因此通過檢測IgM，可有效診斷與評估梅毒患者感染情況[6]。本次研究顯示，60例高度疑似梅毒感染患者，經TPPA檢測，陽性46例，陰性14例。提示梅毒發病率較高，梅毒早期診斷與治療十分重要。同時本次研究顯示，以TPPA為參比試劑，CMIA對梅毒TP-Ab抗體的檢出敏感度95.65%，特異度為92.86%，準確度為95.00%，與TP-Ab一致性為0.864，一致性較好，且CMIA診斷TP-Ab敏感度、準確度高于TP-IgM、TP-ELISA。提示CMIA對梅毒TP-Ab抗體有著較好的診斷效能，與TPPA診斷效能相近。分析其原因在于，TP-ELISA可利用重組TP47、TP17抗原包被微孔板和辣根過氧化物酶標記的TP47、TP17抗原夾心法原理檢測血清中IgM水平，可有效診斷梅毒患者，評估患者病情。但TPELISA受到機體、血液樣本、儀器等因素影響出現假陽性，需TPPA驗證，導致臨床適用性較低，同時需酶標儀進行判讀對儀器有所要求，導致診斷成本相對較高。因此臨床仍需尋找更加有效的梅毒TP-Ab血清學檢測方法。化學發光免疫檢測法是利用化學發光劑標記抗原或抗體，利用磁場分離結核狀態和游離狀態的劑標記物，并加入發光促進劑，測定發光強度，進行定量或定性檢查，化學發光免疫檢測法被臨床廣泛應用[7]。CMIA是將重組的梅毒螺旋抗體抗原（Tpn15、17、47）包裹并與檢驗稀釋液混合后加入樣本，如血液中存在梅毒TP-Ab，則會結合在抗原包被粒子上，加入預觸發液及觸發液后，檢測化學發光反應物的相對單位，從而檢測TP感染情況[7、8]。CMIA全程無需人工干預，更加客觀，利于提高診斷效能。同時CMIA相較于傳統血清檢測，CIMA檢測粒直徑較小，表面固定量大，同時粒徑均一，單分散性好，有利于評估梅毒TP-Ab水平。CMIA整個過程均由同一臺機器進行檢測判讀，對儀器要求相對較低，可減少固定化的時間與成本，提高臨床適用性。因此CMIA對于梅毒診斷效能較高，更適用于臨床。