紅曲霉分離純化、分類(lèi)和鑒定研究進(jìn)展

周康熙，陳 穎，倪 莉*

（1.福州大學(xué) 石油化工學(xué)院，福建 福州 350108；2.福州大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)研究所 福建省食品生物技術(shù)創(chuàng)新工程技術(shù)研究中心，福建 福州 350108）

紅曲霉（Monascus）是一類(lèi)小型絲狀腐生真菌，屬于真菌門(mén)（Eumycophyta）、子囊菌亞門(mén)（Ascomycotina）、不整囊菌綱（Plectomycetes）、散囊菌目（Eurotiales）、紅曲菌科（Monascaceae），紅曲菌科中唯一的隸屬分類(lèi)單元[1-2]。紅曲霉可產(chǎn)生糖化酶、酯化酶、蛋白酶等多種酶類(lèi)物質(zhì)，在這些酶的協(xié)同作用下，能夠生成單糖、氨基酸、核苷酸等呈味物質(zhì)和揮發(fā)性酸類(lèi)、醇類(lèi)和酯類(lèi)等香氣物質(zhì)，對(duì)發(fā)酵食品的風(fēng)味貢獻(xiàn)卓著[3]；而它的次級(jí)代謝產(chǎn)物（如色素、抗菌素、洛伐他汀、γ-氨基丁酸等）更是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[4]。如紅曲色素可用于糕點(diǎn)、飲料、熟肉制品等食品的著色劑，莫納斯叮A（Monaseidin A）、安卡內(nèi)酯（Ankalaetone）、幾丁質(zhì)酶和糖肽類(lèi)物質(zhì)等可開(kāi)發(fā)應(yīng)用為食品防腐劑；在藥物方面，紅曲霉中的洛伐他汀具有降膽固醇、降血脂的作用，γ-氨基丁酸可降血壓、助睡眠、抗驚厥[5-7]。紅曲霉的菌絲體含有豐富的菌體多糖和菌體蛋白，對(duì)菌絲體的綜合利用可提高紅曲霉的附加價(jià)值[8-9]。但部分紅曲霉會(huì)代謝具有腎毒性的桔霉素，使紅曲制品的應(yīng)用受限[10]。由于不同紅曲霉在環(huán)境適應(yīng)能力和生長(zhǎng)代謝能力等方面各有不同，無(wú)論科學(xué)試驗(yàn)還是工業(yè)化應(yīng)用都需要進(jìn)行菌種選育，在選育過(guò)程中，如何快速廉價(jià)地獲得大量紅曲霉以及快速準(zhǔn)確地獲知目標(biāo)紅曲霉的菌種信息顯著影響了選育工作的效率以及目標(biāo)紅曲霉的質(zhì)量。為更好地挖掘紅曲霉種質(zhì)資源，該文對(duì)紅曲霉的分離純化、分類(lèi)和鑒定三個(gè)方面進(jìn)行綜述，提出了潛在的分離純化和分類(lèi)鑒定方法，為高效獲得紅曲霉、明確菌種信息等工作提供參考。

1 紅曲霉的分離純化

盡管紅曲霉的分離純化方法較為成熟，但極少有文獻(xiàn)對(duì)這些方法進(jìn)行細(xì)化探究，而不同分離純化方法的分離效果、分離時(shí)間、所獲菌株的特性等方面存在顯著區(qū)別，選擇合適的分離純化方法，可高效率、短時(shí)間地獲得目標(biāo)菌株。

可培養(yǎng)的紅曲霉分離純化方法大致可分為兩種：一種是直接分離法，通過(guò)平板劃線(xiàn)或平板稀釋涂布將混合菌株稀釋分離得到單細(xì)胞后，經(jīng)培養(yǎng)形成單菌落，進(jìn)而挑取目標(biāo)菌株進(jìn)行再次分純、擴(kuò)培或保藏，所用固態(tài)培養(yǎng)基為普通霉菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基或添加了廣譜抑制劑的培養(yǎng)基。另一種是排他-分離法，在直接稀釋分離法的基礎(chǔ)上，加上排他性的前處理或在固體培養(yǎng)基中添加排他性物質(zhì)，主要抑制紅曲霉以外的其他菌株的活性，再進(jìn)行稀釋分離。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。直接稀釋分離法操作步驟簡(jiǎn)單，但由于對(duì)紅曲霉外的其他微生物抑制作用較弱，培養(yǎng)皿中可能彌漫著其他微生物的孢子，往往需要多次重復(fù)操作，才能獲得紅曲霉；排他-分離法的操作相對(duì)繁瑣，但目的性更強(qiáng)，工作重復(fù)頻率低，效率更高。兩種方法的應(yīng)用如表1所示。

表1 兩種紅曲霉分離純化方法的應(yīng)用Table 1 Application of two methods for isolation and purification of Monascus

上述示例中，添加脫氧膽酸鈉的目的是為了抑制菌絲的蔓延，從而更加便于培養(yǎng)皿中菌落的分離和挑選，但脫氧膽酸鈉屬于廣譜型抑制劑，對(duì)紅曲霉也有顯著的抑制效果[18]。紅曲霉具有耐酸、耐乙醇、耐高溫等特性，少量的乳酸、乙醇能夠促進(jìn)紅曲霉的生長(zhǎng)，適當(dāng)濃度的乳酸和乙醇能夠共同抑制紅曲霉以外的微生物，有利于紅曲霉的分離純化[19-21]。當(dāng)需要獲取具有特定性狀的紅曲霉時(shí)，特制的固態(tài)培養(yǎng)基可作為初篩的工具，但此方法往往在已分離得到多株紅曲霉的基礎(chǔ)上進(jìn)一步篩選特定的紅曲霉。石琳等[22]通過(guò)紫外誘變獲得多個(gè)紅曲霉突變體，再將這些突變體點(diǎn)種于含有牛奶的固態(tài)培養(yǎng)基中，通過(guò)水解圈和菌落直徑的比值來(lái)篩選蛋白酶活力較高的紅曲霉。

2 紅曲霉的分類(lèi)與鑒定

紅曲霉的分類(lèi)與鑒定密不可分。形態(tài)和代謝特征是紅曲霉最早的分類(lèi)鑒定依據(jù)，紅曲霉屬下的很多物種名稱(chēng)來(lái)源于此。這種鑒定依據(jù)包括不同鑒定培養(yǎng)基下的菌落形態(tài)、對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用情況等[23]。但傳統(tǒng)的分類(lèi)方法和依據(jù)存在一定的局限性，可能存在著新分離的菌株形態(tài)或代謝行為與記載的標(biāo)準(zhǔn)菌株難以一一準(zhǔn)確對(duì)應(yīng)的情況，影響了紅曲霉鑒定的準(zhǔn)確性。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA分子標(biāo)記、同工酶分析等多種技術(shù)手段從遺傳或表達(dá)的微觀層面去描述紅曲霉的物種信息，提高了紅曲霉的物種區(qū)分度，也為紅曲霉的歸類(lèi)和發(fā)現(xiàn)新的紅曲霉提供了更多的鑒定依據(jù)。

2.1 紅曲霉的分類(lèi)

目前，對(duì)紅曲霉的分類(lèi)已細(xì)化到種的水平，這些物種的發(fā)現(xiàn)及命名時(shí)間較早。李鐘慶等[24-25]在《紅曲菌的形態(tài)與分類(lèi)學(xué)》中記載了1884年至2003年間發(fā)現(xiàn)的29種紅曲霉，SHAO Y等[23]在前人研究的基礎(chǔ)上將發(fā)現(xiàn)的紅曲霉更新至30種。該研究結(jié)合各類(lèi)文獻(xiàn)報(bào)道和菌種庫(kù)、基因庫(kù)的記載情況，對(duì)目前不同文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)記載的紅曲霉種類(lèi)與信息總結(jié)于表2。

紅曲霉的物種分類(lèi)尚存爭(zhēng)議。在李鐘慶等[24]的紅曲霉形態(tài)學(xué)分類(lèi)檢索表中，僅記載了13種紅曲霉；美國(guó)國(guó)家生物信息中心的物種分類(lèi)數(shù)據(jù)庫(kù)中關(guān)于紅曲霉的分類(lèi)，記載了19種已明確命名分類(lèi)的紅曲霉和34株未命名分類(lèi)的紅曲霉；在國(guó)際期刊（SCI）中有報(bào)道的紅曲霉達(dá)25種；SHAO Y等[23]認(rèn)為，目前國(guó)際公認(rèn)的紅曲霉僅有9種（在表2中以“*”表示），這9種紅曲霉在形態(tài)學(xué)分類(lèi)檢索表、美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）分類(lèi)表和SCI論文中均有被提及。一般認(rèn)為，除了按照國(guó)際命名規(guī)則對(duì)新發(fā)現(xiàn)的菌株命名外，還需要在國(guó)際上公開(kāi)發(fā)表且被公認(rèn)的保藏機(jī)構(gòu)保藏，該物種的命名才有效。上述紅曲霉中，凡是被NCBI記載的紅曲霉均有菌株保藏信息，且保藏機(jī)構(gòu)認(rèn)可度較高，但有些報(bào)道過(guò)的菌株尚未被NCBI收錄并納入物種分類(lèi)體系，而國(guó)際期刊中提及的菌株，一般保存于作者所在科研單位，不一定保存在專(zhuān)門(mén)的菌種保藏中心，菌株的遺傳信息也尚未明了，僅從宏觀形態(tài)和代謝行為的差異難以準(zhǔn)確判定為新物種。由此看來(lái)，要完善紅曲霉的物種分類(lèi)，仍有很長(zhǎng)一段路要走。

表2 不同文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)記載的紅曲霉種類(lèi)Table 2 Monascus species recorded in different literatures or database

2.2 紅曲霉的鑒定

2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

紅曲霉的形態(tài)學(xué)鑒定有3種：多種鑒定培養(yǎng)基的形態(tài)學(xué)特征描述、基于生長(zhǎng)代謝行為的生理生化特征鑒定以及顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察。在紅曲霉的形態(tài)學(xué)鑒定中，紅曲霉在不同鑒定培養(yǎng)基中的形態(tài)特征描述必不可少，其他兩種鑒定方法可作為前者的補(bǔ)充。

紅曲霉的分類(lèi)鑒定最早使用的是形態(tài)學(xué)鑒定技術(shù)。公開(kāi)報(bào)道的文獻(xiàn)中，SATO K[48]首次利用紅曲霉在各個(gè)培養(yǎng)物上的菌落特征和顯微鏡下的微觀形態(tài)來(lái)對(duì)紅曲霉進(jìn)行分類(lèi)，并初步建立了檢索表，但培養(yǎng)物多為肉汁、牛奶、面包等成分不穩(wěn)定的培養(yǎng)基；之后經(jīng)過(guò)LIZUKA H等[49-52]對(duì)鑒定培養(yǎng)基的改進(jìn)和紅曲霉新物種的挖掘，形態(tài)學(xué)鑒定體系逐漸發(fā)展起來(lái)；后來(lái)，李鐘慶等[24]在前人研究的基礎(chǔ)上，將紅曲霉的鑒定培養(yǎng)基增加至5種：麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基、察氏酵母提取物（Czapek yeast exatract agar，CYA）培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基、麥芽提取物瓊脂（malt extract agar，MEA）培養(yǎng)基、甘油硝酸鹽瓊脂（glycerol nitrate agar base，G25N）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并重構(gòu)了紅曲霉屬分種檢索表。目前，紅曲霉的形態(tài)學(xué)鑒定以李鐘慶和郭芳的分類(lèi)檢索表為主要參考依據(jù)。

此外，紅曲霉的形態(tài)學(xué)輔助鑒定還包括生理生化鑒定。該方法是將紅曲霉接種于含有不同碳源、氮源的培養(yǎng)基中觀察其對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用情況，有時(shí)還會(huì)考察它們對(duì)明膠的水解情況和對(duì)pH、乙醇、溫度等培養(yǎng)條件的耐受情況[53-56]。生理生化鑒定不能單獨(dú)成為鑒定紅曲霉的指標(biāo)，只能作為形態(tài)學(xué)特征描述的輔助鑒定工具。

2.2.2 同工酶分析

紅曲霉的形態(tài)學(xué)分類(lèi)僅基于表型判斷，同工酶作為基因表達(dá)的直接產(chǎn)物，可用于紅曲霉的菌種鑒定。1985年，BRIDG P D等[57]利用API ZYM酶活性試劑條對(duì)9株紅曲霉進(jìn)行酶活測(cè)定，發(fā)現(xiàn)纈氨酸芳基酰胺酶、胱氨酸芳基酰胺酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、多聚糖酶、纖維素水解酶可區(qū)分佛羅里達(dá)紅曲霉（M.floridanus）、叢毛紅曲霉（M.pilosus）、紅色紅曲霉（M.ruber）和紫色紅曲霉（M.purpureus）。1993年，NISHIKAWA J等[58]對(duì)15種紅曲霉的乙醇脫氫酶、非特異性酯酶、葡萄糖6-磷酸脫氫酶和乳酸脫氫酶進(jìn)行了酶譜的繪制，通過(guò)聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)，除了無(wú)法區(qū)分紅曲紅曲霉（M.anka）和銹色紅曲霉（M.rubiginosus）外，對(duì)其他13種紅曲霉都能較好的區(qū)分。學(xué)者們對(duì)紅曲霉的各種內(nèi)源酶進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，酯酶的同工酶譜相對(duì)穩(wěn)定，對(duì)橙色紅曲霉（M.aurantiacus）、巴克紅曲霉（M.barkeri）、變紅紅曲霉（M.serorubescens）、發(fā)白紅曲霉（M.albidus）、紅色紅曲霉（M.ruber）、紫色紅曲霉（M.purpureus）、煙色紅曲霉（M.fuliginosus）的種間差異有一定的區(qū)分度，可作為紅曲霉的鑒定方法之一[59-61]。同工酶分析技術(shù)相比于界限模糊的形態(tài)學(xué)鑒定有高分辨率、檢測(cè)通量高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但菌齡、培養(yǎng)條件、傳代次數(shù)等因素會(huì)影響同工酶的產(chǎn)量和活性，同工酶分析的失準(zhǔn)可能導(dǎo)致鑒定上的誤判，因此，近年來(lái)使用頻率較低。

2.2.3 DNA分子標(biāo)記技術(shù)

脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）分子標(biāo)記技術(shù)可直接對(duì)紅曲霉的遺傳信息進(jìn)行對(duì)比分類(lèi)，相比于同工酶分析更具說(shuō)服力。DNA分子作為穩(wěn)定的遺傳信息載體，儲(chǔ)存于生物體的任何組織和細(xì)胞中，并具有穩(wěn)定遺傳、無(wú)表型效應(yīng)、非誘變的條件下不受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)[62]。利用DNA分子序列特征作為遺傳標(biāo)記，能夠從遺傳水平上分析紅曲霉的種間關(guān)系和親緣關(guān)系。理想的DNA標(biāo)記應(yīng)具有如下特點(diǎn)：在基因組中廣泛存在且分布相對(duì)均勻；不同物種的目標(biāo)DNA應(yīng)具有遺傳多態(tài)性；信息量充足且易于提取、擴(kuò)增和分析；樣品穩(wěn)定且方法易于重現(xiàn)。綜合文獻(xiàn)報(bào)道，用于紅曲霉的DNA分子標(biāo)記技術(shù)主要有兩大類(lèi)：DNA測(cè)序分析和DNA標(biāo)記分析。

（1）DNA測(cè)序分析

一般DNA測(cè)序所用的基因片段（rDNA）在物種進(jìn)化過(guò)程中保守性較強(qiáng)，序列中存在可變區(qū)和高可變區(qū)。在特定基因片段中，不同物種的核酸序列有所差別，可據(jù)此來(lái)判斷其親緣關(guān)系，通常用序列得分表示[63]。rDNA序列包括轉(zhuǎn)錄區(qū)TS和非轉(zhuǎn)錄區(qū)NTS。轉(zhuǎn)錄區(qū)由5S、5.8S、18S、28S rDNA組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單元，各基因之間由內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS隔開(kāi)，即ITS1隔開(kāi)18S和5.8S rDNA，5.8S和28S rDNA由ITS2隔開(kāi)；基因內(nèi)間隔區(qū)IGS隔開(kāi)相鄰的兩個(gè)重復(fù)單元[64]。由于不同序列保守性不同，可鑒定的分類(lèi)水平也不同，具體如表3所示[65]。

表3 DNA測(cè)定序列及可鑒定分類(lèi)水平Table 3 DNA determination sequence and identifiable classification level

（2）DNA標(biāo)記分析

由于技術(shù)手段和標(biāo)記位置不同，技術(shù)種類(lèi)繁多，常見(jiàn)標(biāo)記技術(shù)的名稱(chēng)、技術(shù)核心、遺傳特性、多態(tài)水平、檢測(cè)片段范圍、重復(fù)性分析總結(jié)于表4[62，65]。

DNA測(cè)序和標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用范圍各有偏向性，DNA測(cè)序分析適合鑒定未知菌株的種屬歸類(lèi)，側(cè)重于DNA編碼序列解析和對(duì)比；DNA標(biāo)記有時(shí)需要經(jīng)過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）-電泳來(lái)呈現(xiàn)標(biāo)記效果，更適合分析多個(gè)菌株的遺傳多態(tài)性，對(duì)生物的種類(lèi)、分類(lèi)、樣品的變化情況等方面能有更為直觀的結(jié)果。如何亞濤等[66]從懷地黃內(nèi)分離出內(nèi)生紅曲霉，通過(guò)ITS和18S rDNA測(cè)序得知，該紅曲霉為血紅紅曲霉（M.sanguineus）。YANG C等[1]使用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（random amplified polymorphism DNA，RAPD）和內(nèi)部簡(jiǎn)單重復(fù)序列（inter-simple sequence repeat，ISSR）標(biāo)記，分析了紅曲霉的遺傳多樣性，結(jié)果表明，這兩項(xiàng)基因標(biāo)記技術(shù)都適用于紅曲霉種間的遺傳距離分析，ISSR對(duì)紅曲霉的種間分類(lèi)區(qū)分效果較好而RAPD更適合分析紅曲霉的種內(nèi)差異；SHAO Y等[23]用內(nèi)部簡(jiǎn)單重復(fù)序列和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性對(duì)比分析了紅曲霉的遺傳多樣性，兩種方法的聚類(lèi)分析具有很大的相似性，都能用于描述紅曲霉的種間差異，且符合形態(tài)學(xué)分類(lèi)結(jié)果。

表4 不同DNA標(biāo)記技術(shù)對(duì)比分析Table 4 Comparative analysis of different DNA labeling techniques

3 潛在的紅曲霉分離純化和分類(lèi)鑒定方法

人工智能（artificial intelligence，AI）技術(shù)和檢測(cè)分析技術(shù)不斷在更新?lián)Q代，這些技術(shù)有希望被用于紅曲霉的分離純化與分類(lèi)鑒定之中。

在分離純化方面，流式細(xì)胞技術(shù)和介電電泳技術(shù)可作為備選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)光學(xué)檢測(cè)器捕獲液流系統(tǒng)中被標(biāo)記細(xì)胞的光學(xué)信息信號(hào)從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離，該技術(shù)目前在細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[67]，如果能尋找合適的紅曲霉細(xì)胞標(biāo)記物，使紅曲霉與其他微生物的光信號(hào)相區(qū)分，則能實(shí)現(xiàn)紅曲霉的分離純化；介電電泳技術(shù)能讓電中性微粒在電場(chǎng)作用下發(fā)生極化而受電場(chǎng)作用而定向運(yùn)動(dòng)，根據(jù)運(yùn)動(dòng)速度的不同而使之分離，該技術(shù)目前可實(shí)現(xiàn)礦物顆粒、液滴等非生物物質(zhì)和細(xì)菌、酵母等生物物質(zhì)的分離[68]，若將該方法應(yīng)用于紅曲霉的分離純化，則需要優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件及考慮是否對(duì)樣品進(jìn)行表面修飾。

在分類(lèi)鑒定方面，AI圖像識(shí)別技術(shù)和蛋白質(zhì)組指紋圖譜菌株鑒定技術(shù)可作為備選技術(shù)。用圖像識(shí)別技術(shù)鑒定紅曲霉的原理與形態(tài)學(xué)鑒定分類(lèi)原理一致，其優(yōu)勢(shì)在于可將肉眼觀察轉(zhuǎn)變?yōu)閿?shù)字化的定量定性分析，避免了主觀判斷上的偏差。目前，圖像識(shí)別技術(shù)已經(jīng)在紅曲霉的篩選中進(jìn)行了應(yīng)用，XIA M等[69]提出了一種基于圖像處理和支持向量機(jī)的模具應(yīng)變篩選方法，基于圖像處理技術(shù)識(shí)別紅曲霉的特征，再通過(guò)支持向量機(jī)確定其形態(tài)特性與色素生產(chǎn)的關(guān)系，能夠以不通過(guò)發(fā)酵的方式篩選出高產(chǎn)色素的紅曲霉。蛋白質(zhì)組指紋圖譜菌株鑒定技術(shù)，則基于基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)得特定培養(yǎng)條件下的微生物菌體蛋白質(zhì)組指紋圖譜，通過(guò)和圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)中各種已知物種的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行比對(duì)，從而完成對(duì)未知菌株的快速分型和鑒定，該技術(shù)目前已應(yīng)用于乳酸菌和部分曲霉屬的分型鑒定[70-71]，有望應(yīng)用到紅曲霉的分類(lèi)鑒定中。

4 總結(jié)

在我國(guó)，紅曲霉有上千年的應(yīng)用歷史，主要用于發(fā)酵食品中。目前，很多紅曲發(fā)酵食品如腐乳、紅曲、紅曲黃酒等仍采用傳統(tǒng)發(fā)酵工藝，所用部分紅曲霉菌株尚不明確。應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)從傳統(tǒng)紅曲發(fā)酵食品中分離純化紅曲霉，便于后續(xù)對(duì)該菌株的產(chǎn)酶特性和次級(jí)代謝產(chǎn)物特性進(jìn)行探究。可培養(yǎng)的紅曲霉分離純化方法有直接分離法和排他-分離法兩種，前者操作簡(jiǎn)便但需要不斷重復(fù)，后者分離純化效率高但方法不易構(gòu)建。對(duì)于不同種類(lèi)的紅曲霉，其產(chǎn)酶特性和次級(jí)代謝產(chǎn)物特性不同，對(duì)紅曲霉的鑒定與分類(lèi)有助于更好地認(rèn)識(shí)和利用紅曲霉種質(zhì)資源。目前，對(duì)于紅曲霉屬內(nèi)的物種分類(lèi)尚存在爭(zhēng)議，形態(tài)學(xué)檢索表記錄了13種紅曲霉，NCBI物種分類(lèi)檢索表記錄了19種、國(guó)際公開(kāi)報(bào)道文獻(xiàn)提及了25種；形態(tài)學(xué)鑒定、同工酶分析、DNA分子標(biāo)記是三種常用的鑒定方法，由于鑒定的原理不同，不同鑒定方法下不同紅曲霉的親緣關(guān)系可能不同，要確定紅曲霉的物種信息，需要同時(shí)使用兩種以上的鑒定方法來(lái)共同鑒定。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，未來(lái)將會(huì)有更多技術(shù)被開(kāi)發(fā)用于紅曲霉分離純化與分類(lèi)鑒定中，例如流式細(xì)胞技術(shù)、介電電泳技術(shù)、AI圖像識(shí)別技術(shù)和蛋白質(zhì)組指紋圖譜菌株鑒定技術(shù)等，該項(xiàng)工作也將朝著便捷、廉價(jià)、智能、精準(zhǔn)、高效的方向發(fā)展。