生山楂、制何首烏、決明子提取物對高脂血癥模型大鼠調脂作用的初步研究

馮翠娟，王 信，田衛東，李 靜

（1.甘肅衛生職業學院，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州市第二人民醫院，甘肅 蘭州 730046；3.甘肅寶石花醫院，甘肅 蘭州 730060）

高脂血癥可嚴重危害人們的健康，近些年備受關注，成為國內外許多學者研究的熱點。隨著乙肝疫苗的普遍接種以及丙肝標準化治療的實施，高脂血癥已成為未來肝病學發展的主要方向[1-7]。生山楂、制何首烏和決明子是用于高脂血癥治療的常用藥對，在中國藥典2015年版一部成方制劑中，被血脂寧丸、血脂靈片、脂脈康膠囊組方所包含，在群眾中也有大量食療應用。為了進一步研究生山楂、制何首烏、決明子藥對在治療高脂血癥方面的作用，本文以生山楂、制何首烏、決明子提取物對高脂血癥模型大鼠脂代謝的影響做了相關研究，以期為進一步研究提供參考。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

雄性 Wistar大鼠 64只，體重（190±20）g，由中國農業科學院蘭州獸醫研究所提供，使用許可證號：SYXK（甘）2015-0005。

1.2 實驗藥物

1.2.1 受試藥物 山楂、何首烏、決明子藥材飲片均購自蘭州復興厚藥材有限責任公司，經檢驗為合格飲片。以上飲片按照4∶5∶4（日常用量），經煎煮濃縮干燥制成提取物。

1.2.2 陽性對照藥 血脂康膠囊，0.3 g/粒，由北京北大維信生物科技有限公司生產，國藥準字Z10950029（批號：20160107），人臨床用量為1.2 g/日。

1.2.3 高脂飼料配制 本實驗用高脂飼料由北京科澳協力飼料有限公司按基礎飼料+10%豬油+10%蛋黃粉+1%膽固醇+0.2%膽酸鈉配方加工，許可證號：SCXK（京）2014-0010。

1.3 主要試劑

總膽固醇試劑盒（TC，96T，批號：40927）、甘油三酯試劑盒（TG，96T，批號：20161014）、低密度脂蛋白膽固醇試劑盒（LDL-C，96T，批號：20161011）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（HDL-C，96T，批號：20161012）。AST 檢測試劑盒（96T，20161014）、ALT檢測試劑盒（96T，20161014）、SOD 檢測試劑盒（96T，20161010）及MDA檢測試劑盒（96T，20161012）均為南京建成生物工程有限公司產品。蘇木素-伊紅染色試劑盒為北京博奧森生物技術有限公司產品。

1.4 儀器和設備

JYI001電子天平，上海精密儀器有限公司；TDLSO-2B離心機，上海安亭科學儀器廠；752型紫外可見光柵分光光度計，北京光學儀器廠；AU680全自動生化檢測儀，美國貝克曼庫爾特有限公司。

2 實驗方法

2.1 動物分組

普通環境飼養條件，溫度：18℃～29℃，日溫差≤4℃，相對濕度：40%～70%，換氣次數：8～10 次/h，氣流速度：0.1～0.2 m/s，噪聲≤50 dB，自然光照；每日自由取水，自由采食。實驗動物先在實驗環境下以基礎飼料喂養7天，然后正式開始實驗。將大鼠分為6組：正常組，模型組，生山楂、制何首烏、決明子提取物（簡稱SZJ提取物）大劑量組、中劑量組、小劑量組，血脂康組。

2.2 造模評價指標

實驗開始，64只大鼠分為正常組和模型組，正常組（12只）給予基礎飼料，而其余（52只）大鼠均從基礎飼料改為高脂飼料，均自由飲水。各組動物喂養4周后，禁食12 h，各取2只大鼠，眼眶取血測定血脂。結果高脂飼料大鼠血清中TC、TG與正常組比較，差異有顯著性（P＜0.01），并通過肝臟組織切片的病理學觀察，表明Wistar大鼠高脂血癥模型造模成功。

2.3 管理與給藥

2.3.1 分組 （1）正常組10只（基礎飼料+生理鹽水）；（2）模型組10只（高脂飼料+生理鹽水）；（3）SZJ大劑量組10只（高脂飼料+SZJ提取物大劑量，1.434 0 g/kg·d）；（4）SZJ中劑量組 10 只（高脂飼料+SZJ提取物中劑量，0.717 0 g/kg·d）；（5）SZJ小劑量組 10 只（高脂飼料+SZJ提取物小劑量，0.358 5 g/kg·d）；（6）血脂康組10只（高脂飼料+血脂康膠囊，0.096 0 g/kg·d）。

2.3.2 動物喂養 方法如上，實驗造模成功后，正常組給予基礎飼料，其余各組動物繼續喂以高脂飼料，自由飲水。藥物劑量：SZJ提取物劑量根據一般成人臨床用量（0.80 g/kg），按照體表面積換算，得到大鼠等效劑量（0.358 5 g/kg·d），分別按其1倍、2倍和4倍設定大、中、小3個劑量。血脂康膠囊的劑量根據一般成人臨床用量（1.20 g/日·人，相當于0.02 g/kg），按體表面積換算給藥，即0.096 0 g/kg。給藥方法：正常組、模型組給予等體積生理鹽水；SZJ提取物大、中、小劑量組分別給予相應劑量的混懸液；血脂康組給予血脂康膠囊混懸液。所有大鼠均給藥2 mL，各組大鼠每日灌胃一次，連續8周。

2.4 指標檢測

2.4.1 體重 實驗期間每日稱取剩余飼料量，比較各組大鼠平均進食量、活動及毛發等情況。每周測量大鼠體重一次，以比較各組大鼠體重變化情況。

2.4.2 大鼠血清生化指標的測定（1）血樣標本采集。所有大鼠在藥物實驗8周停喂飼料，禁食12 h，采用乙醚吸入式麻醉，在大鼠腹部做切口打開腹腔，暴露腹主動脈，用注射器進行腹主動脈采血4～5 mL，放于試管靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，收集于EP管中，置于-80℃冰箱保存備用。（2）血清生化指標測定方法。所有指標均采用貝克曼AU680全自動生化檢測儀進行測定，操作嚴格按試劑盒說明書進行。

2.5 統計學方法

使用SPSS 19.0 for Windows軟件進行數據統計分析。

3 結果

3.1 給藥前后各組大鼠體重的比較（見表1）

由表1可見，非酒精性高脂血癥模型組大鼠給藥前后體重增重與正常組比較，差異具有顯著性（P＜0.05）。實驗末，各藥物治療組大鼠與模型組比較，體重增重明顯減少（P＜0.05）。而各藥物治療組大鼠體重增加與正常組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 給藥前后各組大鼠體重的比較（±s，g）

表1 給藥前后各組大鼠體重的比較（±s，g）

注：與模型組均值比較，*P＜0.05

組別n 體重增重4周1 0周正常組模型組S Z J提取物大劑量組S Z J提取物中劑量組S Z J提取物小劑量組血脂康組1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 2 1 8.3±1 6.4 2 4 0.0±1 8.2 2 3 5.4±1 7.8 2 3 9.3±1 6.6 2 3 0.9±1 9.8 2 2 9.7±1 7.5 2 9 6.7±2 9.7 3 5 3.5±4 5.1 2 9 5.1±2 8.6 2 8 6.3±1 9.4 3 0 7.7±2 7.5 3 1 2.3±2 6.6 7 8.4*1 1 3.5 5 9.7*4 7.0*7 6.8*8 2.6*

3.2 SZJ提取物對肝指數的影響

與正常組比較，模型組肝指數升高較為明顯（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組肝指數明顯降低（P＜0.05）；SZJ提取物大、中劑量組肝指數較血脂康組降低更明顯（P＜0.05），SZJ提取物小劑量組肝指數與血脂康組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組肝指數比較，差異具有統計學意義（P＜0.05），對藥物有劑量依賴性，SZJ提取物大、中劑量組療效較小劑量組好，見表2。

表2 SZJ提取物對肝指數的影響（±s）

表2 SZJ提取物對肝指數的影響（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，※P＜0.05

組別n 肝指數正常組模型組SZJ提取物大劑量組SZJ提取物中劑量組SZJ提取物小劑量組血脂康組10 10 10 10 10 10 2.81±0.29#△4.03±0.26*△3.05±0.38*#△※3.36±0.60*#△※3.72±0.35*#※3.60±0.32*#

3.3 大鼠血清生化指標測定

3.3.1 正常組與高脂飼料各組血脂水平比較 喂養4周后，高脂飼料各組實驗大鼠血清TC、TG水平與正常組比較，均有顯著升高（P＜0.05），說明Wistar大鼠非酒精性脂肪肝動物模型造模成功，見表3。

表3 喂養4周后大鼠血脂變化（±s，mmol/L）

表3 喂養4周后大鼠血脂變化（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05

組別TG正常組高脂飼料各組TC 0.62±0.06 1.09±0.22*1.83±0.15 2.45±0.19*

3.3.2 SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠血脂相關指標的影響（1）SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響。與正常組比較，模型組大鼠血清 TC、TG顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組 TC、TG 均降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大劑量組TC的含量降低（P＜0.05），其余SZJ劑量組TC、TG降低作用不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，大劑量組TC、TG降低明顯（P＜0.05），略顯劑量依賴性，見表4。

表4 SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響（±s，mmol/L）

表4 SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物中、小劑量組比較，※P＜0.05

組別n T G正常組模型組S Z J提取物大劑量組S Z J提取物中劑量組S Z J提取物小劑量組血脂康組1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 T C 0.5 7 1±0.0 8 6#0.9 8 4±0.1 3 7*0.6 0 7±0.1 4 3*#△※0.7 5 2±0.1 7 6*#△0.7 4 7±0.0 8 6*#△0.7 0 3±0.1 2 9*#1.9 2 3±0.0 4 6 2.4 3 5±0.5 7 3*1.8 9 1±0.2 4 8#△※2.2 3 2±0.1 9 6*△2.1 4 9±0.2 0 8*△1.5 3 7±0.1 1 2*#

（2）SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響。與正常組比較，模型組大鼠血清 HDL-C降低、LDL-C升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中劑量組LDL-C降低（P＜0.05），SZJ提取物 3個劑量組 HDL-C 升高（P＜0.05）；與血脂康組相比，SZJ提取物大劑量組的HDL-C升高（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組對LDL-C降低程度不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，對LDL-C、HDL-C含量影響有劑量依賴性，大、中劑量組療效較小劑量組好，見表5。

表5 SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響（±s，mmol/L）

表5 SZJ提取物對非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n LDL-C HDL-C正常組模型組SZJ提取物大劑量組SZJ提取物中劑量組SZJ提取物小劑量組血脂康組10 10 10 10 10 10 0.502±0.214#△1.225±0.415*△0.917±0.495*#△※0.985±0.261*#△※1.362±0.192*#△0.699±0.580*#1.808±0.108#△0.925±0.115*△1.385±0.073*#△※1.132±0.231*#※1.093±0.159*#1.212±0.089*#

（3）SZJ提取物對血清SOD和MDA的影響。與正常組比較，模型組血清SOD降低、MDA升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組 SOD 顯著升高（P＜0.05），SZJ提取物大、中劑量組MDA降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大劑量組 SOD 水平升高（P＜0.05），MDA 水平降低（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組在升高 SOD、降低MDA方面對藥物有劑量依賴性，大、中劑量組療效較小劑量組要好，見表6。

表6 SZJ提取物對血清SOD和 MDA的影響（±s）

表6 SZJ提取物對血清SOD和 MDA的影響（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）正常組10212.34±25.14#△4.78±0.92#模型組10128.61±18.67*△5.92±0.95*△SZJ提取物大劑量組10168.45±16.07*#△※4.57±1.15#△※SZJ提取物中劑量組10155.31±8.17*#※5.19±1.28#※△SZJ提取物小劑量組10144.08±19.26*#△5.70±1.31*△血脂康組10151.62±19.33*#4.74±1.29#

（4）SZJ提取物對肝功能的影響。與正常組比較，模型組血清 ALT和AST均升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組的ALT和AST明顯降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組ALT的含量明顯降低（P＜0.05），SZJ提取物各組降 AST 作用不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，三者血清ALT和AST的降低對藥物有劑量依賴性，見表7。

表7 SZJ提取物對肝功能的影響（±s，U/L）

表7 SZJ提取物對肝功能的影響（±s，U/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n AST ALT正常組10169.26±17.28#△25.312±3.128#△模型組10240.17±29.33*△60.071±18.753*△SZJ提取物大劑量組10201.75±51.84*#△※33.513±12.501*#△※SZJ提取物中劑量組10209.97±38.06*#△※39.207±8.994*#△※SZJ提取物小劑量組10225.36±41.88*#△44.182±11.875*#△血脂康組10189.18±19.13*#47.631±11.640*#

4 討論

（1）一般狀態觀察。正常組大鼠精神狀態良好，活潑好動，皮毛光澤色白，進食及大便正常。實驗早期高脂飼料各組部分大鼠出現腹瀉、納食減少，7天后逐漸恢復正常；實驗后期模型組大鼠體毛暗淡無光澤、蓬松，精神萎靡，食欲減退，行動遲緩，部分出現稀便，說明血脂升高后機體會出現脾氣虛的表現；后期血脂康組部分出現軟便；后期SZJ提取物各劑量組與模型組比較，活動、精神、體毛、大便基本正常。實驗期間各組大鼠均無死亡。（2）生山楂、制何首烏、決明子提取物能夠調節血脂代謝，顯著降低 TC、LDL-C、MDA、ALT 和肝指數，升高 HDL-C、SOD，使肝細胞脂肪變明顯減輕，具有防治非酒精性高脂血癥并保護肝臟的作用，其具體機制仍需進一步研究。（3）在選擇陽性對照組藥物時，我們選擇了血脂康膠囊，因為它作為國家藥品基本目錄中的唯一純中藥降血脂制劑，主要起效成分為洛伐他汀及其類似物，以其作為陽性對照藥物，既比較了中藥和西藥在治療方面各自的特征，又能為降血脂的純中藥制劑提供新的選擇。臨床和實驗研究均顯示：它可明顯降低血中膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋白 B（Apo B）的含量[8]，增加低密度脂蛋白（LDL）受體活性[9]，減輕脂質過氧化[10-13]，減輕脂質沉積于內膜，從而起到降血脂的作用，同時也可進一步評價此藥在臨床上的調脂藥效。