化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法在梅毒血清學(xué)檢測中的應(yīng)用

祝 賀

（商丘市中心醫(yī)院輸血科，河南 商丘 476000）

梅毒是由于梅毒螺旋體（Treponemia pallidum,TP）感染所導(dǎo)致的慢性、系統(tǒng)性的性傳播疾病，可導(dǎo)致患者出現(xiàn)硬下疳、淋巴結(jié)腫大等臨床表現(xiàn)。相關(guān)研究顯示，2003年至2013年，梅毒發(fā)病率年均增長13.37%，嚴(yán)重威脅人們的健康安全[1]。因此快速診斷梅毒，給予相應(yīng)治療，對提升治療效果，控制疾病進(jìn)展，降低傳播風(fēng)險(xiǎn)有積極意義。目前臨床對于梅毒主要依據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、血清學(xué)檢測進(jìn)行診斷，其中血清學(xué)檢測是診斷梅毒的重要方式，檢測方法不同，對于梅毒的診斷效能也存在差異。因此選擇有效的檢測方式，對提升梅毒診斷效能有重要意義。梅毒螺旋體特性抗體（Treponema pallidum antibody,TPAb）檢測試驗(yàn)，通過檢測TP抗體，反映患者TP感染情況[4]。目前臨床通常采用的TP-Ab檢測試驗(yàn)包括梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Treponema pallidum particle assay,TPPA）、梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體檢測法（TP-IgM）、（Treponema Pallidum Enzyme Linked Immune Sorbent Assay,TP-ELISA）、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法（Chemiluminescence microparticle immunoassays,CMIA）等血清檢測方式，其中TPPA是目前血清學(xué)檢測結(jié)果的金標(biāo)準(zhǔn)，能夠有效診斷梅毒，但TPPA檢查依賴肉眼對結(jié)果進(jìn)行判斷，對于操作人員要求較高[2]。TP-ELISA可通過檢測IgM達(dá)到檢測TP感染的目的，同時(shí)TP-ELISA可批量檢測，節(jié)省檢測時(shí)間[3]。但TP-ELIS易受其他非TP感染、抗體滴度等因素影響，影響診斷結(jié)果。CMIA可通過將重組Tpn15、47、17作為固相抗原，通過其與TP結(jié)合，觸發(fā)化學(xué)發(fā)光，從而診斷梅毒。據(jù)相關(guān)研究顯示，CMIA在檢測人類免疫缺陷病毒抗體中取得較好成效[5]。由此推測CMIA可能在梅毒TP-Ab血清學(xué)檢測中取得相似成效。鑒于此，本研究著重分析CMIA在梅毒TP-Ab血清學(xué)檢測中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究方案經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，采取前瞻性研究，選擇2018年1月至2021年1月商丘市中心醫(yī)院收治的60 例高度疑似梅毒患者作為研究對象。患者中男38例，女22例；年齡（20～42）歲，平均年齡（30.80±3.64）歲；體重指數(shù)（18～26） kg·m-2，平均體重指數(shù)（21.90±1.18）kg·m-2。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：① 臨床表現(xiàn)為無痛性淋巴結(jié)腫大合并生殖器潰瘍、硬下疳等癥狀；② 無嚴(yán)重肝腎功能障礙；③ 簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并其他性傳播疾病；② 合并其他皮膚疾病；③ 入院前接受抗梅毒治療。

1.3 方法 TPPA：取患者入院次日清晨空腹靜脈血5 ml，使用臺式低速離心機(jī)TDZ5-WS（湘長械備20140072號，湖南湘智）離心（轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1，離心半徑10cm，離心15min）取血清。使用TPPA試劑盒（梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)）進(jìn)行檢查。CMIA：使用化學(xué)發(fā)光分析儀BA-G2000 BA-G2000 Pumping Machine及TP-Ab測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法）對患者梅毒TP-Ab進(jìn)行檢測，從檢測到結(jié)果判讀均由儀器完成。TP-IgM：使用IgM測定試劑盒（膠體金法）進(jìn)行檢查。TP-ELISA：使用TP-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）進(jìn)行檢查。上述試劑盒均來自美艾利爾（中國）醫(yī)療器械有限公司，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.4 評價(jià)指標(biāo) TPPA判斷標(biāo)準(zhǔn)：選取本院2名5年及以上工作經(jīng)驗(yàn)輸血科醫(yī)師對結(jié)果分別進(jìn)行判讀，如存在差異則協(xié)商統(tǒng)一意見。陰性：反應(yīng)孔中細(xì)胞沉淀在孔中央并呈光滑紐扣狀；陽性：反應(yīng)孔出現(xiàn)凝集呈不規(guī)則沉淀；當(dāng)?shù)味取?∶80時(shí)判讀為陽性，對于弱陽性患者則重復(fù)測量2次，如兩次均為陰性則為陰性，否則為陽性。CMIA：以檢測樣本的吸光度值（Signal to cut-off，S/CO）＞1.0為陽性。TP-IgM：若質(zhì)控線和檢測線均出現(xiàn)，則判定為陽性，如只出現(xiàn)1條質(zhì)控線則為陰性。TP-ELISA：用酶標(biāo)儀判讀，當(dāng)?shù)味取?∶80時(shí)為陽性，對于弱陽性標(biāo)本需重復(fù)測定2次，如兩次均為陰性則為陰TP-ELISA，否則為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，以K值評價(jià)CMIA與TPPA檢測結(jié)果的一致性（K≥0.74提示一致性好，K值范圍為0.4～0.74提示一致性一般，K＜0.4提示一致性差）。

2 結(jié)果

2.1 梅毒TP-Ab血清學(xué)檢測結(jié)果 60例高度疑似梅毒感染患者，經(jīng)TPPA檢測，陽性46例（76.67%），陰性 14 例（23.33%）。

2.1 CMIA、TP-IgM、TP-ELISA檢測結(jié)果 與TPPA作為參比，CMIA對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為95.65%，特異度為92.86 %，準(zhǔn)確度為95.00%，一致性較好； TP-IgM對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為76.09%，特異度為71.43%，準(zhǔn)確度為75.00%，一致性一般； TP-ELISA對梅毒TP-Ab抗體的檢出的敏感度為78.26%，特異度為85.71%，準(zhǔn)確度為80.00%，一致性一般。見表1。

表1 CMIA檢測結(jié)果

表2 TP-IgM檢查結(jié)果

表3 TP-ELISA檢查結(jié)果

2.2 診斷效能 CMIA診斷TP-Ab敏感度、準(zhǔn)確度高于TP-IgM、TP-ELISA，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 CMIA、TP-IgM及TP-ELISA診斷效能比較[n（%）]

3 討論

梅毒傳播途徑較多，如性接觸、母嬰、血液等傳播形式，傳播速度較快，累及器官多，臨床表現(xiàn)多樣，潛伏期及病程較長，臨床對于梅毒的診斷較為困難。因此有效診斷梅毒對梅毒患者治療及梅毒傳播控制有重要意義。TP潛伏期患者臨床癥狀不明顯，診斷較為困難，但（2～4）周后，機(jī)體便可產(chǎn)生特異性TP-Ab，如免疫球蛋白M、免疫球蛋白G等，因此針對梅毒TP-Ab進(jìn)行檢測，利于梅毒早期診斷與治療。

目前臨床對于梅毒主要采取血清學(xué)進(jìn)行診斷，TPPA是血清學(xué)診斷梅毒的金標(biāo)準(zhǔn)，使用明膠將梅毒特異性抗原進(jìn)行包被與患者血清中特異性抗體產(chǎn)生凝集反應(yīng)，并通過肉眼對結(jié)果進(jìn)行判讀，能夠有效診斷梅毒。但TPPA操作較為復(fù)雜、耗時(shí)較長，同時(shí)對于結(jié)果的判讀過于依賴檢測者經(jīng)驗(yàn)與主觀判斷，導(dǎo)致臨床適用性較差。IgM是機(jī)體受限產(chǎn)生的特異性抗體，可在感染兩周后測出，治療后可轉(zhuǎn)陰，再發(fā)感染后可再次轉(zhuǎn)為陽性，因此通過檢測IgM，可有效診斷與評估梅毒患者感染情況[6]。本次研究顯示，60例高度疑似梅毒感染患者，經(jīng)TPPA檢測，陽性46例，陰性14例。提示梅毒發(fā)病率較高，梅毒早期診斷與治療十分重要。同時(shí)本次研究顯示，以TPPA為參比試劑，CMIA對梅毒TP-Ab抗體的檢出敏感度95.65%，特異度為92.86%，準(zhǔn)確度為95.00%，與TP-Ab一致性為0.864，一致性較好，且CMIA診斷TP-Ab敏感度、準(zhǔn)確度高于TP-IgM、TP-ELISA。提示CMIA對梅毒TP-Ab抗體有著較好的診斷效能，與TPPA診斷效能相近。分析其原因在于，TP-ELISA可利用重組TP47、TP17抗原包被微孔板和辣根過氧化物酶標(biāo)記的TP47、TP17抗原夾心法原理檢測血清中IgM水平，可有效診斷梅毒患者，評估患者病情。但TPELISA受到機(jī)體、血液樣本、儀器等因素影響出現(xiàn)假陽性，需TPPA驗(yàn)證，導(dǎo)致臨床適用性較低，同時(shí)需酶標(biāo)儀進(jìn)行判讀對儀器有所要求，導(dǎo)致診斷成本相對較高。因此臨床仍需尋找更加有效的梅毒TP-Ab血清學(xué)檢測方法。化學(xué)發(fā)光免疫檢測法是利用化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記抗原或抗體，利用磁場分離結(jié)核狀態(tài)和游離狀態(tài)的劑標(biāo)記物，并加入發(fā)光促進(jìn)劑，測定發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)行定量或定性檢查，化學(xué)發(fā)光免疫檢測法被臨床廣泛應(yīng)用[7]。CMIA是將重組的梅毒螺旋抗體抗原（Tpn15、17、47）包裹并與檢驗(yàn)稀釋液混合后加入樣本，如血液中存在梅毒TP-Ab，則會結(jié)合在抗原包被粒子上，加入預(yù)觸發(fā)液及觸發(fā)液后，檢測化學(xué)發(fā)光反應(yīng)物的相對單位，從而檢測TP感染情況[7、8]。CMIA全程無需人工干預(yù)，更加客觀，利于提高診斷效能。同時(shí)CMIA相較于傳統(tǒng)血清檢測，CIMA檢測粒直徑較小，表面固定量大，同時(shí)粒徑均一，單分散性好，有利于評估梅毒TP-Ab水平。CMIA整個(gè)過程均由同一臺機(jī)器進(jìn)行檢測判讀，對儀器要求相對較低，可減少固定化的時(shí)間與成本，提高臨床適用性。因此CMIA對于梅毒診斷效能較高，更適用于臨床。