FEZF1-AS1在子宮內膜癌中的表達及其與患者臨床特征的相關性

李功娟，張治洋，樊陽陽

(1.安康市漢濱區第一人民醫院婦科,陜西安康 725000；2.安康市人民醫院婦科，陜西安康 725000；3.陜西省人民醫院產科，西安 710068)

子宮內膜癌(endometrial cancer,EC)是全世界常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一[1-4]。我國EC 發病率呈逐年上升趨勢，其發病率僅次于宮頸癌的婦科腫瘤，在部分城市已成為發病率最高的婦科腫瘤，且病死率居高不下。目前對于EC患者的治療以手術切除為主，以放療和化療作為輔助治療[5-6]，對于EC 仍以早診斷早治療為主要手段對其進行防治，但是目前缺乏有效的，能夠準確對EC 進行預測的生物標志物。研究長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在腫瘤的發生和發展過程中發揮重要作用，能夠作為腫瘤發展和預后的生物標志物[7-8]，如lnc-TP73-AS1 能夠通過作用于miR-200a 依賴的HMGB1/RACE 促進肝癌細胞增殖。FEZ 家族鋅指1 反義RNA 1 (FEZ family zinc finger 1 antisense RNA 1,FEZF1-AS1)首先于2014年被報道在結直腸癌中促進腫瘤轉移，目前研究發現FEZF1-AS1在非小細胞肺癌、胃癌、結直腸癌、骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌等多種腫瘤中均發揮促癌基因的作用，但是尚未見到其在子宮內膜癌中的報道。本研究通過大樣本臨床標本中檢測FEZF1-AS1及其靶基因FEZF1在EC組織中的表達量，并分析其與患者臨床特征之間的關聯，并以此揭示FEZF1-AS1在EC 發生和發展過程中所起的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2010年1月～2018年1月安康市人民醫院收治的172例EC患者為研究對象，年齡35～72歲，平均年齡為47.16±12.73歲；病程1～6個月，平均病程為2.45±0.63月。納入標準：①患者均經病理檢查確診為EC；②病歷資料齊全；③本研究經我院倫理委員會審核通過；④患者自愿參加且均簽署知情書。排除標準：① 嚴重心肝腎功能不全者；②并發其他惡性腫瘤者；③并發精神障礙者；④妊娠或哺乳期女性。

1.2 試劑和儀器 ABI 7500 PCR 儀(美國ABI 公司)，RNA 提取試劑盒(天根生化科技有限公司)，PrimeScript RT reagent Kit 和SYBR Green Quantitative RT-qPCR Kit 購自日本TaKaRa 生物公司。

1.3 方法 采集EC患者的癌組織及其癌旁正常組織，使用石蠟進行標本處理。提取EC患者癌組織及其癌旁正常組織中的總RNA，采用PrimeScript RT reagent Kit 反轉錄成cDNA，以cDNA 為模板特異性擴增，所有實驗均重復三次。qRT-qPCR 程序設定為：94℃預熱3 min，94℃ 30 s，56℃ 35 s，72℃ 25 s，共40個循環。qRT-qPCR 引物序列如下：FEZF1-AS1：F：TTAGGAGGCTTGTTCTGTGT，R：GCGCAGGTACTTAAGAAAGA；GAPDH：F：GTCGATGGCTAGTCGTAGCATCGAT，R：TGCTAGCTGGCATGCCCGATCGATC。

1.4 統計學分析 采用配對t檢驗分析癌組織和對應癌旁正常組織中FEZF1-AS1表達水平的差異，采用χ2檢驗和獨立樣本t檢驗分析不同EC 癌患者臨床特征及疾病進展中FEZF1-AS1表達水平的差異，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 FEZF1-AS1在EC組織中高表達 見圖1。課題組采用實時熒光定量PCR法檢測了172 對EC 癌-正常組織，發現FEZF1-AS1在癌組織中的表達量（0.005 9±0.021 7）顯著高于對應癌旁正常組織（0.001 7±0.005 6）達3.5 倍，差異有統計學意義（P=0.007）。

2.2 FEZF1-AS1表達水平與EC患者臨床特征之間的關系 見表1。分析FEZF1-AS1表達水平[將腫瘤組織中FEZF1-AS1 相對表達量中位數及以上的分為高表達組86例（50.0%），反之為低表達組86例（50.0%）]與EC患者臨床特征之間的關系可見，FEZF1-AS1 高表達與EC患者家族腫瘤史(χ2=6.891，P=0.016)、病理分級(χ2=7.142，P=0.028)、腫瘤分 期(χ2=10.426，P=0.002)、T 分 期(χ2=8.248，P=0.007)和M 分期(χ2=10.405，P=0.002)相關，其余則無相關性。

圖1 FEZF1-AS1在EC 中高表達

3 討論

子宮內膜癌（EC）作為最常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一，給女性健康帶來了極大的危害[9]。文獻報道，子宮內膜癌的高危因素包括較高的雌激素水平、月經初潮時間早、絕經時間、HPV感染等。隨著醫學科學的不斷發展，診斷水平得到顯著提升，這對于子宮內膜癌的早發現和早診斷起到了巨大作用，這也是子宮內膜癌的患病率顯著增加的一個重要原因，但是，在患病率增加的情況下，對于子宮內膜癌的治療卻沒能有一個質的飛躍，子宮內膜癌患者生存期仍然未得到顯著提升，因此，尋找新的治療靶點是子宮內膜癌治療的重中之重。近年的研究發現，lncRNA 在腫瘤的發生和發展中發揮重要調節作用[10-11]。在子宮內膜癌中，亦有少量lncRNA 被報道與其發生和發展相關，如：結腸癌相關轉錄因子1（Colon cancer-related transcription factors 1，CCAT1）能夠通過吸附miR-181a-5p 促進子宮內膜癌細胞增殖[12]；前列腺特異性轉錄1（prostate-specific transcript 1，亦稱PCGEM1）能夠聯合作用STAT3 促進子宮內膜癌發生和發展；X染色體相關非編碼RNA1（X chromosome-linked lncRNA 1，XLEC1）在子宮內膜癌中通過與堿性牛奶蛋白1（milk basic protein 1，MBP-1）協同調控c-myc 依賴性細胞生長。目前尚未見到FEZF1-AS1在子宮內膜癌中所起作用的報道。

本研究通過檢測大樣本臨床組織標本FEZF1-AS1及其靶基因FEZF1 的表達情況，發現FEZF1-AS1及FEZF1在子宮內膜癌組織中均高表達，且二者表達呈正相關。通過分析其表達水平與患者臨床特征之間的關系發現，FEZF1-AS1 高表達與患者家族腫瘤史、病理分級、腫瘤分期、是T 分期和M分期相關。陳娜[13]研究發現FEZF1-AS1在結直腸癌中高表達，且其高表達與腫瘤大小、年齡、性別無關，但與淋巴結轉移、遠端轉移、dukes 分期、腫瘤分化程度顯著相關，且其高表達與結直腸癌患者生存期縮短相關，該研究結論與本研究在子宮內膜癌中的結論相似。本研究中靶基因FEZF1 的表達與前文陳娜[13]在結直腸癌中的研究相似，FEZF1高表達與子宮內膜癌患者家族腫瘤史、病理分級、腫瘤分期、T 分期、N 分期和M 分期相關。且陳娜的研究亦顯示FEZF1-AS1 與FEZF1 存在靶向調控的關系。FEZF1-AS1 定位于7q31.32，該區域常見腫瘤發生的報道。另有研究顯示FEZF1-AS1 能夠通過吸附miR-4443 促進骨肉瘤惡化，在乳腺癌中通過調節miR-30a 的表達促進腫瘤生成。FEZF1-AS1在卵巢癌中高表達并促進卵巢癌惡化。綜上所述，FEZF1-AS1在子宮內膜癌的發生和發展過程中發揮促癌作用，且FEZF1-AS1 的表達與FEZF1 的表達呈正相關。但本研究僅從人群關聯的角度發現二者表達呈正相關，雖已有文獻報道二者在結直腸癌中表達呈正相關，但本研究尚未進一步從細胞和分子層面對其調控機制進行研究，是本研究的不足之處。

表1 FEZF1-AS1表達水平與EC 臨床特征之間的關系[n(%)]