三種試劑檢測血清幽門螺桿菌抗體的比較研究

崔俊華，周佳燁，周 琰，王蓓麗,2，張春燕,2，潘柏申,2，郭 瑋,2

（1.復旦大學附屬中山醫院檢驗科，上海 200032；2.復旦大學附屬中山醫院廈門醫院檢驗科，福建廈門 361015）

自從1983年發現幽門螺桿菌[1](Helicobacter pylori，Hp)以來，眾多研究結果顯示Hp 感染與慢性胃炎、消化道潰瘍、胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤和胃癌相關[2-5]，世界衛生組織（World Health Organization，WHO）的國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC） 將其定為一類致癌物質[6]，而我國幽門螺桿菌現癥感染率平均為55%[7]。目前診斷Hp 感染的方法很多，各有其優缺點。幽門螺桿菌感染的處理-馬斯特里赫特V/佛羅倫薩共識報告[8]中最為推薦的非侵入試驗為尿素呼氣試驗，對無活檢禁忌的患者推薦胃鏡下行快速尿素酶試驗；盡管研究[9-10]也表明這兩種方法的優勢，但抗生素或質子泵抑制劑會干擾這兩種檢測方法[8,11]；相比之下血清學抗體檢測不受類似干擾且操作簡便、無創，可以結合胃蛋白酶原（pepsinogen,PG），PGI，PGII 和PGI/II 的比值用于預測萎縮性胃炎和胃癌的風險[12-15]。本研究以快速尿素酶試驗和尿素呼氣試驗作為Hp 檢測標準，參考第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告[11]的診斷標準，評價三種血清Hp 抗體檢測試劑在診斷Hp 感染中的性能，以供臨床參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年4月，在復旦大學附屬中山醫院同時接受快速尿素酶試驗（rapid urease test，RUT）以及尿素13C呼氣試驗（13C urease breath test，13C-UBT）的患者； 篩選出均未接受過抗幽門螺桿菌治療的80例患者，其中男性患者47例，女性患者33例，年齡24～67歲，并在患者檢查前進行血液樣本的采集。

1.2 儀器與試劑13C-UBT 使用13C-UBT 診斷試劑顆粒（北京勃然制藥有限公司）和HY-IREXB 呼氣檢測儀（廣州華友明康光電科技有限公司），RUT 使用胃幽門螺桿菌診斷試劑盒（福建三強生物化工有限公司）；血清學抗體檢測使用的三種試劑分別是：膠體金法幽門螺桿菌尿素酶抗體檢測試劑盒（A試劑，北京康美天鴻生物科技有限公司），膠乳增強免疫比濁法幽門螺桿菌檢測試劑盒[B試劑，波音特生物科技（南京）有限公司]，裝載于Hitachi7600-030型全自動生化分析儀（日本日立株式會社）進行檢測，抗幽門螺桿菌IgG ELISA試劑盒[C試劑，歐蒙醫學診斷(中國)有限公司]，用科華ST360 酶標儀（上海科華生物工程股份有限公司）進行檢測。

1.3 檢測方法

1.3.113C-UBT 檢測：空腹吹氣收集0 min 呼氣；80～100ml 室溫飲用水送服13C-UBT 診斷試劑顆粒一瓶，靜坐30 min 收集30 min 呼氣。用呼氣檢測儀檢測0 min 呼氣和30 min 呼氣中的13CO2。超基準值( Delta Over Baseline，DOB）≥4.0 為陽性。

1.3.2 RUT 檢測：在反應微孔內加入酶促反應液100μl，將新鮮活檢的胃黏膜樣本置入反應微孔，在室溫孵育5 min 后觀察結果。反應顯紅色為陽性，無反應顯色為陰性，試劑中含有尿素和pH 指示劑。從胃內取出的標本通常呈酸性（pH ＜6.0），一般情況下試劑的顏色不變，如果胃內有Hp 感染，當黏膜標本放入試劑中，Hp所產生的尿素酶則分解尿素產生氨使pH值升高，試劑變為粉紅色。

1.3.3 血清Hp 抗體檢測：靜脈采血立即分離血清，-20℃保存，一周內同時使用三種試劑，按試劑說明書操作對血清中的Hp 抗體進行檢測。膠體金法幽門螺桿菌尿素酶抗體檢測試劑盒檢測結果判讀：質控條帶顯色為有效檢測，檢測條帶顯色結果為血清中的Hp 抗體陽性，檢測條帶未顯色結果為血清中的Hp 抗體陰性；質控條帶未顯色為無效檢測。膠乳增強免疫比濁法幽門螺桿菌檢測試劑盒，檢測結果＜30AU/ml 為血清中的Hp 抗體陰性，結果≥30AU/ml 為血清中的Hp 抗體陽性。抗幽門螺桿菌IgG ELISA試劑盒，檢測結果＜16RU/ml 為血清中的Hp 抗體陰性，結果≥16RU/ml 為血清中的Hp 抗體陽性。

1.4 統計學分析 用SPSS 20.0 統計軟件計算三種血清Hp 抗體檢測試劑盒的敏感度、特異度、準確度、陽性預期值、陰性預期值，并進行卡方檢驗和Kappa 檢驗分別評估三種試劑檢測結果的差異以及與RUT 和13C-UBT 檢測結果的一致性。其中卡方檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義；Kappa 檢驗的κ值越接近1，表明一致性越好；κ值越接近0，表明一致性越差。

2 結果

2.1 Hp 檢測結果 見表1。根據第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告[11]，本研究以RUT 和13C-UBT 任何1 項陽性為Hp 感染診斷標準，80例患者中臨床診斷為Hp 感染的患者56例，臨床診斷無Hp 感染的患者24例。

表1 三種試劑檢測Hp 抗體結果

2.2 三種檢測血清幽門螺桿菌抗體的試劑比較 見表2。A試劑檢出Hp 抗體陽性32例，B試劑檢出Hp 抗體陽性51例，C試劑檢出Hp 抗體陽性59例。A，B 和C 三種試劑檢測結果的差異有統計學意義，A試劑與B試劑、A試劑與C試劑和B試劑與C試劑的χ2分別為30.327，18.983，42.874，均P＜0.001。三種試劑中，C試劑檢測結果與通過RUT 和13C-UBT 檢測診斷的Hp 感染結果一致性最好，κ值為0.722（P＜0.001），準確度達88.75%。

3 討論

從胃組織活檢樣本中分離培養是Hp 診斷的金標準，而且能同時進行抗生素的敏感性試驗是其在臨床應用中獨特的優勢。此外，通過分離培養能夠得到Hp 單個菌株以供后續表型和基因型特征分析試驗，從而能更好地揭示不同表型和基因型的病理特征，為臨床治療提供依據。但是培養周期長，操作相對復雜、樣本質量不合格、延遲運送、暴露于氧氣環境以及轉運溫度的改變都會對分離培養的結果帶來不利影響，同時也會降低其診斷準確度[16]。所以本次實驗未以分離培養Hp 作為診斷標準，而是參考第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告，以RUT 和13C-UBT 任何一項陽性為Hp 感染診斷標準。

表2 三種不同檢測血清HP 抗體試劑的比較（%）

實驗中有16例RUT 陰性而13C-UBT 陽性的結果。RUT 結果直接受到胃鏡取樣的影響，胃中Hp 菌體分布不均和樣本菌量不足會導致檢測結果假陰性，而13C-UBT 能反映胃整體的Hp 感染情況，不受菌體分布不均的影響。入組的患者都未經抗Hp 治療，近期也無使用氫離子泵抑制劑、抗生素和鉍劑，可排除由這些原因造成的結果不一致[8]。盡管在胃中很難檢出Hp 之外的產尿素酶細菌，但是口腔中可能會存在產尿素酶的正常菌群，而在服用13C-UBT 診斷試劑顆粒時這些細菌隨藥物通過口腔、食道進入到胃中而被檢測出，造成假陽性結果。因此，對于RUT 和13C-UBT 矛盾的16例患者的結果，不排除RUT 假陰性和13C-UBT 假陽性的可能。這也是本次實驗的局限所在：以RUT 和13C-UBT檢測結果得出的Hp 診斷結果作為標準來驗證三種血清Hp 抗體檢測試劑用于診斷Hp 的性能，不能完全真實反映Hp 感染和未感染情況。

未經抗Hp 治療的患者若被Hp 感染，血清抗體會持續存在。血清Hp 抗體檢測試驗的優點包括了其診斷準確度不受潰瘍出血、胃萎縮和抗生素或氫離子泵抑制劑使用的影響，這些因素都在其他的侵入性或非侵入性試驗中都會導致假陰性結果的產生。然而，由于血清Hp 抗體效價在根治成功后仍能維持很長時間，不能用其評估根治療法的療效，也不能區分Hp 的近期感染和既往感染。盡管本研究排除抗Hp 治療、近期使用氫離子泵抑制劑、抗生素和鉍劑等影響因素，但是多種原因（胃中Hp菌體分布不均和樣本菌量不足、口腔和食道中細菌的污染、不同表型和基因型Hp 等）以及不同試驗各自的性能差異仍干擾檢測結果準確性，因此本研究中三種血清Hp 抗體檢測試劑結果與RUT 和13C-UBT 檢測結果存在差異。

綜上所述，三種試劑中C試劑檢測結果與RUT 和13C-UBT 的檢測結果一致性最好，以RUT和13C-UBT 的檢測結果作為Hp 診斷標準，C試劑的準確度達到了88.75%，可以作為未經抗Hp 治療患者的Hp 診斷試驗。